2005-08-13 - EUR-Lex

▼B
4.5 Lösning 5: fosfoglukosisomeras (2 mg protein/ml eller 700 E/ml).
Suspensionen används outspädd.
Kan förvaras i ett år vid + 4 °C.
Anmärkning:
5. METOD
Samtliga ovan angivna lösningar finns i handeln.
5.1 Beredning av provet
Beroende på den uppskattade mängden glukos + fruktos per liter skall
provet spädas enligt följande:
Mätning vid 340 och 334 nm Mätning vid 365 nm
Spädning med
vatten
Spädningsfaktor F
< 0,4 g/l 0,8 g/l — —
< 4,0 g/l 8,0 g/l 1 + 9 10
< 10,0 g/l 20,0 g/l 1 + 24 25
40,0 g/l 80,0 g/l 1 + 999 1 000
5.2 Bestämning
Ställ in spektrofotometern på våglängden 340 nm och utför bestämningarna
i förhållande till luften (ingen kuvett i strålgången) eller till
vatten.
Temperatur mellan 20 och 25 °C.
Placera följande i två kuvetter med 1 cm väglängd:
Referenskuvett Provkuvette
Lösning 1 (4.1) (uppvärmd till
20 °C)
2,50 ml 2,50 ml
Lösning 2 (4.2) 0,10 ml 0,10 ml
Lôsning 3 (4.3) 0,10 ml 0,10 ml
Analysprov 0,20 ml
Dubbeldestillerat vatten 0,20 ml
Blanda och läs av lösningarnas absorbans (A 1 ) efter cirka tre minuter.
Sätt igång reaktionen genom att tillsätta
Lösning 4 (4.4) 0,02 ml 0,02 ml
Blanda. Vänta 15 minuter och läs av absorbansen. Kontrollera efter
ytterligare 2 minuter (A 2 ) att reaktionen har avstannat.
Tillsätt omedelbart:
Lösning 5 (4.5) 0,02 ml 0,02 ml
Blanda, läs av absorbansen (A 3 ) efter 10 minuter och kontrollera efter
ytterligare 2 minuter att reaktionen har avstannat.
Beräkna absorbansdifferenserna:
A 2 − A 1 motsvarar glukos
A 3 − A 2 motsvarar fruktos
för såväl referens- som provvätskan.
Beräkna absorbansdifferenserna för referensvätskan (ΔA T ) och
provvätskan (ΔD P ) och gör följande beräkningar:
för glukos: ΔA G = ΔA D − ΔA T
för fruktos: ΔA F = ΔA D − ΔA T
1990R2676 — SV — 13.08.2005 — 011.001 — 71