You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
10. Vortexblanda noga igen vid hög hastighet i 10 sekunder.<br />
11. Centrifugera proverna vid 12 000 g i 3 minuter. Supernatanten innehåller det<br />
extraherade DNA:t.<br />
12. Fortsätt till PCR-förberedelserna eller förvara det extraherade DNA:t vid –20 °C tills<br />
det ska användas.<br />
DNA-koncentration<br />
Vi rekommenderar att alternativa metoder för DNA-extraktion och alternativa provtyper<br />
utvärderas noga med Elucigene <strong>QST*R</strong>-analysen innan resultaten används för<br />
diagnostik.<br />
Under optimala PCR-förhållanden och med användning av de rekommenderade<br />
inställningarna* för provinjektion som anges i kapillärkolonnkörningsmodulen (sid. 13),<br />
erhålls godtagbara resultat konsekvent med inmatade DNA-mängder på 1,25 ng till<br />
10 ng.<br />
*Anm. Inställningar för provinjektion kan ändras så att de passar mängden amplikon som<br />
produceras under PCR-reaktionen, vilken kan variera beroende på mängden inmatat<br />
genom-DNA som tillsatts. Mindre amplikon kan appliceras till kolonnen för analys genom<br />
att man reducerar injektionstiden. Omvänt kan mer amplikon appliceras till kolonnen för<br />
analys genom att man ökar antingen tiden eller spänningen för injektionen. Tidigare<br />
amplifierade prover kan återinjiceras flera gånger för ny analys.<br />
Analysprotokoll<br />
Amplifieringsprocedur<br />
Där prover har extraherats med användning av Instagene-metoden rekommenderar vi att<br />
outspädd supernatant används direkt i PCR-reaktionen.<br />
Anm. För att minimera risken för kontamination måste steg 3–5 utföras i ett område som<br />
är fritt från DNA. Dessutom ska steg vidtas för att undvika kontamination med PCRprodukt.<br />
1. Programmera den termiska cyclern för en enstegscykel för att aktivera DNApolymeraset<br />
vid 95 °C i 15 minuter kopplat till ett program för amplifieringscykling på<br />
30 sekunder vid 95 °C (denaturering), 1 minut och 30 sekunder vid 59 °C<br />
(primerbindning) och 1 minut och 30 sekunder vid 72 °C (förlängning) under 26 cykler.<br />
Detta ska kopplas till en 30-minuters tidsfördröjningsfil vid 72 °C (förlängning) i den sista<br />
cykeln.<br />
AN000BY001SV Rev.07/2012 Sida 10 av 36