Biomarkeri si agenti de chimiopreventie in ... - Prezentare

Nr proiect: 62-078/2008
Titlu proiect:
Biomarkeri si agenti de chimiopreventie in
limfoproliferarile cronice
Director Proiect:
Dr.Viviana Roman, CS II

Parteneri in consortiu:
CO: Institutul de Virusologie, Centrul de Imunologie, Bucuresti
P1: Spitalul Universitar Bucuresti-Clinica de Hematologie
P2: Universitatea de Medicina si Farmacie Bucuresti-Clinica de
hematologie
P3: Universitatea Bucuresti, Baza de cercetare cu utilizatori
multiplii-Biologie Moleculara
Buget: 2.000.000 lei
Adresa web proiect: www.vivianaroman.27.ro (1076 accesari)

Obiectiv/rezultat final proiect:
1) Realizarea unei cercetari complexe interdisciplinare in domenii interconectate de hematologie, biochimie,
biologie referitoare la efectul unor agenti de chimiopreventie in limfoproliferarile cronice prin metode
moderne de biologie celulara si moleculara sau de genetica
2) Acumularea de noi cunostiinte privind actiunea agentilor de chimiopreventie si o mai buna intelegere a
mecanismelor bazale ale biomarkerilor
3) Promovarea rezultatele relevante si in alte tipuri de cancer pentru a obtine strategii pentru viitoarele trialuri
clinice, avand ca scop o chimiopreventie sigura si eficienta
Elemente de noutate ale proiectului; originalitate
1) O noua perspectiva pentru clinicieni prin introducerea acestor biomarkeri in practica clinica pentru
imbunatatirea diagnosticului si a starii de sanatate a populatiei-
2) Prin selectia biomarkerilor si a agentilor de chimiopreventie, modelul experimental creat este unic
3) Pentru prima data in tara Dr. H. Bumbea a realizat determinarea expresiei ZAP-70 (conform cu
protocolul standardizat ERIC- dr. F. Cymbalista, Paris, Fr.) si corelatia cu alti biomarkeri (CD38, CD23)
pentru un diagnostic cat mai precis si un tratament ulterior cat mai adecvat.
4) Pentru prima data in tara Dr. V.Roman a determinat expresia unor biomarkeri specifici LLC-B si va
determina mutatiile somatice in IgVh (conform protocol standardizat ERIC, Dr. K. Stamatopoulos,
Thessaloniki, Gr.)
5) Crearea Grupului de diagnostic in limfoproliferarile cronice si participarea atat in Reteaua de Leucemie
Europeana (ELN) cat si in Grupul de lucru (ELN-WP 7) pentru studiul leucemiei cronice limfocitare (ERIC)

Beneficiarii rezultatelor; potential de aplicare in economie
Impactul economic-financiar: prin prisma costurilor sociale, facilitarea unui diagnostic precoce, o mai buna
schema terapeutica, cu ameliorarea prognosticului si a sperantei de viata chiar pentru pacienti cu prognostic nu
foarte favorabil este un castig avand in vedere reducerea costurilor de spitalizare si implicit a medicamentelor
utilizate. Toate acestea fac ca noile metode de diagnostic si tratament sa fie cost-eficiente.
Impactul tehnic: rezultatele proiectului ar putea contribui la cresterea performantelor laboratoarelor de
biologie moleculara (prin diseminarea unor tehnici noi), ar putea oferi oportunitati pentru invatamant si
perfectionare, crearea de noi locuri de munca pentru absolventi de facultate, la cresterea performantelor
cercetarii românesti si la integrarea acesteia în cercetarea europeana.
Impactul social: crearea unor noi locuri de munca pentru tineri cercetatori; prin asociatii ale pacientilor
bolnavi de cancer sau institutii de interes public, rezultatele din prezentul proiect ar putea conduce la noi terapii,
imbunatatirea eficientei celor in curs, reducerea in mai mare masura a efectelor secundare, conditii mai bune de
munca si viata a pacientilor afectati de aceste maladii, cresterea sperantei si calitatii vietii pacientilor cu
limfoproliferari maligne.
Impactul educational: colectivele de cercetatori implicate în acest proiect vor contribui in cadrul unor de
mese rotunde, simpozioane, ateliere de lucru la diseminarea rezultatelor pe etape ale acestui proiect si inclusiv
la diseminarea de noi tehnici de laborator, atât în Bucuresti, cât si în alte centre universitare cu preocupari în
acest domeniu.

Stadiul de realizare al proiectului in 2010 –conform Act Aditional 2010
Etapa 1
Elaborarea modelului experimental in vederea optimizarilor metodelor de lucru (26.02.2009)
Etapa 2
Expresia unor biomarkeri inainte de tratarea cu AC (15.12.2009)
Etapa 3
Studiul modularii expresiei biomarkerilor luati in studiu inainte si dupa tratarea cu AC (10.12.2010)
Buget de stat:
An derulare Valoarea alocată de la bugetul de stat Cofinanţare
proiect Lei Credite de angajament
2009 110.895 61.206 0
2010 - 264.877 0
2011 1.563.022 - 0
Total 1.673.917 326.083 0

Activitati efectuate:
1) Stabilirea criteriilor de alcatuire a lotului de studiu din pacientii diagnosticati cu LC
2) Colectarea probelor biologice;alcatuirea lotului de pacienti; largirea lotului de pacienti;
3) Stabilirea diagnosticului si standardizarea acestuia prin examen clinic, de laborator si imagistic
4) Determinarea viabilitatii in functie de conditiile experimentale de studiu
5) Determinarea nivelului de expresie a unor markeri implicati in diagnostic
6) Determinarea procentului de celule apoptotice la nivel membranar dupa tratarea cu AC
7) Evidentierea fenomenului de apoptoza prin studiul potentialului transmembranar mitocondrial
8) Determinarea nivelului de expresie si a ARNm corespunzator pentru ZAP-70, CD23 inante de tratarea cu
AC-partial
9) Determinarea nivelului de expresie si a ARN m corespunzator pentru ZAP-70, CD23 dupa tratarea cu ACpartial
10) Determinarea nivelului de expresie si a ARNm corespunzator pentru proteinele pro/antiapoptotice inante
de tratarea cu AC-partial
11) Determinarea nivelului de expresie si a ARNm corespunzator pentru proteinele pro/antiapoptotice dupa
tratarea cu AC-partial
12) Determinarea ARNm corespunzator pentru caspaza 3 si 8 inante si dupa tratarea cu AC
13) Determinarea expresiei si a ARNm corespunzator pentru Hsp 70 si Hsp 90 inante si dupa tratarea cu AC
14) Corelatii intre nivelul de expresie al diferitilor markerilor luati in studiu. Prelucrarea statistica a datelor
stocate si arhivate - partial
15) Diseminarea rezultatelor
Achizitii efectuate: la indicatiile CNMP, nu s-au efectuat

Modul de implicare a tinerilor cercetatori:
Avand in vedere numarul de tineri sub 30 ani (CO-4, P1-2, P2-3, P3-4) implicati in acest proiect, ne dorim ca prin acest
proiect sa ajutam la sustinerea specializarii resurselor umane prin participarea la elaborarea unor de teze de licenta,
teze de dizertatie si teze de doctorat. Toate aceste ne vor duce cu siguranta la o mai buna colaborare intre spitale,
centre de cercetare si universitati.
Diplome si mentiuni (UMF CAROL DAVILA)
PROSPECTIVE ANALYSIS OF PATIENTS WITH HEPATITIS VIRUSES AND CHRONIC LYMPHOPROLIFERATIVE
DISORDERS
Ion IM,Delcea C, NistorSI, Iliescu MC, Ciufu C, Vladareanu AM, Arama V, YES Meeting Porto, 26 september 2010,
Portugal(prezentare orala), Premiu-Honorable Mention la sesiunea Oncology and Molecular Biology
Lucrari de diploma elaborate referitor la tema proiectului:
Implicatiile virusurilor hepatitice in etiopatogenia limfoprolierarilor cornice si acute
-Lucrare aflata in curs de desfasurare- studenta Ion Ioana Maria sub coordonarea stiintifica Prof. Univ. Dr. Ana-Maria
Vladareanu si sub indrumarea Asist. Univ.Dr.Cristina Ciufu
Fenomene autoimmune in leucemia limfocitara cronica-corelatii clinic-evolutive
-Lucrare realizata de studenta Florica Idor, sub coordonarea stiintifica a Prof. Univ. Dr. Ana-Maria Vladareanu si Sef lucr.
Dr Horia Bumbea, Lucrarea a fost sustinuta in cadrul Sesiunii Examene de Diploma UMF Carol Davila la Spitalul
Colentina-27 septembrie 2010-notata cu nota 10.
Teze de doctorat:
1) Evaluarea parametrilor morfologici si imunofenotipici in diagnosticul limfoproliferarilor cronice de linie B, cu
descarcare periferica- implicatii prognostice ; doctorand Ana-Maria Iova, MD, Conducator de doctorat: Prof.Dr. Ana-
Maria Vladareanu
2)Evaluarea markerilor bioumorali si genetici cu valoare prognostica in LLC –implicatii clinice, Dr. Elena
Andrus, sub coordonarea stiintifica a Prof. Dr. Ana-Maria Vladareanu;
3) Implicarea unor substante biologic active in modularea procesului apoptotic in cancer; doctorand Dan
Hotnog, Conducator de doctorat: Dr. Rodica Repanovici, Coordonator stiintific: Dr. Viviana Roman
A existat si o a patra teza de doctorat dar din motive financiare a fost abandonata

Indicatorii de rezultat realizati in cadrul proiectului
1) Studii de necesitate publica de interes local care au cuprins: stabilirea criteriilor de alcatuire a lotului de
studiu din pacientii diagnosticati cu LC ; colectarea probelor si stabilirea diagnosticului si standardizarea
acestuia prin examen clinic, de laborator si imagistic; corelatii intre nivelul de expresie al diferitilor
markerilor luati in studiu. Prelucrarea statistica a datelor stocate si arhivate - partial ;
2) Studiul aspectelor celulare si moleculare ale procesului de apoptoza la nivelul celulelor leucemice (linii
celulare si pacienti);
Modele: -studiul viabilitatii si al apoptozei (la nivel membranar si la nivel mitocondrial) in celulele
leucemice (linii celulare si celulele izolate din sangele periferic al pacientilor diagnosticati cu
LLC-B)
-stabilirea unui model celular in vederea determinarii expresiei proteinelor anti/pro
apoptotice in celule de cultura si probe de sange prelevat de la pacientii diagnosticati cu LLC-B
3) Studiul modificarilor celulare si moleculare privind nivelurile de expresie ale biomarkerilor la nivelul
celulelor leucemice
Modele: -stabilirea unui model celular si molecular pentru verificarea nivelului de expresie a ZAP-70 si
CD23
- stabilirea unui model celular si molecular pentru verificarea nivelului de expresie al Hsp70,
Hsp90
-investigare aprofundata la nivel molecular si celular a raspunsurilor biomarkerilor luati in
studiu la nivelul celulelor leucemice prelevate de la pacientii diagnosticati cu LLC-B la
tratamentul cu AC

Diseminari:
Articole sub tipar-in lucru:
1) The lymphocyte Immunophenotypical pattern in Chronic Lymphocytic Leukemia associated with hepatitis viral infection
Horia Bumbea, Ana-Maria Vladareanu, Anamaria Vintilescu, Sinziana Radesi, , Cristina Ciufu, Minodora Onisai, Cristina
Baluta, Madalina Begu, Camelia Dobrea, Victoria Arama, Adrian Streinu- Cercel, , Sorin Arama, Alexandru Rafila
2) Analysis of genistein-induced apoptosis in human B-cell chronic leukemia, D. Hotnog, Ana-Maria Iova, Horia Bumbea,
Christian Billard, Viviana Roman- in curs de redactare
Carti : Spices and herbs in cancer prevention- V. Roman-contract cu Ed. Springer- in curs de redactare
Comunicari
1) MITOCHONDRIAL APOPTOTIC MOLECULES AND GENISTEIN D.Hotnog, V. Roman, 21st Meeting of the
European Association of Cancer Research, 26-29 June, 2010,Oslo, Norway.
2) EFFECTS OF GENISTEIN ON CELL GROWTH AND CELL CYCLE PROGRESSION IN B CELL CRHONIC
LYMPHOCYTIC LEUKEMIA , D. Hotnog, V. Roman 14th International Congress of Immunology 22-27 August,
2010, Kobe, Japan
3) ANALIZA FAZELOR CICLULUI CELULAR SI A CRESTERII CELULARE CA URMARE A TRATAMENTULUI
CU GENISTEINA UTILIZAND LINIA CELULARA EHEB” D. Hotnog, V. Roman Immunology and Clinical
Allergology Joint Meeting, 28 April-1 May, 2010, Sibiu, Romania
4) POTENTIAL BIOLOGICAL MARKERS IN CHRONIC LYMPHOPROLIFERATIVE DISEASE, V. Roman, D.
Hotnog, H.Bumbea, S.Radesi, BD Balkan Flow Users Meeting Rovinj,31 mai-2 iunie 2010 Croatia
5) POTENTIAL BIOLOGICAL MARKERS IN CHRONIC LYMPHOPROLIFERATIVE DISEASE, Viviana Roman, Dan
Hotnog, Sanziana Radesi, Horia Bumbea,
“Stefan S. Nicolau”, Bucuresti
Medicina Moleculara-Generatia urmatoare, 22-23 sept 2010, Institutul
6) ANALIZA STATUSULUI MUTATIEI IGVH PRIN BIOLOGIE MOLECULAR IN LLC, Viviana Roman, Workshop
Grupul de Diagnostic Hematologic Integrat Grupul de initiativa in diagnosticul LLCA XIX-a CONFERINTA NATIONALA
DE HEMATOLOGIE CLINICA SI TRANSFUZIONALA CU PARTICIPARE INTERNATIONALA 28-31 octombrie 2010
7) ANALIZA RETROSPECTIVA A CAZURILOR CU SUSPICIUNEA DE SINDROM LIMFOPROLIFERATIV
CRONIC – ANALIZA REZULTATELOR IMUNOFENOTIPICE PE O PERIOADA DE 12 LUNI Horia Bumbea,
Oana Cazaceanu, Ana-Maria Vladareanu, Anamaria Vintilescu, Madalina Begu, Cristina Baluta, Mihaela Gaman,
Minodora Onisai, Anca Nicolescu, Viola Popov ,Bucuresti, Romania AL VI-lea Congres National de Citometrie 6-8 mai
2010 Eforie N

Diseminari (II):
8) DIAGNOSTICUL LYMPHOMA/LEUKEMIA BURKITT -PREZENTARE DE CAZ DIAGNOSIS OF BURKITT
LYMPHOMA/LEUKEMIA – CASE REPORT Anamaria Vintilescu, Horia Bumbea, Oana Cazaceanu, Ana-Maria
Vladareanu, Madalina Begu, Cristina Baluta, Dana Vasile, Mihaela Gaman, Minodora Onisai, Lavinia Barsan, Cristina
Marinescu Bucuresti, Romania AL VI-lea Congres National de Citometrie 6-8 mai 2010 Eforie N
9) DIAGNOSTICUL LYMOHOPMA/LEUKEMIA BURKITT-PREZENTARE DE CAZ Anamaria Vintilescu (Iova), AM
Vlãdãreanu, H.Bumbea, M. Begu, C. Bãluþã, O Cãzãceanu, D.Vasile, L. Barsan, M. Onisai CONGRESUL ANUAL AL
ASOCIATIEI MEDICALE ROMÂNE 6 - 8 mai 2010
10) VIRAL INFECTIOUS IN CHRONIC LYMPHOPROLIFERATIVE DISORDERS - IMMUNOPHENOTYPIC
CHANGES Horia Bumbea, , Sinziana Radesi ,Ana-Maria Vladareanu, Anamaria Vintilescu, Viviana Roman, , Dan
Hotnog , Victoria Arama ,Cristina Ciufu, Cristina Baluta, , Oana Cazaceanu , Andreea Ichim, Irina Voican, Diana
Cisleanu, Mihaela Gaman,, Cristina Marinescu, Anca Nicolescu, Minodora Onisai,Sorin Arama, BD Balkan Flow Users
Meeting Rovinj,31 mai-2 iunie 2010 Croatia
11) VIRAL INFECTIOUS IN CHRONIC LYMPHOPROLIFERATIVE DISORDERS - IMMUNOPHENOTYPIC
CHANGES Horia Bumbea, Ana-Maria Vladareanu, Sinziana Radesi, Anamaria Vintilescu, Viviana Roman, Cristina Ciufu,
Dan Hotnog, Victoria Arama, Minodora Onisai, MV Popov, Cristina Baluta, Oana Cazaceanu, Andreea Ichim, Irina
Voican, Diana Cisleanu, Cristina Marinescu, Sorin Arama, A Rafila, A Streinu-Cercel, Anca Nicolescu, Mihaela Gaman,
A. Ichim, M. Begu EHA 2010 Barcelona, 10-13 June 2010, 14th Congress of the European Hematology Society.
12) ANALIZA RETROSPECTIVA A REZULATELOR DIAGNOSTICULUI IMUNOFENOTIPIC IN
LIMFOPROLIFERARILE CRONICE. Horia Bumbea-UMF Bucuresti SUUB, Clinica Hematologie, Workshop Grupul de
Diagnostic Hematologic Integrat Grupul de initiativa in diagnosticul llca xix-a conferinta nationala de hematologie
clinica si transfuzionala cu participare internationala 28-31 octombrie 2010
Evenimente organizate
MASA ROTUNDA cu tema ,, Actualitati si perspective in limfoproliferarile cornice-translatia datelor stiintifice in practica
clinica’’, organizata de Clinica Hematologie Spitalul Universitar de Urgenta Bucuresti, in data de 11 Decembrie 2010, ce
cuprinde in program prezentari din tema Proiectului de Cercetare BAC-LC
1. Leucemia Limfatica Cronica-de la teorie la practica, obiect al cercetarii fundamentale si clinice-activitatea Grupului de
initiative in diagnosticul LLC- Sef lucr. Dr Horia Bumbea
2. Rezultatele analizei imunofenotipice de confirmare a diagnosticului de leucemie limfocitara cronica –program derulat in
perioada 2009-2010- Dr Anamaria Vintilescu, Sef lucr. Dr Horia Bumbea, Dr Sanziana Radesi, Prof Dr Ana-Maria
Vladareanu
3. Biomarkeri in limfoproliferarile cornice-raprort intermediary al desfasurarii proiectului BAC-LC-Dr Viviana Roman

Activitatile prevazute a se realiza in anul 2011
Etapa 4
Studiul modularii expresiei biomarkerilor luati in studiu inainte si dupa tratarea cu
AC si implicatii ale agentilor de chimiopreventie in ciclul celular
1) Determinarea nivelului de expresie si a ARNm corespunzator pentru CD38 CD20, inante si dupa
tratarea cu AC
2) Determinarea nivelului de expresie si a ARNm corespunzator pentru proteinele
pro/antiapoptotice inante si dupa tratarea cu AC
3) Determinarea prezentei sCD23 in seruri recoltate de la pacientii diagnosticati cu LLC-B
4) Determinarea activitatii telomerazice inainte si dupa tratarea cu AC
5) Corelatii intre activitatea telomerazica si ciclu celular
6) Determinarea nivelului de expresie a ciclinelor D1, D2, inainte si dupa traterea cu AC.
7) Determinarea nivelurilor de expresie ale inhibitorilor ciclului celular inante si dupa tratarea cu AC
8) Corelatii intre nivelul de expresie al diferitilor markerilor luati in studiu. Prelucrarea statistica a
datelor stocate si arhivate din fazele anterioare
9) Stabilirea unui set minim de biomarkeri care raspund in acelasi mod la modularea prin AC in
LLC.
10) Corelarea tipurilor patologice luate in studiu si datelor provenite din laboratorul preclinic cu
datele experimentale rezultate in urma tratamentelor. Interperetarea si evaluarea studiului
realizat.

Obiectivele si rezultatele preconizate a se obtine; elementele de
originalitate mentinute
Obiective si rezultate
1. Acumularea de noi cunostiinte privind actiunea agentilor de chimiopreventie si o mai buna
intelegere a mecanismelor bazale ale biomarkerilor ca urmare a cercetarilor efectuate
2. Introducerea in practica curenta de diagnostic a rezultatelor obtinute in cadru proiectului avand
in vedere ca o paleta de biomarkeri specifici utilizati in determinarea diagnosticului poate
conduce la un tratament cat mai adecvat, chiar personalizat
3. Corelatiile-partiale-obtinute pana acum ne indreptatesc sa credem ca cercetarile ulterioare vor
aduce un plus de informatie si ca vom fi capabili, sa efectuam un diagnostic si un tratament in
conformitate cu standardele din ELN-ERIC asa cum o fac si alte laboratoare din aceasta retea
4. Detectarea mutatiilor din IgVh ne va oferii posibilitatea de a fi trecuti in lista laboratoarelor care
efectueaza acest tip de analiza (si acest tip de corelatii intre biomarkeri) din cadrul ELN-ERIC
5. Promovarea rezultatele relevante si in alte tipuri de cancer pentru a obtine strategii pentru
viitoarele trialuri clinice, avand ca scop o chimiopreventie sigura si eficienta

Estimarea necesarului de finantare pentrul ultimul an
Cu toate ca nu au fost asigurate decat o parte din fondurile contractate (aprox. 13% in 2009 si
aprox. 24% in 2010) proiectul a continuat in limita fondurilor disponibilizate.
Asa cum am mentionat si in cererile referitoare la suplimentare de fonduri (septembrie 2009,
aprilie 2010), prin eforturi personale conjugate, atat ale mele cat si ale colegului meu, Dr. Horia Bumbea am
reusit sa fim acceptati, nu numai in cadrul retelei europene de leucemie (European LeukemiaNet) ci si in cadrul
European Research Initiative on CLL (ERIC)- WP 7, dedicat leucemiei cronice limfocitare-CLL. ERIC reprezinta
rezultatul asocierii unui numar considerabil de cercetatori (atat din ELN cat si din SWG- scientific working group
al EHA-European Hematology Association) implicati in cercetarea clinica din diferite tari europene (Franta,
Germania, Marea Britanie, Grecia, Italia, Spania, Suedia), fiind deci o onoare pentru noi ca am fost acceptati in
cadrul organizatiei mai sus referite.
Acceptarea in cadrul acesteia s-a facut pe baza rezultatelor activitatii noastre anterioare de
cercetare si a proiectului PN II nr.62-078/2008 privind studiul aprofundat al unei game extinse de biomarkeri
din limfoproliferarile cronice, corelatiile dintre acestia si implicatiile ulterioare privind diagnosticul si cursul bolii.
Grupul ERIC are drept scop standardizarea metodelor pentru mai multi biomarkeri cu caracter de prognostic in
limfoproliferarile cronice in vederea stratificarii pacientilor in trailurile clinice. In vederea acestui lucru, pentru
laboratoarele din statele membre se ofera sprijin logistic necesar pentru indeplinirea acestui obiectiv. In aceasta
conjunctura am inceput deja colaborarea cu Dr. Kostas Stamatopoulos privind standardizarea in Romania a
metodei de determinare a statusului mutational al IgVh la pacientii cu limfoproliferari cronice, Centrul de
Imunologie - Institultul “Stefan S. Nicolau” Bucuresti si Centrul de Hematologie-Spitalului Universitar Bucuresti
fiind singurele unitati de cercetare din tara care vor realiza aceasta analiza.
Pentru ca activitatile pe plan national sa fie complementare si in sinergie cu cele derulate pe plan
european, supun atentiei dumneavoastra rugamintea de a mentine bugetul proiectului nostru PN II
nr.62-078/2008 macar la nivelul contractat in anul 2008 pentru anul 2011 astfel incat nivelul de
finantare sa ne permita o buna desfasurare a activitatilor la nivel european, in vederea continuarii muncii
noastre, evitand pierderea informatiilor si a unor tehnici utile pe care le putem obtine de la partenerii europeni
fara costuri suplimentare pe plan national. Ceea ce solicitam este un sprijin real pentru eficientizarea activitatii
de cercetare in Romania

Scrisori de sustinere
Accept publicare