Academos 3 2011 pentru PDF - Akademos - Academia de Ştiinţe a ...

Microbiologie3. REZULTATE ŞI DISCUŢIIÎn cadrul cercetărilor preliminare, pentru adetermina particularităţile de sinteză şi separarea lipazelor produse de microflora satelit a algeiD. salina (bacteriile genului Pseudomonas), s-auobţinut date ce au indicat că salefierea cu sulfat deamoniu de diverse concentraţii pentru separarealipazei de alte substanţe bioactive nu e raţională,deoarece activitatea lipazică se observă doar lafolosirea concentraţiilor înalte de sulfat de amoniu,iar o parte din β-caroten este pierdut din cauzatrecerii lui în soluţie care apoi se aruncă.În scopul optimizării termenilor de evaluarecantitativă a sintezei fermenţilor lipolitici demicroflora bacteriană (tulpinile Pseudomonas sp.1CNM-PsB-01 şi Pseudomonas sp.2 CNM-PsB-02),în dinamica dezvoltării ei, bacteriile au fost cultivatepe lichidul supernatant al Dunaliellei (preliminarsterilizat), adăugându-se substanţe organice laînceputul experienţei. Culturile Pseudomonas sp.1CNM-PsB-01 şi Pseudomonas sp.2 CNM-PsB-02s-au cercetat la prezenţa activităţii lipazice începânddin ziua a doua, zilnic, până în ziua a noua. După cums-a stabilit, cultura Pseudomonas sp.1 CNM-PsB-01manifestă activitate lipazică maximă în ziua a 4-aşi a 7-ea, iar maximul activităţii lipazice a culturiiPseudomonas sp.2 CNM-PsB-02 este în ziua a 5-a.Pornind de la dinamica dezvoltării microflorei, peviitor, culturile vor fi cercetate preponderent în zilele4-5 de cultivare (pentru fiecare cultură respectiv).De asemenea, se observă că tulpina Pseudomonassp.1 CNM-PsB-01 are o activitate practic dublă,în comparaţie cu cultura Pseudomonas sp.2 CNM-PsB-02 şi astfel ea apare ca o sursă biotehnologicămai valoroasă de producere a lipazelor decâtculturile înrudite.Lungimea de undă pentru recalcularea biomaseiabsolut uscate (BAU) a culturilor Pseudomonas sp.1CNM-PsB-01 şi Pseudomonas sp.2 CNM-PsB-02,s-a stabilit a fi în intervalul de 300-360 nm.În scopul determinării variantei optime acompoziţiei mediului nutritiv pentru cultivareabacteriilor însoţitoare ale D. salina a fost efectuatăexperienţa de preplanificare. Ca factori de variereau fost folosiţi autolizatul de drojdii, soluţia dezaharoză şi extractul aquasolubil din Dunaliellasalina în diferite concentraţii. Experimental s-aobservat că valoarea maximă a activităţii lipazicese constată în cazul utilizării concentraţiei de 0,5%sol. de zaharoză pentru tulpinile Pseudomonas sp.1CNM-PsB-01 şi Pseudomonas sp.2 CNM-PsB-02.S-a observat, de asemenea, că valoarea maximăa activităţii lipazice se constată în cazul folosiriiconcentraţiei de 0,9% sol. autolizat de drojdii pentrutulpina Pseudomonas sp.1 CNM-PsB-01 şi 1,5%sol. autolizat de drojdii pentru tulpina Pseudomonassp.2 CNM-PsB-02.Deoarece tulpinile în cercetare au fost izolatedin microflora satelit a algei verzi Dunaliella salina,s-a decis să se investigheze influenţa extractuluiaquasolubil al acestei alge ca un inductor al sintezeienzimelor lipolitice a tulpinilor în studiu. În acestscop am montat o serie de experienţe preliminare (depreplanificare), pentru a studia influenţa extractuluidin Dunaliella salina asupra productivităţii tulpinilor şi, în particular, asupra capacităţii lor dea sintetiza enzime lipolitice, pe fonul celorlalţicomponenţi organici invariabili.Etapa următoare în cadrul optimizării mediuluinutritiv constă în cercetarea influenţei complexea componenţilor organici (sol. de zaharoză şiautolizatului de drojdii) asupra biosintezei enzimelorlipolitice. În acest scop a fost montată experienţafactorială deplină cu 2 factori de variere (EFD 2 2 ).Etapa finală a optimizării mediului nutritiv constădin experienţele efectuate conform schemei Box-Wilson (mişcarea pe gradient) [9], din rezultatelecăreia se selectează concentraţiile optimale alefactorilor cercetaţi.În locul mediului anorganic Ben-Amotz, dinconsiderente economice se poate utiliza lichidulsupernatant rezultat după colectarea biomaseide Dunaliella salina prin centrifugare şi ulteriorsterilizat. Deoarece tulpinile studiate au fost izolatedin microflora satelit a algei verzi Dunaliella salina,ne-am hotărât să cercetăm influenţa extractului aposal acestei alge ca un inductor al sintezei enzimelorlipolitice ale tulpinilor examinate. În acest scop, ammontat o serie de experienţe pentru a studia influenţacomplexă a componenţilor organici (inclusiv aextractului din D. salina) asupra productivităţiitulpinilor şi, în particular, asupra capacităţii lor de asintetiza enzime lipolitice. A fost montată experienţafactorială deplină cu 3 factori de variere (EFD 2 3 ).Etapa finală a optimizării mediului nutritiv constădin experienţele efectuate conform schemei Box-Wilson (mişcarea pe gradient), din rezultatele căreiase selectează concentraţiile optime ale factorilorcercetaţi.Având ca bază rezultatele expuse mai sus, sededuce componenţa calitativă şi cantitativă a mediuluiprincipial nou (cu inductor), pentru cultivareade laborator şi industrială a microorganismelor înstudiu. Cultivarea tulpinilor Pseudomonas sp.1CNM-PsB-01 şi Pseudomonas sp.2 CNM-PsB-02pe aceste medii (M1-M4) asigură sinteza maximă aenzimelor lipolitice şi o productivitate înaltă a lor:M1. Compoziţia mediului nutritiv cu compo -nenţi organici optimizaţi, pentru menţinerea şicultivarea de laborator / industrială a tulpiniiPseudomonas sp.1 CNM-PsB-01:Macroelemente (în g/l): NaCl – 120; NaHCO 3–2,0; NaNO 3– 0,5; KH 2PO 4– 0,05; MgSO . 47H 2O– 0,75; KCl – 0,15; FeCl 3– 0.5 ml/l din 2.5 g/l;CaCl 2– 0.4 ml/l din 2.5 g/l.3(22), septembrie 2011 - 91