Academos 3 2011 pentru PDF - Akademos - Academia de Ştiinţe a ...

Akademos2. OBIECTE ŞI METODE DE STUDIUÎn cadrul studiului au fost cercetate două obiecte:alga verde Dunaliella salina TEOD. CALU–834 şimicroflora-satelit a D. salina, izolată în şapte fracţii,din care, prin metoda expres de testare, au fost alesedouă fracţii numite convenţional 2b şi 3b. Ulterior,culturile numite convenţional 2b şi 3b au fostidentificate (la USMF „Nicolae Testemiţanu”) şidepozitate în Colecţia Naţională de Microorganismesub numele Pseudomonas sp.1 CNM-PsB-01 (pentrucodificarea 2b) şi Pseudomonas sp.2 CNM-PsB-02(respectiv pentru 3b).Particularităţile de cultură şi metodele destudiu al algei verzi Dunaliella salinaPe mediile lichide suspensia de alge are o culoareverde care, în cazul iluminării intense, căpătă onuanţă galbenă-portocalie. Tulpina se dezvoltă binepe mediile nutritive Ben-Amotz ce au următoareacompoziţie [8]:Macroelemente: (g/l)Microelemente: (mg/ml)NaCl 120 Trilon B 0.885NaHCO 31.7 MnSO 40.309NaNO 30.45 MoO 30.15KH 2PO 40.05 ZnSO 40.44MgSO 40.75 CuSO 40.098KCl 0.15FeCl 30.5 ml/l din 2.5 g/lCaCl 20.4 ml/l din 2.5 g/lCreşterea şi productivitatea algei Dunaliellasalina se determină după schimbarea densităţii opticela lungimea de undă λ=625 nm, iar recalcularea BAUse efectuează după formula: M = D 625x 0,768, unde0,768 este coeficientul de recalculare a biomasei înmg/ml.Pentru păstrarea îndelungată a tulpinii sefoloseşte mediul agarizat Ben-Amotz [8] latemperatura de 8-10°C şi iluminarea de 3-4 miierg/cm 2 , s. Reînnoirea culturii în aceste condiţii seface la fiecare 2 luni. Tulpina poate fi menţinută şipe mediul mineral lichid, la o iluminare de zi şi latemperatura camerei, reînnoirea culturii efectuândusepeste fiecare 40-45 de zile [3].Caracteristici culturale şi particularităţi aletulpinilor Pseudomonas sp. 1 CNM-PsB-01 şiPseudomonas sp. 2 CNM-PsB-02Tulpina Pseudomonas sp.1 şi Pseudomonassp.2 au fost izolate în cultură pură din microflorasatelit a algei verzi, halofile Dunaliella salina Teod.CALU-834. Activitatea lipolitică a tulpinii propuseconstituie 1661 mMol/mg (pentru PsB-01) şi 3229mMol/mg (pentru PsB-02). Reprezintă bastonaşeGram-negative, strict aerobe, mobile, cu celulesolitare, baciliforme, cu dimensiunile de 0,5-1 x1,5-4 μm.Tulpinile se caracterizează printr-o activitatelipolitică extracelulară înaltă. Activitatea maximă afermenţilor lipolitici se constată în a 4-a zi de cultivarea bacteriilor. Sunt hemoorganotrofi cu temperaturilimite la +5 o C. Nu se observă creşterea la +42 o C.Temperatura optimă de dezvoltare este +24 - +26 o C.Sursă de carbon pentru dezvoltare poate servi:zaharoza, lactoza, mai puţin glucoza, manitoza,maltoza. Au activitate lipolitică pronunţată. Tulpinanu este rezistentă la eritromicină, lincomicină,streptomicină şi e rezistentă la oxaciclină, ampicilină,ristampicină. Reacţia indolică este pozitivă. Potcreşte fără inhibarea proceselor de divizare înintervalul de pH 5,5-8,4. La pH-ul mediului de 3,8tulpinile nu cresc.Metode matematiceMetodele matematice de planificare aexperienţelor implementate în acest studiu sunt:caracteristica factorilor de variere în cadrul optimizării mediilor nutritive; experienţa factorială deplinăşi metoda mişcării pe gradient sau Box-Wilson [9].La optimizarea mediilor de cultură, în calitate denivel iniţial poate fi ales mediul deja recomandatpentru organismul studiat sau pot fi folosite datelereferitoare la componenţa substraturilor naturale dincare a fost izolat organismul dat.În scopul alegerii unităţilor de variere semontează o serie de experienţe preliminare în care sevariază fiecare factor consecutiv, pe fonul invariabilal celorlalţi componenţi ai mediului, pentru adetermina dependenţa productivităţii culturii deconcentraţia fiecărui factor în parte. În acest cazse ţine cont de faptul că ambele nivele (+ şi -) alefactorului studiat trebuie să se găsească în una dinzonele active ale dependenţei productivităţii.În cadrul optimizării mediilor nutritive,folosindu-se metoda balanţei aleatorii, nivelele devariere a factorilor se aleg astfel încât unul să seafle în zona optimală, iar al doilea în una din zoneleextreme. Pentru a determina cea mai scurtă cale spreextremă în direcţia gradientului, este necesar de avaria factorii proporţional coeficienţilor de regresie,ţinând cont de semnul lor. Calculele încep cutrecerea de la variabilele codificate la cele naturale.Pentru aceasta se calculează produsul b iλ ipentrutoţi factorii la care b is-au dovedit a fi semnificativi.Apoi se alege factorul, al cărui produs este celmai mic faţă de mărimea absolută şi se calculeazăraportul celorlalţi factori faţă de factorul ales.Astfel, obţinem coeficienţii de proporţionalitateK, care poartă semnele corespunzătoare alefiecărui factor. Planificarea ulterioară cu scopuldeterminării maximului funcţiei constă în adunareasau scăderea concomitentă (în conformitate cusemnul coeficienţilor de regresie) a paşilor calculaţila nivelul de bază. Potrivit rezultatelor experienţei„mişcarea pe gradient”, se obţine variaţia optimăa mediului care asigură nivelul cel mai înalt alprocesului studiat [9].90 - nr. 3(22), septembrie 2011