streptokok enfeksiyonu ile ilişkili pediatrik otoimmün nöropsikiyatrik ...

• Süre sonunda plak çıkartıldı.
• Plak soğuduktan sonra bütün kuyucuklara 100 µl yıkama tamponu eklendi.
• Plağın ağzı kapatıldı ve 3000g’de 4 dakika santrifüj edildi.
• Süpernatant kısmı çırpma yöntemi ile uzaklaştırıldı.
• Bu işlem ard arda 2 defa daha tekrarlandı.
• Son santrifügasyon işlemi sırasında sape stok ve sape tampon karışımı hazırlandı
(Çizelge 4).
E. İşaretleme Aşaması
• 3. santrifüj işlemi bittikten sonra süpernatant kısmı atıldı.
• Plakta her kuyucuğa 50 µl hazırlanmış olan sape tampon karışımı eklendi..
• Plağın ağzı kapatıldı ve vortekslendi .
• Plak 5 dakika 60 o C’ye programlı Thermal Cycler’da inkübe edildi.
• Süre sonunda plak çıkartıldı ve soğumaya alındı.
• Bütün kuyucuklara 100 µl yıkama tamponu eklendi.
• Plağın ağzı kapatılıp 3000g’de 4 dakika santrifüj edildi.
• Süpernatant kısmı uzaklaştırıldı.
• Bütün kuyucuklara içerisinde 70 µl olacak şekilde yıkama tamponu eklendi.
• Pipet kullanarak kuyucuklar karıştırıldı ve örnekler veri yorumlaması için kullanılan
okuma plaklarına aktarıldı.
F. Cihaz Okuma ve Değerlendirme Aşaması
• LABScan 100 analiz cihazı açıldı ve ısınması için 30 dakika beklendi.
• Cihaz ısındıktan sonra cihaza önce prime yapıldı.
• Prime işlemi bittikten sonra %70’lik alkol ile yıkama işlemi yapıldı.
• Alkolden sonra tekrar distile su ile yıkama işlemi gerçekleştirildi.
• Rezervuara okuma işleminin gerçekleşebilmesi için shead fluid solusyonu konuldu.
32