streptokok enfeksiyonu ile ilişkili pediatrik otoimmün nöropsikiyatrik ...

15. 1 tuşuna basılarak 200µl kan hacmi seçildi.
16. 2 tuşuna basılarak bu kez 200µl DNA elüsyon hacmi seçildi.
17. ‘START ‘tuşuna basıldı.
18. Çıkan ekranda örnek tüplerinin yeri onaylandı ve devam tuşuna basıldı.
19. Sırasıyla rack üzerindeki pipet ve pipet kabının, elüsyon tüpünün ve kartuşların
yerlerinin doğruluğu cihaz ekranından onaylandı.
20. ‘Start’tuşuna basılarak izolasyon işlemine başlandı.
21. Protokol 15 dakika sürdü.
22. Bu süre sonunda içerisinde izole edilmiş DNA bulunan elüsyon tüpleri çalışma
süresine kadar –20 o C’ye konuldu.
23. Geriye kalan kullanılmış olan disposable sarflar çöpe atıldı.
24. Cihaz temizlendikten sonra arka güç düğmesinden kapatıldı.
3.2.2. HLA Sınıf I ve Sınıf II Allellerinin PCR ile Amplifikasyonu
PCR reaksiyonun hazırlanmasında sırasıyla şu işlemler uygulandı:
A. Hazırlık Aşaması
• PCR cihazı açıldı ve 60 o C inkübasyon programına ayarlanarak başlatıldı.
• Kırılmış buz parçaları hazırlandı.
• Amplifikasyonda kullanılacak olan DNA’lar ve diğer çözeltiler -20 °C’den alınıp
çözdürüldü.
• Laminar air flow kabin içerisinde 96’lık PCR plağı hazırlandı.
• DNA örnekleri ve diğer çözeltiler vortekslendi.
• Bütün çözeltiler (100X SAPE şişesi dışındaki) kutularından çıkartılarak oda ısısında
kullanılmak üzere hazırlandı.
B. Amplifikasyon Aşaması
• Çözülen amplifikasyon çözeltileri buzda korundu.
• DNA 96 kuyucuklu PCR plağına her kuyucuğa 2µl olacak şekilde dağıtıldı.
30