Diabetes typ 1 - sjukdomen med de kannibalistiska cellerna

Emma NilsonDiabetes typ 1 - sjukdomen med de kannibalistiska cellernaDiabetes typ 1 är en sjukdom där cellerna i kroppens immunförsvar attackerar deegna, friska cellerna, vilket leder till att bukspottkörteln sätts helt eller delvis urfunktion. Detta yttrar sig genom att den drabbade blir trött och orkeslös, törstig,minskar i vikt och får en kraftigt ökad urinproduktion. I allvarliga fall kan personentill och med hamna i koma och måste då till sjukhus.Bukspottkörteln är det organ i kroppen som bl.a. styr produktionen av insulin ochglukagon. Insulin frisätts vid intag av mat och hjälper kroppens celler att ta uppsocker så att kroppen och framför allt hjärnan får energi och orkar arbeta. Glukagonhar motverkande effekt och minskar därmed upptaget av socker i cellen. Detta för attbibehålla en så jämn nivå av blodsockret som möjligt.För att upptäcka om en person har eller kommer att drabbas av diabetes typ 1, tas ettblodprov. Är patienten i riskzonen är det framför allt två typer av antikroppar somattackerar kroppens friska celler (autoantikroppar), som upptäcks med hjälp metodenenzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).Blod kan delas upp i serum och plasma. Den stora skillnaden mellan dessa två är attserum innehåller de ämnen (bl.a. kalcium) som är involverade då proteiner bryts neroch blodet koagulerar. I plasma däremot binds kalcium upp av ämnetethylenediaminetetraacetic acid (EDTA). Plansma är därmed mer stabilt och kan förvarasunder längre tid än serum. Eftersom serumet innehåller kalcium kommer proteiner attbrytas ner. Detta leder i sin tur till att serum inte kan förvaras under en längre tid pga.dess instabilitet. Ett problem är dock att ELISA inte har kunnat användas tillsammansmed plasma eftersom helt friska patienter då felaktigt har visats ha autoantikroppar.I denna studie har jag undersökt om det är möjligt att använda plasma istället förserum i ELISA för att upptäcka dessa autoantikroppar. För att det skulle vara möjligtatt genomföra behövde plasman anta serums egenskaper. Genom att tillsätta en störremängd kalcium än vad EDTA kan ta upp kommer plasman, precis som serumet, attinnehålla en viss mängd kalcium.Resultatet visade att detta fungerade då överskott av kalcium tillsattes. Framföralltgällde det den ena autoantikroppen där tydliga skillnader sågs mellan serum, EDTAplasmaoch EDTA-plasma med kalcium i överskott. Antalet patienter som hadeautoantikroppen i jämförelse med dem som inte hade den var betydligt högre i EDTAplasmaän i serum, men återgick sedan till serums nivå då EDTA-plasma med kalciumi överskott jämfördes. Kliniskt har detta stor betydelse då man nu kan övergå från enradioaktiv metod som idag används för att upptäcka autoantikropparna, till att iställetanvända EDTA-plasma i ELISA.Handledare: Magnus Hillman (Biomedicinskt centrum), Björn Weström (Institutionen för cell- ochorganismbiologi).Examensarbete 20 p i immunologi. Ht 2006Institutionen för cell- och organismbiologi.Diabeteslaboratoriet, Biomedicinskt centrum, Medicinska fakulteten, Lunds universitet.

An improved method for screening GAD 65 antibodies in RSR ELISA- addition of Ca 2+ in excess makes it possible to analyse EDTA plasmawith ELISAAll over Europe large bio banks have been constructed for storage of EDTA plasma due to its stabilesurrounding for the majority of plasma proteins. GAD 65 and IA-2 are the two main autoantigensinvolved in diabetes type 1 and their antibodies are therefore the most important markers forautoimmune diabetes. ELISA and RIA are common techniques for screening of these autoantibodies.ELISA has so far only been possible to perform with sera and not with EDTA plasma due to a highamount of false positive results for the latter. The Ca 2+ concentration in sera is sufficient to activateproteases like thrombin. EDTA captures the Ca 2+ and increase the stability for plasma proteins byinhibiting the Ca 2+ - mediated break down by proteases.The aim of this study was to compare the antibody profiles of GAD 65 Ab and IA-2Ab in sera and EDTAplasma with and without excessive Ca 2+ with ELISA. This to see weather it was possible or not to getthe false positive GAD 65 Ab to disappear and the antibody frequencies to decrease to the samefrequencies as for sera. Next step was to identify disturbing proteins/peptides that differ between serumand EDTA plasma and this was made with a SELDI-TOF MS. The samples were first captured ondifferent chromatographic surfaces depending on their biochemical properties. They were thencrystallised, ionised and attached in a TOF.The results showed a clear increase in antibody frequencies for GAD 65 when running ELISA withEDTA plasma compared to when analysing with sera. The frequencies decreased to serum levels whenadding Ca 2+ in excess. It was not as obvious for the IA-2Ab frequencies but the same pattern was seenwhen comparing the assays in a mountain plot. The study was successful and we could show that theELISA is possible to run with EDTA plasma as well as with sera by just adding a small amount ofCa 2+ . The bio banks loaded with EDTA plasma are now ready to be used in the analysis with ELISA tofind the markers for autoimmune diabetes.Advisors: Magnus Hillman, Björn Weström (Lund University)Degree project, 20 credits in Immunology, Department of Cell and Organism Biology Autumn 2006Diabetes Research laboratory, Faculty of Medicine, Lund University