programul 4 “parteneriate in domeniile prioritare” - Institutul National ...
programul 4 “parteneriate in domeniile prioritare” - Institutul National ... programul 4 “parteneriate in domeniile prioritare” - Institutul National ...
PROGRAMUL 4 “PARTENERIATE IN DOMENIILEPRIORITARE” 2007-2013Tabelul nr.2. Variantele de retete experimentale utilizate in EXPERIMENTUL IVariantaMediul de cultura bazal si Alte componentebalanta hormonalaV1 MS (1962)+0,5 mg/ l GA3 8 gr./l agar+ 30 gr./l zaharozaV2 MS (1962) 8 gr./l agar+ 30 gr./l zaharozaV3 MS (1962)+0,5 mg/ l GA3 6 gr./l agar+ 60 gr./l zaharozaV4 MS (1962) 6 gr./l agar+ 60 gr./l zaharozaV5 MS (1962)+ 1mg/ l GA3 8 gr./l agar+ 30 gr./l zaharozaV6 MS (1962)+ 1 mg/ l GA3 6 gr./l agar+ 60 gr./l zaharozaV7 MS (1962)+2,25 mg /lBAP+ 0,188 gr./l agar+ 30 gr./l zaharozamg./l IAAPrelevarea explantelor şi inoculareaFragmentele de organe sau de ţesuturi folosite pentru iniţierea culturii poartǎ numelede explante sau inoculi. Celulele din structura acestora, inoculate aseptic pe medii nutritive cucompoziţii corespunzatoare (care sǎ inducǎ şi sǎ susţinǎ diviziunile celulare) şi incubate încondiţii controlate de temperaturǎ şi de luminǎ, îşi pierd structura specializatǎ şi sunt stimulatesǎ prolifereze, fapt ce face posibilǎ exprimarea unor noi procese morfogenetice.În experienţele iniţiate, ne-am propus testarea posibilităţilor de stimulare a formării delăstari multipli în scopul elaborării unei metodologii de înmulţire clonală la specia Solanumtuberosum cu ajutorul tehnicilor de culturi de ţesuturi.Pentru a testa capacitatea morfogenetică a tipurilor diferite de explante au fost folositemateriale tinere biologic, (explante nodale şi apexuri meristematice de la lastari alungiti dinochii aflati pe suprafata tuberculilor). Mugurii axilari de pe fragmentele nodale aveaudimensiuni foarte mici fiind imperceptibili cu ochiul liber în momentul inoculării.Tipul de explant utilizat de noi pentru micropropagare la cartof a constat din apexuricaulinare, terminale cu dimensiunea de aproximativ 1 cm, constând din mugure şi o porţiunedin lǎstar fiind supuse anterior inoculǎrii unei asepsizǎri de suprafaţǎ. Acelasi protocol a fostutilizat si la initierea culturii de meristeme din soiul Astral.Inocularea a constat din plasarea explantelor pe variantele de medii de culturǎ alesepentru experimentare (Tabel nr. 2), repartizate în vase de culturǎ sterile, operaţii le de lucrufiind efectuate la hota cu flux laminar.33
PROGRAMUL 4 “PARTENERIATE IN DOMENIILEPRIORITARE” 2007-2013Sterilizarea materialului biologic.O etapǎ obligatorie a micropropagǎrii „in vitro” constǎ din asepsizarea materialuluibiologic, pentru stabilirea de culturi sǎnǎtoase şi viabile în acelaşi timp.Contaminarea cu microorganisme reprezintǎ o problemǎ realǎ care afecteazǎ succesulculturilor „in vitro”, necesitând multǎ experienţǎ, grijǎ şi o bunǎ organizare a unitǎţiiexperimentale (Roşu A., 1999, 2006).Atât microorganismele aflate pe suprafaţa ţesuturilor şi organelor supuse explantǎrii câtşi cele endofitice influenţeaza negativ, pe tot parcursul prezenţei lor, viabilitatea celulelorexplantului şi capacitatea morfogeneticǎ. Totodatǎ, sterilizarea de suprafaţǎ nu trebuie sǎafecteze viabilitatea celulelor inoculului.Sterilizarea chimică (propriu-zisa), de suprafaţă, a tipurilor de explante folosite departenerul P2-USAMV-Bucuresti, la cartof s-a efectuat in doua variante de sterilizare astfel:1.cu o soluţie de clorurǎ mercuricǎ în concentraţie de 0,05 %, timp de acţiune 20minute;2.cu o soluţie de Domestos 10%, timp de sterilizare 20 minuteEtapa de sterilizarea a materialului biologic presupune parcurgerea a mai multorsubetape:• pregătirea explantelor în vederea sterilizării (prelevarea si fragmentarea);• presterilizarea• sterilizarea chimică (propriu-zisa)de suprafaţă ;• indepartarea sterilizantului chimic.Înaintea folosirii pentru culturile “in vitro”, materialul vegetal trebuie pregătit cuminuţiozitate. Materialul vegetal provenit din câmp are un grad de infecţie sporit, motiv pentrucare înainte de a fi folosit trebuie supus unor operaţii suplimentare de pregătire: în prealabil se recomandă îmbăierea lor într-o soluţie de fungicid (Topsin 0,1%, Ronilan,Rovral, Benlate); dintre lăstari se vor alege întotdeauna lăstarii cei mai tineri şi porţiunile terminale alelăstarilor; dacă este posibil plantele se vor transfera din câmp în containere în sere sau camere decreştere şi se vor folosi numai părţile crescute ulterior.Agenţii sterilizănţi folosiţi în culturile “in vitro”, au o compoziţie şi mod de folosirediferit. Întrucât clorura mercuricǎ (HgCl2)este un compus foarte toxic, recomandǎm utilizarea34
- Page 1: PROGRAMUL 4 “PARTENERIATE IN DOME
- Page 4 and 5: PROGRAMUL 4 “PARTENERIATE IN DOME
- Page 6 and 7: PROGRAMUL 4 “PARTENERIATE IN DOME
- Page 9 and 10: PROGRAMUL 4 “PARTENERIATE IN DOME
- Page 11 and 12: PROGRAMUL 4 “PARTENERIATE IN DOME
- Page 13 and 14: PROGRAMUL 4 “PARTENERIATE IN DOME
- Page 15 and 16: PROGRAMUL 4 “PARTENERIATE IN DOME
- Page 17 and 18: PROGRAMUL 4 “PARTENERIATE IN DOME
- Page 19 and 20: PROGRAMUL 4 “PARTENERIATE IN DOME
- Page 21 and 22: PROGRAMUL 4 “PARTENERIATE IN DOME
- Page 23 and 24: PROGRAMUL 4 “PARTENERIATE IN DOME
- Page 25: PROGRAMUL 4 “PARTENERIATE IN DOME
- Page 29 and 30: PROGRAMUL 4 “PARTENERIATE IN DOME
- Page 31 and 32: PROGRAMUL 4 “PARTENERIATE IN DOME
- Page 33 and 34: PROGRAMUL 4 “PARTENERIATE IN DOME
- Page 35 and 36: PROGRAMUL 4 “PARTENERIATE IN DOME
- Page 37 and 38: PROGRAMUL 4 “PARTENERIATE IN DOME
- Page 39 and 40: PROGRAMUL 4 “PARTENERIATE IN DOME
- Page 41 and 42: PROGRAMUL 4 “PARTENERIATE IN DOME
- Page 43 and 44: PROGRAMUL 4 “PARTENERIATE IN DOME
- Page 45 and 46: PROGRAMUL 4 “PARTENERIATE IN DOME
- Page 47 and 48: PROGRAMUL 4 “PARTENERIATE IN DOME
- Page 49 and 50: PROGRAMUL 4 “PARTENERIATE IN DOME
- Page 51 and 52: PROGRAMUL 4 “PARTENERIATE IN DOME
- Page 53 and 54: PROGRAMUL 4 “PARTENERIATE IN DOME
PROGRAMUL 4 “PARTENERIATE IN DOMENIILEPRIORITARE” 2007-2013Tabelul nr.2. Variantele de retete experimentale utilizate <strong>in</strong> EXPERIMENTUL IVariantaMediul de cultura bazal si Alte componentebalanta hormonalaV1 MS (1962)+0,5 mg/ l GA3 8 gr./l agar+ 30 gr./l zaharozaV2 MS (1962) 8 gr./l agar+ 30 gr./l zaharozaV3 MS (1962)+0,5 mg/ l GA3 6 gr./l agar+ 60 gr./l zaharozaV4 MS (1962) 6 gr./l agar+ 60 gr./l zaharozaV5 MS (1962)+ 1mg/ l GA3 8 gr./l agar+ 30 gr./l zaharozaV6 MS (1962)+ 1 mg/ l GA3 6 gr./l agar+ 60 gr./l zaharozaV7 MS (1962)+2,25 mg /lBAP+ 0,188 gr./l agar+ 30 gr./l zaharozamg./l IAAPrelevarea explantelor şi <strong>in</strong>oculareaFragmentele de organe sau de ţesuturi folosite pentru <strong>in</strong>iţierea culturii poartǎ numelede explante sau <strong>in</strong>oculi. Celulele d<strong>in</strong> structura acestora, <strong>in</strong>oculate aseptic pe medii nutritive cucompoziţii corespunzatoare (care sǎ <strong>in</strong>ducǎ şi sǎ susţ<strong>in</strong>ǎ diviziunile celulare) şi <strong>in</strong>cubate încondiţii controlate de temperaturǎ şi de lum<strong>in</strong>ǎ, îşi pierd structura specializatǎ şi sunt stimulatesǎ prolifereze, fapt ce face posibilǎ exprimarea unor noi procese morfogenetice.În experienţele <strong>in</strong>iţiate, ne-am propus testarea posibilităţilor de stimulare a formării delăstari multipli în scopul elaborării unei metodologii de înmulţire clonală la specia Solanumtuberosum cu ajutorul tehnicilor de culturi de ţesuturi.Pentru a testa capacitatea morfogenetică a tipurilor diferite de explante au fost folositemateriale t<strong>in</strong>ere biologic, (explante nodale şi apexuri meristematice de la lastari alungiti d<strong>in</strong>ochii aflati pe suprafata tuberculilor). Mugurii axilari de pe fragmentele nodale aveaudimensiuni foarte mici fi<strong>in</strong>d imperceptibili cu ochiul liber în momentul <strong>in</strong>oculării.Tipul de explant utilizat de noi pentru micropropagare la cartof a constat d<strong>in</strong> apexuricaul<strong>in</strong>are, term<strong>in</strong>ale cu dimensiunea de aproximativ 1 cm, constând d<strong>in</strong> mugure şi o porţiuned<strong>in</strong> lǎstar fi<strong>in</strong>d supuse anterior <strong>in</strong>oculǎrii unei asepsizǎri de suprafaţǎ. Acelasi protocol a fostutilizat si la <strong>in</strong>itierea culturii de meristeme d<strong>in</strong> soiul Astral.Inocularea a constat d<strong>in</strong> plasarea explantelor pe variantele de medii de culturǎ alesepentru experimentare (Tabel nr. 2), repartizate în vase de culturǎ sterile, operaţii le de lucrufi<strong>in</strong>d efectuate la hota cu flux lam<strong>in</strong>ar.33
Change language