Bronkoalveolärt lavage

More documents

Recommendations

Info

Analys av celler Även för cellanalys är det viktigt att man standardiserar tekniken då cellutbytet starkt kan variera beroende på vilken teknik man använder. Den vanligaste använda tekniken är cytospin där man siktar på att ha en lämplig cellkoncentration på varje glas (ca 50 000 celler per glas). Vanligen behövs 50-300 µl BALvästka per glas beroende på utgångskoncentrationen. För att undvika att för många celler fastnar i systemet rekommenderas dels att man förfyller cytospinbägaren med en mindre mängd vätska (ca 50 µl), samt har tillräckligt stor centrifugeringshastiget (96 x g i 10 minuter) [19]. Efter att cellerna centrifugerats ned, lufttorkas de och färgas för differentialräkning. Vanligen färgas med May-Grünwald-Giemsa (MGG) för differentialräkning (makrofager, lymfocyter, neutrofiler, eosinofiler). Mast cellsfärgning kräver en något annorlunda fixering. Observera att flertalet mastceller i BAL inte färgas om man fixerar med formalin varför detta bör undvikas. Sur toluidinblå lösning är användbar [20]. Metanolfixering kan också användas [21]. Figur 2. Normal cellbild i BAL med Figur 3. BAL vid sarkoidos. Riklig riklig förekomst av alveolära makrofager. förekomst av lymfocyter i förhållande till antalet alveolära makrofager.
Differentialräkning redovisas i procent fördelning, medan antal mastceller lämpligen redovisas som antal celler per tio synfält 16 gånger förstoring (förutsatt att man har en känd cellkoncentration på glaset). Den typiska bilden vid sarkoidos är en förhöjning av lymfocyter (>15%) med få eller inga granulocyter. Normalt ser man inga mastceller och en förhöjd nivå (> 10 per tio synfält) indikerar en progressiv aktiv sjukdom [20] (Färgbilagan: figur 2 och 3). Lymfocytsubtypning Nästa steg i cellanalysen är subtypning av lymfocyter med hjälp av flödescytometri (FACscan). Lymfocytpopulationen identifieras med hjälp av scattergram och subtyperna karakteriseras med fluorescerande antikroppar märkta med olika fluorescerande markörer (Färgbilagan: figur 4). Vanligen använder man phycoerytrin (rött) samt fluorescein (grönt). Analys göres på färsk BAL vätska (inom 2 timmar vid +4˚C) . Som alterantiv kan cellerna fixeras försiktigt i 1% formalin efter inmärkning. Vi har funnit att cellerna därefter håller sig utmärkt och man får identiska resultat efter upp till en veckas förvaring i kylskåp förutsatt att proverna bevaras från kontakt med ljus. Proverna klarar sig också i rumstemperatur upp till 48 timmar med samma fixeringsteknik, vilket innebär att man i praktiken kan göra BAL med inmärkning på ett center och sedan vid behov sända per post för analys på ett annat center utan förlust av information. Lymfocytpopulationen analyseras med avseende på innehåll av T-celler (CD3), B-celler (CD19), T-hjälpar celler (CD4), samt T-suppressor celler (CD8). Vi har även som rutin använt färgning för NKceller (CD16/56) samt för två aktivitetsmarkörer: IL-2 receptor uttryck (CD25) och HLA-DR. En lämplig markörrepertoar kan t.ex. vara CD3/CD19, CD3/CD4, CD3/CD8, CD3/CD16/56, CD3/CD25, samt CD3/HLA-DR.
Page 1 and 2: Bronkoalveolärt lavage Leif Bjerme
Page 3 and 4: undersökningen, beroende på patie
Page 5: Analys av biokemiska mediatorer De
Page 9: Faktaruta Vid differentialdiagnosti
Page 12: 20. Bjermer L, Rosenhall L, Angstr

Bronkoalveolärt lavage

Create successful ePaper yourself

Delete template?

Save as template?