You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
DNA-extraktion<br />
Elucigene <strong>QST*R</strong>-satser är validerade på Insta<strong>Gen</strong>e-matrixmetoden för DNA-extraktion<br />
och kan utföras i ett enda rör, vilket eliminerar behovet av överföringar rör-till-rör. Andra<br />
extraktionsmetoder har visat sig ge likvärdigt pålitliga resultat, t.ex. Qiagen QIAamp® -<br />
satser.<br />
Insta<strong>Gen</strong>e-metoden för DNA-extraktion beskrivs nedan.<br />
Insta<strong>Gen</strong>e-extraktionsmetoden<br />
Amnionvätska (AF)<br />
Cirka 1–2 ml amnionvätska ska användas.<br />
Korionvilli (CV)<br />
CV-prover ska rengöras noga så att all fastsittande decidua från modern avlägsnas. Det<br />
är viktigt att celler från mer än ett område av provet analyseras och att celler från<br />
mesenkymkärnan finns med. En liten alikvot av cellsuspensionen, som har beretts som<br />
vid konventionell cellodling, rekommenderas för <strong>QST*R</strong>-analys. Detta garanterar att<br />
<strong>QST*R</strong>-resultatet erhålls från samma cellpopulation som den som används för<br />
karyotypanalys.<br />
1. Resuspendera Insta<strong>Gen</strong>e-matrix i magnetomröraren och ställ in på medelhastighet i<br />
minst 5 minuter.<br />
2. Centrifugera provet (AF eller CV) vid 12 000 g i 1 minut för att pelletera cellerna.<br />
3. Avlägsna proverna från centrifugen och kontrollera pelleten visuellt avseende<br />
blodfärgning. Anteckna procentandelen blodfärgning, om sådan finns.<br />
4. Avlägsna och kassera försiktigt supernatanten från pelleten, och se till att pelleten inte<br />
rörs upp. Lämna kvar cirka 10–20 µl supernatant för att resuspendera pelleten.<br />
5. Vortexblanda provet noga.<br />
6. Om du observerar mer än 50 % blodfärgning fortsätter du till steg 7. Om du observerar<br />
mindre än 50 % blodfärgning fortsätter du till steg 8.<br />
7. Tillsätt 200 µl sterilt avjoniserat vatten till cellpelleten. Vortexblanda noga. Centrifugera<br />
vid 12 000 g i 1 minut och avlägsna supernatanten, men lämna kvar 10–20 µl av<br />
supernatanten för att resuspendera pelleten.<br />
Anm. Detta extra tvättsteg hjälper till att lysera de röda blodcellerna och avlägsna hem<br />
som skulle kunna hämma PCR.<br />
8. Tillsätt 200 µl Insta<strong>Gen</strong>e-matrix från steg 1 till proverna med en pipettspets med grov<br />
kaliber, t.ex. 1 000 µl.<br />
Anm. För att optimera extraktionsprotokollet kan den tillsatta volymen av Insta<strong>Gen</strong>ematrix<br />
(Chelex-100-resin) varieras med användning av 100 µl Insta<strong>Gen</strong>e-matrix för små<br />
AF-cellpelletar (knappt synliga), eller 300 µl för stora pelletar (som täcker rörets botten),<br />
CV- och vävnadsprover. Registrera mängden Insta<strong>Gen</strong>e-matrix som har tillsatts varje<br />
prov.<br />
9. Vortexblanda proverna noga och inkubera vid 100 °C i 8 minuter i ett värmeblock eller<br />
vattenbad.<br />
AN000BY001SV Rev.07/2012 Sida 9 av 36
Change language