PowerPoint Sunusu
PowerPoint Sunusu
PowerPoint Sunusu
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
MİKROBİYOLOJİ<br />
LABORATUVARINDA<br />
UYULMASI GEREKEN<br />
KURALLAR
Kurallar<br />
• Laboratuvar saatinde geç kalan öğrenciler, eğitim<br />
başladıktan sonra laboratuvara alınmayacaktır.<br />
Laboratuvarlar devamlılık arzettiği için ilk saate<br />
gelmeyen öğrenci ikinci saate alınmayacaktır.<br />
• Laboratuvarda uygun ve temiz önlükler<br />
giyilecektir.<br />
• Laboratuvara yiyecek veya içecek<br />
getirilmemelidir.<br />
• Masalara kişisel eşyalar konulmamalıdır.<br />
• Alev kaynağı ve mikroorganizmalar ile temasın<br />
önlenmesi için uzun saçlar toplanmalıdır
Kurallar<br />
• Özeler kullanımdan önce ve sonra sterilize<br />
edilmelidir.<br />
• Sıvı besiyerleri sporlara konmalıdır<br />
• Çalışma alanı kontamine olursa alkol ile<br />
temizlenmelidir.<br />
• Masalar, mikroskoplar ve kullanılan diğer<br />
gereçler çalışma bittikten sonra<br />
temizlenmelidir.<br />
• Laboratuvardan ayrılmadan önce eller<br />
yıkanmalıdır.
Kurallar<br />
• Her bir laboratuvar için öğrenci<br />
gördüklerini yazarak ve çizerek<br />
kaydetmelidir.
Klinik Örneklerin Ekimi ve<br />
Kültürlerin Değerlendirilmesi<br />
1. gün
Klinik<br />
örnek<br />
Yanlış<br />
besiyerine<br />
ekim<br />
Laboratuvar<br />
hataları<br />
Yanlış<br />
sonuç<br />
Test<br />
tekrarı<br />
Gereksiz<br />
antibiyotik<br />
kullanımı
Toplama Kapları<br />
Falcon tüpü<br />
Balgam,<br />
idrar...<br />
Steril kap<br />
idrar,balgam...<br />
Steril olmayan kap<br />
dışkı...
Taşıma besiyeri<br />
Kullanıma hazır<br />
Kullanılmış
Anaerobik Taşıma Sistemi<br />
tablet sıvı pamuk pamuk sıvı pamuk<br />
eküvyon
Mikrobiyolojik inceleme<br />
• Makroskopik incelenmesi<br />
• Mikroskopik inceleme<br />
• Kültür<br />
– Besiyerinin seçimi<br />
– Ekim<br />
– İnkübasyon<br />
– Değerlendirme (Varsa direkt yayma ile birlikte)<br />
• Kolonilerin makroskopik incelemesi<br />
• Kolonilerin mikroskopik incelemesi<br />
• Manuel testler<br />
• Otomatize veya yarı-otomatize sistem<br />
• Antibiyotik duyarlılık<br />
• Raporlama
Makroskopik inceleme<br />
• İdrar<br />
– Renk<br />
– Bulanıklık<br />
• Dışkı<br />
– Kan, mukus varlığı<br />
– Sulu dışkı<br />
• Püy<br />
– Kan<br />
• Boğaz<br />
– .<br />
• Balgam<br />
– Kan, mukus, pürülan materyal
Mikroskopik inceleme<br />
• Örnekten direkt preparat<br />
hazırlanması<br />
– Islak preparat<br />
• Boyasız inceleme<br />
• Lugol ile boyama<br />
• Çini mürekkebi ile boyama<br />
• …<br />
– Tespit edilmiş preparat<br />
• Gram boyama<br />
• Metilen mavisi ile boyama<br />
• Giemsa ile boyama<br />
• …
Kültür<br />
– Besiyerinin seçimi<br />
– Ekim<br />
– İnkübasyon<br />
– Değerlendirme (Varsa direkt preparat<br />
ile birlikte)<br />
• Kolonilerin makroskopik incelemesi<br />
• Kolonilerin mikroskopik incelemesi<br />
• Manuel testler<br />
• Otomatize veya yarı-otomatize ticari<br />
tanımlama -/+ antibiyogram sistemleri<br />
• Antibiyotik duyarlılık
Besiyeri seçimi<br />
Klinik örneğe göre uygun besiyeri seçilir.<br />
• Adi agar<br />
• Zenginleştirilmiş: Kanlı agar, çikolata agar<br />
• Seçici: MacConkey, EMB agar<br />
• Ayırdettirici:<br />
– Kanlı agar: Hemoliz<br />
– MacConkey agar,EMB agar: Laktoz kullanımı<br />
– SS agar: Laktoz kullanımı, H 2 S oluşumu
Örneğe göre besiyeri seçimi<br />
• İdrar: Kanlı agar, EMB agar<br />
• Boğaz: Kanlı agar<br />
• Balgam , BAL, DTA: Kanlı agar, EMB agar, çikolata agar<br />
• Dışkı: EMB agar, SS agar<br />
• Kan: Kan kültürü şişesi<br />
• BOS: Kanlı agar, EMB agar, çikolata agar<br />
• Steril vücut sıvıları: Kanlı agar, EMB agar<br />
• Püy, yara: Kanlı agar, EMB agar<br />
• Doku, ameliyat materyali: Kanlı/EMB agar, örnek sıvı besiyeri<br />
içine<br />
• Vajen: Kanlı agar, EMB agar, çikolata agar, antibiyotikli<br />
Columbia agar<br />
• Üretral akıntı: Koyun kanlı/EMB agar, çikolata agar
İstenen kültüre göre besiyeri<br />
seçimi<br />
• Anaerob kültür: Schaedler, fenil etanol, BBE agar,<br />
tiyoglukolatlı buyyon, ek olarak kanlı/EMB ve çikolata<br />
agarlara aerob kültür<br />
• Tüberküloz kültürü: Loewenstein-Jensen besiyeri,<br />
Middlebrook besiyeri<br />
• Difteri: Loeffler besiyeri, tellüritli kanlı agar<br />
• Boğmaca: Bordet-Gengou besiyeri<br />
• Kolera: TCBS agar, alkalen peptonlu su<br />
• EHEC: Sorbitollü MacConkey agar<br />
• Yersinia: CIN agar<br />
• Helicobacter<br />
• Campylobacter<br />
• Vankomisin dirençli enterokok<br />
• ………….
Zenginleştirilmiş besiyerleri<br />
• Temel besiyerlerine kan, yumurta,<br />
serum gibi besleyici maddelerin<br />
eklenmesiyle elde edilen, ve çoğu<br />
mikroorganizmanın üreyebildiği<br />
besiyerleri<br />
– Kanlı agar<br />
– Çikolata agar
Seçici besiyerleri<br />
• İçlerinde belli bir mikrooganizma<br />
dışındakilerin üremesini engelleyen maddeler<br />
içeren besiyerleri<br />
– EMB veya MacConkey agar<br />
– Antibiyotikli çikolata agar (Thayer-Martin agar)
Ayırdedici besiyerleri<br />
• İçerdikleri ayıraçlar sayesinde, benzer<br />
bakterilerin farklı koloniler oluşturmasını<br />
sağlayan besiyerleri<br />
– Kanlı agar<br />
– EMB veya MacConkey agar
• Sıvı örnek<br />
– Tek koloni ekim:<br />
• Dışkı<br />
• Balgam<br />
– Kantitatif ekim<br />
• İdrar<br />
• BAL, DTA<br />
• Kateter<br />
• Sürüntü<br />
– Tek koloni ekim<br />
• Püy<br />
• Boğaz<br />
• Doku<br />
Ekim
• Üreyebilen<br />
her çeşit<br />
bakteriden<br />
tek koloni<br />
elde<br />
edilmeye<br />
çalışılır.<br />
Tek koloni ekim yöntemi
Kantitatif ekim<br />
• Belirli miktarda sıvı<br />
besiyerine<br />
konmalıdır.<br />
– İdrar için 10µL (bir<br />
öze dolusu)<br />
• Sonrasında, üreyen<br />
koloniler sayılarak<br />
mililitredeki bakteri<br />
sayısı belirlenir.
İdrar<br />
• Besiyeri: Kanlı agar, MacConkey agar<br />
• Ekim:<br />
– Kanlı agar kantitatif ekim: 10μL (bir öze dolusu)<br />
– EMB agar tek koloni ekim: 10μL (bir öze dolusu)<br />
• İnkübasyon: Normal atmosfer, 36-/+2ºC, bir<br />
gece
Dışkı<br />
• Besiyeri: MacConkey agar, SS agar<br />
• Ekim: Tek koloni ekim<br />
• İnkübasyon: Normal atmosfer, 36-/+2ºC,<br />
bir gece
Püy, yara, doku, dren mayi,<br />
ameliyat materyali<br />
• Besiyeri: Kanlı agar, MacConkey agar,<br />
• Ekim: Tek koloni ekim<br />
• İnkübasyon: Normal atmosfer, 36-/+2ºC,<br />
bir gece
• Besiyeri: Kanlı agar<br />
Boğaz<br />
• Ekim: Tek koloni ekim, besiyerine yarık<br />
açılarak<br />
• İnkübasyon: Normal atmosfer, 36-/+2ºC,<br />
bir gece
Balgam (2. gün gösterilecek)<br />
• Besiyeri: Kanlı agar, MacConkey agar,<br />
çikolata agar<br />
• Yayma: 2 adet<br />
• Ekim: Tek koloni<br />
• İnkübasyon: Mumlu kavanoz
İnkübasyon<br />
• Uygun sıcaklık<br />
– 35-37°C’de<br />
• Uygun atmosfer<br />
– Aerop (etüv)<br />
– %5 CO 2 ’li (mumlu kavanoz veya CO 2 ’li etüv)<br />
– Anaerop<br />
– Mikroaerofilik<br />
• Uygun süre<br />
– 16-18 saat (bir gece)<br />
– 24 saat<br />
– 48 saat<br />
– 7 gün<br />
– …
1. gün<br />
• Ön masa<br />
– Toplama kapları<br />
• Steril idrar kabı<br />
• Steril olmayan dışkı<br />
kabı<br />
• Steril falcon tüp<br />
• Taşıma besiyeri<br />
• Her masa<br />
– Klinik örnekler<br />
• İdrar: Kanlı ve MacConkey<br />
agar<br />
• Dışkı: MacConkey ve SS agar<br />
• Püy: Kanlı ve MacConkey agar<br />
• Boğaz: Kanlı agar<br />
– Ekim yapılacak besiyerleri<br />
• Kanlı agar<br />
• MacConkey agar<br />
• SS agar
Klinik Örneklerin Ekimi ve<br />
Kültürlerin<br />
Değerlendirilmesi<br />
2. gün
Kültürlerin değerlendirilmesi<br />
• Enfeksiyon etkeni olan<br />
mikroorganizmanın üretilmesi<br />
• Mikroorganizmanın tanımlanması<br />
• -/+ antibiyotik duyarlılık
Evaluation of direct smear
Evaluation of direct smear
Evaluation of direct smear
Evaluation of direct smear
Kültür plağının<br />
değerlendirilmesi<br />
• Örnek nedir? Steril bir örnek mi, florası olan<br />
bir vücut bölgesinden mi alınmış?<br />
• Üreme var mı?<br />
• Üreyen koloni sayısı ne kadar? (Kantitatif<br />
ekimler için)<br />
• Kaç çeşit?<br />
• Belirli bir patojen aranıyorsa üreyen<br />
koloniler arasında özellikleri ona uyan var mı?
Kültürlerin değerlendirilmesi<br />
• Kolonilerin makroskopik incelemesi<br />
• Kolonilerin mikroskopik incelemesi<br />
• Manuel testler<br />
• Otomatize veya yarı-otomatize ticari<br />
tanımlama<br />
• Antibiyotik duyarlılık
Kolonilerin makroskopik<br />
incelemesi<br />
• Koloni morfolojisi<br />
• Besiyerinin ayırt<br />
ettirici özellikleri<br />
– Kanlı agar:<br />
Hemoliz<br />
– MacConkey agar:<br />
Laktozu kullanma<br />
– SS agar: H2S<br />
oluşumu
Hemoliz<br />
• Kanlı agar<br />
– Alfa-hemoliz<br />
– Beta-hemoliz<br />
– Gama hemoliz
Laktoz Kullanımı<br />
• Mac Conkey agar<br />
– Laktoz pozitif<br />
– Laktoz negatif
H2S oluşumu<br />
• SS agar:<br />
– H2S pozitif<br />
– H2S negatif
Kolonilerin mikroskopik<br />
• Gram boyama<br />
incelemesi
Manuel testler<br />
• Katalaz<br />
• Koagülaz<br />
• Oksidaz<br />
• CAMP testi<br />
• %6,5 tuzlu besiyerinde üreme<br />
• Safralı ve eskülinli besiyerinde üreme<br />
• Optokin duyarlılığı<br />
• Basitrasin duyarlılığı<br />
• Biyokimyasal testler:<br />
– Üç şekerli demirli besiyeri<br />
– IMVIC<br />
– Üreli besiyeri<br />
– …
Ticari tanımlama sistemleri
Antibiyotik duyarlılık testleri
2. gün<br />
• Ön masa<br />
– Balgam yayması<br />
örnekleri<br />
– Balgam kültürü<br />
plakları<br />
• Her masa<br />
– Kültür plaklarının<br />
değerlendirilmesi<br />
– Gram boyama
Gram boyama<br />
• Kristal viyole (1 dk)<br />
• Su ile yıka<br />
• Lugol (1 dk)<br />
• Su ile yıka<br />
• Alkol (30 sn)<br />
• Su ile yıka<br />
• Sulu fuksin (30 sn)<br />
• Su ile yıka
Change language