GİRİŞ VE AMAÇ

3. Boyamanın yapılacağı gün deparafinizasyona ksilen ile devam edildi. Bu işlem
toplam 45 dakika olacak şekilde 10’ar dakikadan 60° C etüvde 3 kez bekletme ve her
10’ar dakikanın ardından 5 dakika dışarıda soğumaya bırakma şeklinde uygulandı.
4. Ksilenin giderilmesi için %96 lık alkol muamelesine geçildi. Kesitler 60 ° C etüvde
10’ar dakikadan 3 kez tutuldu. Her arada 5 dakika dışarıda soğumaya bırakıldı.
5. Lamlar 3 kez distile sudan geçirildi.
6. Dokularda bulunan endojen peroksiti bloke etmek için 7 dakika oda sıcaklığında
Methanolde hazırlanmış %3’lük H2O2 uygulaması yapıldı.
7. Distile sudan geçirilen lamlar pH 7.4 olarak hazırlanmış PBS solüsyonunda 10
dakika bekletildi.
8. Antijen kazanımı için “Cell lab. Citrate buffer pH 6.0 antigen anmasker” (kod No.
CL. I. BC060c) solüsyonu kullanıldı. 90 ml distile suya 10 ml sitrat buffer
solüsyonu ilave edilerek dilüe edildi.
9. Lamlar, hazırlanan sitrat buffer solüsyonu içinde 750 wattlık mikrodalga fırında
toplam 15 dakika olacak şekilde 5’er dakika süreyle kaynatıldı. Her 5 dakika sonunda
sitrat buffer solüsyonunun azalıp azalmadığı kontrol edildi. Azalmış olanların üzerine
distile su eklendi. 10 dakika daha inkübe edildi.
10. Mikrodalgadan çıkarılan lamlar solüsyon içinde oda sıcaklığında 20 dakika soğumaya
bırakıldı.
11. 10 dakika distile suda bekletildi.
12. 5 dakika pH 7.4 olarak hazırlanmış PBS solüsyonunda bekletildi.
13. Reaktiflerin kesit dışına taşmasını engellemek için lamlardaki kesitlerin etrafı
“DAKO-Pen” (kod No. S 2002) ile çizildi.
14. Her bir vaka için ayrı ayrı numaralandırılmış lamlara, oda sıcaklığında, nemli
ortamda CD10 antikoru (CD10/CALLA (Neutral Endopeptidase) Ab-2 (Clone 56C6),
Neo Markers, Fremant CA USA) damlatıldı ve 40dakika bekletildi.
15. Lamlar üzerindeki primer antikorlar distile su ile uzaklaştırılıp, PBS solüsyonuna
alınarak 5 dakika bekletildiler.Lab Corporation=Universal cit (sarı renkte)
Biotinylated Goat Anti-polyvalent (Ref: TP-125-BN LOT:PBN41116) solüsyonu
damlatıldı ve 20 dakika bekletildi.
16. PBS solüsyonu ile 5 dakika yıkanan lamlara, 2 nolu biotine bağlanacak olan
işaretleyici Lab Vision Corporation, Large volume Streptavidin Peroksidase (Ref: TS-
125-HR LOT: SHR 41025 damlatıldı ve 20 dakika daha bekletildi.
26