programul 4 “parteneriate in domeniile prioritare” - Institutul National ...

PROGRAMUL 4 “PARTENERIATE IN DOMENIILEPRIORITARE” 2007-2013produselor comerciale pe bazǎ de hipoclorit de sodiu şi surfactanţi neionici (produsul comercialde dezinfectant “Domestos”) în concentraţie de 10% (v/v) pentru sterilizarea materialuluibiologic reprezentat de fragmente uninodale si apexuri meristematice de cartof, deoarece suntieftine, nepoluante şi cu toxicitate redusǎ pentru ţesuturile vii.Pentru îndepărtarea sterilizantului chimic, s-au efectuat trei spălări a câte 10 minute cuapă distilată sterilă.Procentul de explante aseptice obţinute in experimentele initiate de partenerul P2-USAMV-Bucuresti din acest proiect, după fiecare sterilizare a explantelor utilizând atâtvarianta de sterilizare cu HgCl2 cât şi cu Domestos, a fost în medie de 98%, diferenţa de 2%explante contaminate nu a fost inclusă în rezultatele experimentale.Inocularea explantelorInocularea explantelor într-o primă etapă s-a efectuat în vase de cultură tip fiole cuînălţimea de 10 cm, acoperite cu dopuri confecţionate din tifon şi vată şi învelite în staniol sauvase tip fiolă cu filet cu dopuri din teflon (Figura nr.6.). Repartizarea mediului (aproximativ 10ml de mediu la o fiolă), precum şi operaţiile de sterilizare şi inoculare a materialului biologic leamefectuat în condiţii aseptice, în interiorul hotei cu flux laminar.Ulterior, pe măsura dezvoltării culturilor, acestea au fost transferate (în momentulefectuării pasajelor) în vase cu capacităţi mai mari (vase Erlenmayer de 100 ml).Transferurile culturilor pe medii proaspete cu aceeaşi balanţă hormonală sau pe medii cualte variante s-a realizat la interval de 3-4 săptămâni.Figura.nr.6.Fiole utilizate pentru inocularea explantelor in experimentul I35