streptokok enfeksiyonu ile ilişkili pediatrik otoimmün nöropsikiyatrik ...
streptokok enfeksiyonu ile ilişkili pediatrik otoimmün nöropsikiyatrik ...
streptokok enfeksiyonu ile ilişkili pediatrik otoimmün nöropsikiyatrik ...
You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
EK-2. PCR<br />
Günümüzde PCR olarak bilinen, in vitro DNA amplifikasyonunu ilk kez 1974’te<br />
kimyasal gen sentezine alternatif olarak Panet ve Khorana tarafından tanımlanmıştır. Bu<br />
yöntem adını, 1985’te tek kopya genlerinin çoğaltılmasını tanımlayan, Mullis ve<br />
arkadaşlarından almıştır. Bu tarihte ilk defa Saiki ve arkadaşları tarafından orak hücre<br />
anemisinin teşhisi amacıyla geliştirilmiş ve kullanılmıştır. 1988 yılında Thermus aquaticus<br />
adlı bakteriden yüksek sıcaklıklara dayanıklı DNA polimeraz enziminin izole edilmesi ve<br />
bu enzimin DNA amplifikasyonu için kullanılması, PCR’ın kullanım alanlarını<br />
genişletmiştir.<br />
1980’li yılların ortalarında geliştirilmesinden sonra temel moleküler biyolojik<br />
araştırmalarda (klonlama, dizi analizi ve DNA haritalaması gibi) ve birçok hastalığın ( Orak<br />
hücre anemisi, kistik fibrosis, frag<strong>ile</strong> X sendromu, AIDS, lösemi vb.) DNA temeline<br />
dayanan tanıları için de klinik tıpta, hızla kullanılmaya başlanmıştır. PCR <strong>ile</strong> insan genomik<br />
DNA’sı gibi kompleks DNA kalıplarından, spesifik DNA parçalarının sentezinin birkaç<br />
saat içinde gerçekleştir<strong>ile</strong>bilir hale gelmesi, bu teknolojinin yaygınlaşmasına neden<br />
olmuştur.<br />
PCR, genetik materyaller (DNA ve RNA üzerinde seçilmiş, bir veya birden fazla<br />
bölgenin, kimyasal olarak sentezlemiş olan oligonükleotid primerler ve saflaştırılarak elde<br />
edilmiş olan Taq polimeraz enzimleri kullanılarak bir otomatik thermocycle sistem<br />
yardımıyla in vitro şartlar altında çoğaltılma metodudur.<br />
PCR işleminde amaç, dizilimi bilinen iki bölge arasında bulunan bir DNA parçasını<br />
amplifiye etmektir. DNA polimeraz tarafından katalizlenen bir seri sentetik tepkimenin<br />
primerleri olarak iki oligonükleotid kullanılır. Bu nükleotidler tipik olarak farklı diz<strong>ile</strong>re<br />
sahiptir. Bu oligonükleotidler, kalıp DNA’nın karşı diz<strong>ile</strong>rinde uzanan ve amplifiye olacak<br />
DNA’nın parçasına eştir. Kalıp DNA ilk önce iki oligonükleotidin ve dört<br />
deoksiribonükleozid trifosfatın (dNTP) varlığında ısıyla denatüre edilirler. Daha sonra<br />
tepkime karışımının ısısı, oligonükleotid primerlerinin kalıp diz<strong>ile</strong>re yapışması için<br />
düşürülür. Primerler yapıştıktan sonra uygun sıcaklığa çıkarılarak DNA polimeraz enzimi<br />
60
Change language