Bronkoalveolärt lavage

Differentialräkning redovisas i procent fördelning, medan antal mastceller lämpligen
redovisas som antal celler per tio synfält 16 gånger förstoring (förutsatt att man har en känd
cellkoncentration på glaset). Den typiska bilden vid sarkoidos är en förhöjning av lymfocyter
(>15%) med få eller inga granulocyter. Normalt ser man inga mastceller och en förhöjd nivå
(> 10 per tio synfält) indikerar en progressiv aktiv sjukdom [20] (Färgbilagan: figur 2 och 3).
Lymfocytsubtypning
Nästa steg i cellanalysen är subtypning av lymfocyter med hjälp av flödescytometri
(FACscan). Lymfocytpopulationen identifieras med hjälp av scattergram och subtyperna
karakteriseras med fluorescerande antikroppar märkta med olika fluorescerande markörer
(Färgbilagan: figur 4). Vanligen använder man phycoerytrin (rött) samt fluorescein (grönt).
Analys göres på färsk BAL vätska (inom 2 timmar vid +4˚C) . Som alterantiv kan cellerna
fixeras försiktigt i 1% formalin efter inmärkning. Vi har funnit att cellerna därefter håller sig
utmärkt och man får identiska resultat efter upp till en veckas förvaring i kylskåp förutsatt att
proverna bevaras från kontakt med ljus. Proverna klarar sig också i rumstemperatur upp till 48
timmar med samma fixeringsteknik, vilket innebär att man i praktiken kan göra BAL med
inmärkning på ett center och sedan vid behov sända per post för analys på ett annat center
utan förlust av information.
Lymfocytpopulationen analyseras med avseende på innehåll av T-celler (CD3), B-celler
(CD19), T-hjälpar celler (CD4), samt T-suppressor celler (CD8). Vi har även som rutin
använt färgning för NKceller (CD16/56) samt för två aktivitetsmarkörer: IL-2 receptor uttryck
(CD25) och HLA-DR. En lämplig markörrepertoar kan t.ex. vara CD3/CD19, CD3/CD4,
CD3/CD8, CD3/CD16/56, CD3/CD25, samt CD3/HLA-DR.