streptokok enfeksiyonu ile ilişkili pediatrik otoimmün nöropsikiyatrik ...
streptokok enfeksiyonu ile ilişkili pediatrik otoimmün nöropsikiyatrik ...
streptokok enfeksiyonu ile ilişkili pediatrik otoimmün nöropsikiyatrik ...
You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
<strong>ile</strong> uzatılır. Denaturasyon, annealing(yapışma) ve DNA sentezi döngüleri bir çok kez<br />
tekrarlanır. Amplifikasyonun bir döngüsünün ürünleri bir sonraki aşama için kalıp görevi<br />
gördüğünden her bir döngü temel olarak DNA ürününün miktarını ikiye katlar 81 .<br />
2.1. PCR’ın Mekanizması<br />
PCR, çift iplikli bir DNA molekülünde, hedef diz<strong>ile</strong>re iki oligonükleotid primerin<br />
bağlanması ve uzaması prensibine dayanır. Oligonükleotid primerler, kalıp DNA molekülü<br />
yüksek sıcaklıkta denatüre edildikten sonra, tek iplikli DNA molekülleri üzerinde<br />
kend<strong>ile</strong>rine komplementer olan bölgelerle melezlenirler. Primerlerin, spesifik olan hedef<br />
diz<strong>ile</strong>rle birleşmesi düşük sıcaklıkta olur. DNA polimeraz enzimi, uygun tampon ve dört<br />
eşit dNTP varlığında primerin 3 ı OH ucundan uzamasını sağlar. Böylece kalıp DNA<br />
ipliğine tamamlayıcı olan yeni DNA molekülü sentezlenmiş olur.<br />
Bir PCR döngüsü, denaturasyon, primerlerin bağlanmsı (annealing) ve uzama<br />
(extansion) olarak adlandırılan üç aşamadan oluşur. Bu üç aşamanın ard arda takrarlanması<br />
<strong>ile</strong> DNA fragmentleri katsayısı artar. Bu üssel artışın nedeni, bir döngü sonucu sentezlenen<br />
ürünün, ardışık döngüde, diğer primer için kalıp görevi yapmasından kaynaklanır.<br />
2.2. PCR’ın Basamakları<br />
Polimeraz zincir reaksiyonunun bir döngüsü 3 basamakta gerçekleşir.<br />
2.2.1. Denaturasyon<br />
Çift zincirli DNA molekülünün sıcaklıkla ayrılmasıdır. G + C’ce zengin diz<strong>ile</strong>rde<br />
denaturasyon ısısı artabilir. Denaturasyonun tam olmaması verimi düşürür ve DNA’nın<br />
uzun süre yüksek sıcaklıkta bekletilmsi ise DNA polimeraz aktivitesinin düşürür.<br />
61
Change language