MEME KANSERLİ HASTALARDA CYP19 GENİ KODON 39 Trp/Arg ...

2) Common bölgenin, T allelinin ve C allelinin primerleri 3 ayrı tüpte çalışılarak PCR
yapıldı (Çizelge 6).
Çizelge 6: Optimal amplifikasyonun gerçekleştiği PCR reaksiyonu.
PCR Bileşenleri Final
Kons.
Common Bölge
PCR bileşenleri
24
T alleli PCR
bileşenleri
Primer F1 (100 pmol) 100 pmol 0.25 µl - 0.25 µl
Primer R1 (100 pmol) 100 pmol - - 0.25 µl
Primer F2 (100 pmol) 100 pmol - 0.25 µl -
Primer R2 (100 pmol) 100 pmol 0.25 µl 0.25 µl -
MgCl2 2 mM 2 µl 2 µl 2 µl
10X PCR Tamponu 1X 2.5 µl 2.5 µl 2.5 µl
dNTP 0.2 mM 0.2 µl 0.2 µl 0.2 µl
Taq Polimeraz 1.25 U 0.25 µl 0.25 µl 0.25 µl
Genomik DNA 0.25 µg 1 µl 1 µl 1 µl
C alleli PCR
bileşenleri
Bidistile su 18.55 µl 18.55 µl 18.55 µl
Toplam 25 µl 25 µl 25 µl
İki yöntemle de elde edilen DNA’lara aynı PCR programı uygulandı;
Optimal amplifikasyonun elde edildiği PCR reaksiyonundaki ısı döngüleri:
1- Ön Denatürasyon : 95 °C’de 10 dk.
2- Denatürasyon : 95 °C’de 1 dk.
Yapışma : 54 °C’de 1 dk.
Sentez : 72 °C’de 1 dk.
Toplam döngü : 30
3- Final Sentez : 72 °C’de 5 dk.
Elde edilen PCR ürünleri +4 0 C’de muhafaza edildi.