recomLine HCV IgG - Mikrogen

ecomLine HCV IgG 

Bruksanvisning (svenska) 

1 Avsedd användning 

recomLine HCV IgG är ett kvalitativt test för påvisning av IgGantikroppar 

mot hepatit C-virus (HCV) i humant serum eller human 

plasma. 

2 Användningsområde 

recomLine HCV IgG är en Lineimmunoanalys. Till skillnad mot ELISA 

tillåter testprincipen säker identifiering av specifika antikroppar mot 

enskilda antigen från HCV (core 1, core 2, helikas, NS3, NS4, NS5). 

recomLine HCV IgG är ett konfirmeringstest och kan användas för att 

klarlägga tveksamma resultat från ett screeningtest. 

3 Testprincip 

De rekombinanta, mycket väl renade HCV-antigenen fixeras på 

membran av nitrocellulosa i form av teststrips. 

1. Teststripsen inkuberas med det spädda serum- eller plasmaprovet, 

varvid specifika antikroppar binder till patogenantigenen på 

teststripsen. 

2. Obundna antikroppar tvättas sedan bort. 

3. Stripsen inkuberas i ett andra steg med anti-humana 

immunglobulinantikroppar (IgG) kopplade till pepparrotsperoxidas. 

4. Obundna konjugatantikroppar tvättas sedan bort. 

5. Specifikt bundna antikroppar påvisas genom en färgreaktion som 

katalyseras av peroxidaset. Om en antigen-antikroppsreaktion har 

ägt rum uppträder ett mörkt band vid motsvarande position på 

stripsen. 

På den övre delen av teststripsen finns kontrollband: 

a) Reaktionskontrollen under stripsnumret som alltid ska visa en 

reaktion med alla serum-/plasmaprov. 

b) Konjugatkontrollen (IgG) fungerar som kontroll för den påvisade 

antikroppen. Om teststripsen används för att detektera IgGantikroppar 

ska konjugatkontrollbandet för IgG ge ett klart synligt 

band. 

c) "Cutoff-kontroll": Intensiteten hos detta band ligger till grund för 

tolkningen av de enskilda antigenbandens reaktivitet (se 9.2 

Utvärdering). 

4 Reagens 

4.1 Förpackningens innehåll 

Reagensen i en förpackning räcker till 20 analyser. 

En reagenssats innehåller: 

100 ml Tvättbuffert A (tio gånger koncentrationen) 

Innehåller fosfatbuffert, NaCl, KCl, detergent, 

konserveringsmedel: MIT (0,1 %) och oxypyrion 

(0,2 %) 

40 ml Substratlösning tetrametylbenzidin (TMB, 

bruksfärdig) 

5 g Skummjölkspulver 

1 Bruksanvisning 

1 Utvärderingsformulär 

2 Rör med vardera 10 i följd numrerade teststrips 

500 µl Antihumant IgG-konjugat (hundra gånger 

koncentrationen, grön kork) 

Från kanin, innehåller NaN3 (



gällande hygienföreskrifter. Tillverkarens uppgifter om 

koncentration och inkuberingstider ska följas. 

Använd inkubationstråg endast en gång. 

Hantera strips försiktigt med en plastpincett. 

Byt inte ut och blanda inte reagensen med reagens från andra 

tillverkare. 

Läs igenom hela bruksanvisningen innan testet utförs och följ 

bruksanvisningen noga. Avvikelser från det testprotokoll som 

anges i bruksanvisningen kan leda till felaktiga resultat. 

7 Provtagning och reagensberedning 

7.1 Provmaterial 

Provmaterialet kan vara serum eller plasma (citrat, EDTA, heparin, 

CPD) som ska separeras från koagel så snart som möjligt efter 

provtagning för att hindra hemolys. Det är mycket viktigt att mikrobiell 

kontamination av provet undviks. Olösliga ämnen ska avlägsnas från 

provet före inkubation. 

Användning av värmeinaktiverade, ikteriska, hemolyserade, lipemiska 

eller grumliga prover rekommenderas inte. 

Viktigt! 

Om testerna inte utförs omedelbart kan proverna förvaras i upp 

till 2 veckor i kyl (2 ℃ – 8 ℃). Längre förvaring av proverna är 

möjlig i frys (–20 °C eller kallare). Upprepad infrysning och 

upptining rekommenderas inte, eftersom detta kan påverka 

resultatens kvalitet. 

7.2 Beredning av lösningarna 

7.2.1 Beredning av bruksfärdig tvättbuffert A 

Denna buffert behövs för serum- och konjugatspädning samt för 

tvättstegen. 

Innan spädningen ska den erforderliga volymen tvättbuffert A beräknas 

för det antal test som ska utföras. 

Skummjölkspulvret löses först upp i koncentrerad tvättbuffert A. Till 

blandningen tillsätts sedan avjoniserat vatten till den slutgiltiga 

volymen (spädning: 1 + 9). De erforderliga mängderna för ett visst 

antal teststrips beräknas enligt följande formel (hänsyn har inte tagits 

till apparatspecifika dödvolymer). 

Exempel: 

Reagens Formel 

5 strips 

Skummjölkspulver [g] = Antal strips x 0,1 0,5 g 

Koncentrerad tvättbuffert A [ml] = Antal strips x 2 10 ml 

Avjoniserat vatten [ml] = Antal strips x 18 90 ml 

Bruksfärdig tvättbuffert A [ml] = Antal strips x 20 100 ml 

Bruksfärdig tvättbuffert A kan förvaras i kyl (2 °C – 8 °C) i fyra veckor. 

Bruksfärdig tvättbuffert A saknar lukt och är lätt grumlig. 

7.2.2 Beredning av konjugatlösningar 

Konjugatlösningen ska beredas precis före användandet. Spädd 

konjugatlösning kan inte sparas. 

En del koncentrerat konjugat späds med 100 delar bruksfärdig 

tvättbuffert A (1 + 100). 

De erforderliga mängderna för ett visst antal teststrips beräknas enligt 

följande formel: 

Exempel: 

Reagens Formel 

5 strips 

Koncentrerat konjugat [µl] = Antal strips x 20 100 µl 

Bruksfärdig tvättbuffert A [ml] = Antal strips x 2 10 ml 

Konjugatmängderna har beräknats utan dödvolym. Beroende på 

hanteringen (manuellt eller automatiserat) bereds konjugatlösning för 

ytterligare 1 till 3 strips. 

8 Testprocedur 

Nr Åtgärd Anmärkning 

1 Rumstemperera alla reagens före start 

av testet i minst 30 minuter vid 18 °C – 

25 °C (rumstemperatur). 

Testet utförs i rumstemperatur. 

2 Förberedelse av teststrips 

Vidrör inte stripsen med 

Placera stripsen i 2 ml bruksfärdig händerna – använd pincett. 

tvättbuffert A. 

För varje strips behövs en brunn i 

ett inkubationstråg (se 4.2). 

Stripsen måste vara helt 

nedsänkta i vätska. 

3 Provinkubation 

a) 20 µl av ett ospätt prov (humant serum Pipettera provet/kontroll i en ände 

eller human plasma) eller en kontroll av det nedsänkta stripset i 

pipetteras till rätt brunn. (Spädning 1 + tvättbuffert A och blanda så snart 

100) 

som möjligt genom att skaka 

inkubationstråget försiktigt. 

b) Inkubera i 3 timmar under lätt Täck inkubationstråget med 

skakning 

plastlocket och placera på 

skaken. 

4 Tvättning Utför tvättsteg 8.4a–8.4c totalt tre 

gånger. 

a) Ta försiktigt bort plastlocken från 

inkubationstrågen. 

Undvik korskontamination 

b) Aspirera serumspädningen försiktigt ur Undvik korskontamination. Vid 

de individuella brunnarna. 

maskinell process ska 

tillverkarens anvisningar för 

utrustningen följas. 

c) 2 ml bruksfärdig tvättbuffert A 

pipetteras i varje brunn. Tvätta på 

skaken i 5 minuter under lätt skakning 

och aspirera därefter tvättbuffert A. 

5 Inkubation med konjugat 

Täck inkubationstråget med 

2 ml bruksfärdig konjugatlösning plastlocket och placera på 

tillsätts. Inkubera i 45 minuter under 

lätt skakning. 

skaken. 

6 Tvättning (se under 8.4) Utför tvättstegen totalt tre gånger 

(se 8.4a–8.4c) 

7 Substratreaktion 

1,5 ml substratlösning tillsätts. 

Inkubera i 8 minuter under lätt 

skakning. 

8 Stopp av reaktionen 

Tvätta kortvarigt minst tre gånger med 

avjoniserat vatten. 

9 Torkning av stripsen 

Ta upp stripsen försiktigt med 

Låt stripsen torka i 2 timmar mellan 2 plastpincett ur vattnet. Stripsen 

lager absorberande papper före 

utvärdering. 

ska skyddas mot ljus. 

Viktigt! 

Inkubationslösningarna får inte svämma över till de andra brunnarna. Var 

försiktig så att stänk undviks när locket öppnas och stängs. 

9 Resultat 

Viktigt! 

Använd inte automatisk tolkning utan att ta hänsyn till nedanstående 

tolkningsanvisningar. 

9.1 Validering – kvalitetskontroll 

Testet kan utvärderas om följande kriterier är uppfyllda: 

1. Reaktionskontrollband (översta linjen): tydligt färgat, mörkt band 

2. Antikroppsklass (andra bandet): IgG-konjugatkontrollbandet ska 

visa en tydlig färgning. 

3. Cutoff-kontroll (tredje bandet): Svag med tydlig färgning. 

De negativa och positiva kontrollerna är inte nödvändiga för 

utvärdering av testet. De kan vid behov tas med för den interna 

kvalitetskontrollen. 

Kontrollerna måste visa följande reaktiva antigenband: 

Positiv kontroll: core 1, core 2, helikas, NS3, NS4; NS5 kan men måste 

dock inte reagera. 

Negativ kontroll: inga 

9.2 Utvärdering 

Utvärderingen av teststripsen kan ske visuellt eller med datorstöd – 

med recomScan utvärderingsmjukvara för teststrips. recomScanmjukvaran 

är avsedd att användas som stöd för tolkningen av 

teststripsen. Ytterligare information och anvisningar för datorstödd 

utvärdering kan erhållas efter förfrågan hos MIKROGEN. 

Nedanstående anvisningar avser visuell utvärdering. 

9.2.1 Bedömning av bandintensiteten 

1. Anteckna datum och lot-nummer samt detekterad antikroppsklass i 

bifogade utvärderingsformulär. 

2. För in provens ID-nummer i utvärderingsformuläret. 

3. Fäst tillhörande teststrips i motsvarande ruta på 

utvärderingsformuläret. Placera teststripsen med bandet för 

reaktionskontrollen i linje med det markerade strecket. Fäst 

teststripset med transparent tejp till vänster om markeringslinjen 

(tejpa inte över reaktionskontrollbandet!). Heltäckande fastsättning 

med lim eller tejp kan orsaka färgförändringar. 

4. Identifiera nu banden på de framkallade teststripsen genom att 

jämföra med utvärderingsformulärets kontrollstrips och notera 

resultaten i utvärderingsformuläret. Utvärdera bandens intensitet 

separat för motsvarande immunglobulinklasser med hjälp av 

Tabell 1. 

GARLHC004SE 2/4 

Instructions for use (English) on the back pages | other languages on our website www.mikrogen.de



Tabell 1: Utvärdering av bandintensitet i förhållande till cutoff-bandet 

Bandens färgintensitet Utvärdering 

Ingen reaktion - 

Mycket svag intensitet (svagare än cutoff-bandet) +/- 

Svag intensitet (motsvarande cutoff-bandet) + 

Stark intensitet (starkare än cutoff-bandet) ++ 

Mycket stark intensitet +++ 

9.3 Tolkning av testresultaten 

Kriterierna för tolkning av testet framgår av Tabell 2. 

Tabell 2: Tolkning av testet 

Testresultat Kriterier 

Inget antigen ≥ cutoff eller 

Negativ 

Isolerat NS3, NS4 eller NS5 ≥ cutoff 

Isolerat core 1 ≥ cutoff eller 

Isolerat core 2 ≥ cutoff eller 

Isolerat helikas ≥ cutoff eller 

Gränsvärde 

Helikas och ett NS-protein (NS3, NS4 eller NS5) ≥ 

cutoff eller 

Vilka som helst av två andra antigen ≥ cutoff 

Core 1 och core 2 ≥ cutoff eller 

Core 1 och ett ytterligare antigen ≥ cutoff eller 

Positiv 

Core 2 och ett ytterligare antigen ≥ cutoff eller 

Vilka tre antigen som helst ≥ cutoff 

10 Metodens gränser, begränsningar 

Serologiska testresultat ska alltid bedömas tillsammans med 

läkarens övriga bedömningar av patienten. Behandling till följd av 

det serologiska fyndet ska fastställas tillsammans med kliniska 

uppgifter. 

Ett negativt testresultat kan inte utesluta en infektion med hepatit- 

C-virus. I den tidiga fasen av infektionen är det möjligt att 

antikroppar inte finns eller inte ännu finns i detekterbar mängd. Vid 

misstanke om en infektion med HCV bör ett nytt prov tas efter två 

veckor med efterföljande testning. 

Hos hemodialyspatienter kan HCV-antikroppar eventuellt inte 

påvisas trots positivt resultat för HCV-RNA (Hinrichsen et al., 

2002; Bukh et al.,1993). 

Patienter med gränsvärdesresultat bör alltid testas på nytt efter tre 

till fyra veckor. För ytterligare säkerhet bör en (RT-)PCRundersökning 

utföras för att påvisa HCV-genom. 

Hos patienter med färsk EBV-infektion har isolerade NS5reaktiviteter 

iakttagits. Vid oklar anamnes rekommenderas att en 

EBV-infektion utesluts genom differentialdiagnos. 

Det finns ingen korrelation mellan positivt antikroppsresultat och 

smittsamhet. 

Mörk teststrips: Vissa patientprover kan generera en mörk 

utbredning eller mönstrad färgning på hela nitrocellulosastripset 

(t.ex. sera från patienter som är allergiska mot mjölkprotein). Detta 

beror på olika faktorer som är att hänföra till patientserumet. 

Utvärdering av dessa strips är vanligtvis endast möjlig med vissa 

undantag. Exempelvis ska "inverterade" band (vita band mot mörk 

bakgrund) fastställas som negativa. Ett sådant serum bör alltid 

omtestas med andra serologiska metoder. 

11 Prestanda 

11.1 Diagnostisk sensitivitet 

recomLine HCV IgG HCV* (n=419) 

Negativ 0 

Gränsvärde 1 

Positiv 418 

Sensitivitet (1+418)/419=100%** 

* inklusive prover av genotyp 1,2,3,4,5 och 6. 

** inklusive ett gränsvärdesresultat. 

11.2 Serokonversion 

Femton serokonversioner med totalt 123 minskningar testades med 

recomLine HCV IgG i direkt jämförelse med ett annat bekräftelsetest. 

För tre paneler påvisade recomLine HCV IgG HCV-antikroppar tidigare 

än jämförelsetestet. För tre paneler visade recomLine HCV en reaktion 

först vid en senare minskning än jämförelsetestet. För de övriga nio 

serokonversionerna påvisade båda bekräftelsetesten HCVantikropparna 

från samma minskning. 

11.3 Diagnostisk specifitet 

recomLine HCV IgG Blodgivare 

(n=297) 

Kliniska prover* 

(n=229) 

Potentiellt 

interfererande 

prover** (n=68) 

Negativ 291 224 68 

Gränsvärde 6 5 0 

Positiv 0 0 0 

Specifitet 291/297=98,0% 224/229=97,8% 68/68=100% 

* Prover från patienter med annan virushepatit, färsk EBV- eller CMV-infektion, 

autoimmunsjukdomar, HIV-, treponem-, gulafebern- och FSME-infektion, 

gravida samt prover från rutinmässiga laboratorieundersökningar. 

** Lipemiska, hemolytiska och ikteriska prover, RF-positiva prover, patienter med 

hypergammaimmunglobulinemi. 

11.4 Analytisk specifitet 

Den analytiska specifiteten definieras som testets förmåga att 

noggrant bestämma analyterna vid förekomst av potentiella 

interfererande faktorer i provmatrisen eller korsreaktioner med 

potentiellt interfererande antikroppar. 

a) Interferenser: Kontrollstudier av potentiellt interfererande faktorer 

har visat att testets prestanda inte påverkas av antikoagulantia 

(natriumcitrat, EDTA, heparin, CPD), hemolys (upp till 1 000 mg/dl 

hemoglobin), lipemi, bilirubinemi (upp till 20 mg/dl bilirubin) eller 

frysnings- och upptiningscykler av provet. 

b) Korsreaktioner: I kontrollstudier undersöktes potentiella 

interferenser av antikroppar mot andra organismer med liknande 

kliniska symtom som vid en infektion med HCV (t.ex. EBV, CMV, 

annan virushepatit) samt en infektion med besläktade smittämnen 

(FSME-virus, gulafebernvirus). Dessutom testades förhållanden som 

kan hänföras till en atypisk aktivitet hos immunsystemet (antinukleära 

autoantikroppar, reumafaktor). Inga korsreaktiviteter påvisades (se 

11.3). 

12 Litteratur 

1. Epidemiologisches Bulletin: Virushepatitis B und C zum Jahre 2000 Robert 

Koch Institut, 14. Juni 2002 / Nr. 24 

2. H. Hinrichsen, G. Leimenstoll, G. Stegen, H. Schrader, U.R. Folsch, W.E. 

Schmitt: Prevalence and risk factors of hepatitis C virus infection in 

haemodialysis patients: a multicentre study in 2796 patients. Gut (2002 

Sep), 51(3), 429-433 

3. E. Schreier, M. Höhne: Hepatitis C-Epidemiologie und Prävention. 

Bundesgesundheitsblatt, 2001, 44: 554-561, Springer Verlag 

4. EASL International Consensus Conference on Hepatitis C Paris, 26-28 

February 1999. Journal of Hepatology 1999; 30: 956-961 

5. Europäischer Konsens zu Hepatitis C: Epidemiologie, Diagnose und Therapie. 

Deutsches Ärzteblatt Heft 50 17.12.99. 

6. R. S. Roß, S. Viazov, M. Roggendorf: Möglichkeiten und Grenzen der 

gegenwärtigen Hepatitis C-Virus-Diagnostik. BIOforum 11/98, 697-701 

7. H. E. Blum: Hepatitis C: Aktuelle Aspekte. Hygiene und Mikrobiologie 3/98 

8. Hanns F. Löhr, Guido Gerken, Michael Roth, Sandra Weyer, Jörg F. 

Schlaak and Karl-Hermann Meyer zum Büschenfelde: The cellular immune 

responses induced in the follow-up of interferon-a treated patients with 

chronic hepatitis C may determine the therapy outcome. Journal of 

Hepatology 1998; 29; 524-532 

9. M. Putzker: Die Hepatitis-C-Virus Infektion. mta 12 (1997) 11, 794-798 

10. Scarselli, A. Urbani, A. Sbardellati, Licia Tomel, R. de Francesco, C Traboni: 

GB Virus B and Hepatitis C Virus NS3 Serine Proteases share Substrate 

Specifity. Journal of virology, (1997), Vol 71, Nr. 7, 4985 - 4989 

11. B. C. A. Langer, H. Nitschko, G.G. Frösner: Hepatitis-C-Diagnostik: 

Aussagekraft von Anti-HCV-Suchtest, quantitativem Anti-HCV-Test, Anti- 

HCV-IgM-Test, Immunoblot zur Bestätigung, PCR zum direktem Nachweis 

der Virusnukleinsäure, HCV-Genotypisierung und Quantifizierung der HCV- 

RNS. Moderne Hepatitisdiagnostik, Gerd Frösner (Hrsg), Kilian Verlag 1996, 

59-77 

12. Hsiang Ju Lin, J. Y.N. Lau, Ian J.Lauder, Naiyi Shi, Ching-Lung Lai, F. B. 

Hollinger: The hepatitis C virus genome: a guide to ist conserved sequences 

and candidate epitopes. Virus Research (1993), 30, 27-41 

13. J. Bukh, P. Wantzin, K. Krogsgaard, F. Knudsen, R.H. Purcell, R.H. Miller: 

High prevalence of hepatits C virus (HCV) RNA in dialysis patients: failure of 

commercially available antibody tests to identify a significant number of patients 

with HCV infection. Copenhagen Dialysis HCV Study Group. J. Infect. 

Dis. (1993 Dec.), 186(6), 1343-1348 

14. Q. L. Choo, K- H. Richman, J. H. Han, K. Berger, C. Lee, C. Dong, C. 

Gallegos, D. Coit, A. Medina-Selby, P. J. Barr, A. J. Weiner, D. W. Bradley, 

G. Kuo, M. Houghton: Genetic organization and diversity of the hepatitis C 

virus: Proc. Natl. Acad. Sci., (1991), 88, 2451-2455 

15. H. Miller, R. H. Purcell: Hepatitis C virus shares amino acid sequence 

similarity with pestiviruses and flaviviruses as well as members of two plant 

virus supergroups. Proc. Natl. Acad. Sci., (1990), 87, 2057-2061 

På begäran skickar vi gärna ytterligare litteratur om HCV-diagnostik. 





13 Förklaring av symbolerna 

Innehållet räcker till tester 

Antal tester 

x °C 

y °C 

Utvärderingsformulär 

Bruksanvisning 

Följ bruksanvisningen 

Innehåll 

In vitro-test 

Lot-nummer 

Får inte frysas 

Beställningsnummer 

Används före 

utgångsdatum 

Förvaras vid x °C till y °C 

14 Tillverkar- och versionsdata 

recomLine HCV IgG Artikelnr 4372 

Bruksanvisning 

Gäller från 

MIKROGEN GmbH 

Floriansbogen 2-4 

82061 Neuried 

Tyskland 

Tel. 

Fax 

E-post 

Internet 

QM-system certifierat av: 

+49 89 54801-0 

+49 89 54801-100 

mikrogen@mikrogen.de 

www.mikrogen.de 

GARLHC004SE 

november 2011 

0483

recomLine HCV IgG - Mikrogen

Create successful ePaper yourself

Delete template?

Save as template?