manual test_mate - CMW Saúde

Manual de InstruçõesSistema Test-mate ChEModelo 400

Sistema Test-mate ChEModelo 400Para determinação quantitativa de colinesterase em sanguetotal para monitorar exposição à pesticidas.Para uso em diagnóstico in vitro. Somente para uso nolaboratório por técnicos de laboratório treinados.Fabricado:EQM Research Inc.2814 Urwiler AvenueCincinatti, Ohio 45211ESTADOS UNIDOSImportado e distribuídoCMW Saúde e Tecnologia, Importação e Exportação Ltda.Av. João Pedro Cardoso, 183 - Jardim AeroportoCEP. 04355-000 - São Paulo-SP - BRASIL - Fone: 11 5031-9337CNPJ. 07.430.231/0001-84Resp. Técnico - Dr. Acylino de Queiroz Oliveira - CRF-SP 19.415Registro Nº: 80430080001CONSERVAR A TEMPERATURA AMBIENTE.

ÍndiceŸ Finalidade .....................................................................04Ÿ Explanação do Test-mate ChE .....................................05Ÿ Princípios do Test-mate ChE .......................................06Ÿ Configuração do Test-mate ChE (Instalação) ...............07Ÿ O Analisador Fotométrico Test-mate ChE.....................09Ÿ Realizando o procedimento de ensaio..........................11Ÿ Testando grandes grupos .............................................17Ÿ Calibração e Controles de Qualidade ...........................18Ÿ Valores esperados e interferênciascom o Test-mate ChE ...................................................19Ÿ Acurácia, Precisão e Linearidade do Test-mate ChE ...20Ÿ Variabilidade entre operadores do Test-mate ChE .......21Ÿ Interpretação de Resultados.........................................22Ÿ Precauções operacionais e limitações..........................23Ÿ Riscos ...........................................................................24Ÿ Manutenção e Informação de Serviço ..........................25Ÿ Apêndice A - Esquema do procedimento de teste........26Ÿ Apêndice B - Coleta de amostras e especificações dosreagentes......................................................................27Ÿ Apêndice C - Especificações do AnalisadorFotométrico...................................................................29Ÿ Apêndice D - Mensagens de Erro do AnalisadorFotométrico...................................................................30

FinalidadeO Test-mate ChE é utilizado na avaliação e diagnóstico deintoxicação assintomática por pesticidas. A maioria dospesticidas organofosforados ou carbamatos inibem asenzimas eritrocitárias sanguíneas acetilcolinesterase (AChE)e/ou a colinesterase plasmática (PChE).1,2 O grau de inibiçãoenzimática é proporcional à extensão da exposição. A AChE égeralmente preferida pela sua baixa variabilidade biológica efalta de interferentes relativos ao PChE. Medidas préexposição (basal) de AChE e/ou PChE devem ser obtidaspara reduzir o efeito da variabilidade biológica.1 O método detratamento a curto prazo é simplesmente remover o pacienteda exposição aos pesticidas. O método de tratamento emlongo prazo é promover procedimentos seguros de manuseiodos pesticidas para evitar exposições futuras. O tratamentode emergência de pacientes seriamente intoxicados compesticida deve sempre ser baseado primariamente nossintomas físicos do paciente em vez de adiar o tratamento porresultados de testes pendentes.O Test-mate ChE é utilizado em laboratório clínico por umtécnico treinado, sob a supervisão do responsável pelolaboratório. Antes que o operador começar a usar o sistemaem amostras de sangue de pacientes, é necessário treinar oprocedimento de ensaio completo várias vezes para produzirresultados consistentes e confiáveis.Os resultados doSistema de Teste Test-mate ChE devem ser avaliadas por umprofissional de saúde qualificado, como um médico,enfermeiro ou um trabalhador de saúde pública treinado.Apesar de o ensaio de colinesterase ser de grande valor nodiagnóstico da sensibilidade a succinilcolina e no diagnósticode disfunção hepática, este sistema não se destina para serusado para esta finalidade.DECLARAÇÃOATENÇÃO - Os kits reagentes Colinesterase eritrocitária eColinesterase plasmática são comercializados em separadoe tem registro em separado na ANVISA.04

Explicação do Test-mate ChETest-mate ChE é útil no monitoramento da exposiçãoocupacional a pesticidas. Medindo rotineiramente os níveisde colinesterase sanguínea, estes trabalhadores podem serprotegidos da sobre-exposição antes que se tornesintomática. Também programas de manuseio seguro depesticidas podem ser avaliados pela sua efetividade ecumprimento, levando a melhora na proteção dostrabalhadores a longo prazo.Figura 1 - Sistema de Teste de Colinesterase Test-mate ChE (Modelo 400)O Test-mate ChE é um sistema completo para o ensaio dacolinesterase. Todos os suprimentos e equipamentonecessários para realizar 96 testes são adequadamenteacondicionados em um estojo de armazenamento. O sistemarequer apenas 10 µL de amostra para cada teste sanguíneo, oqual pode ser facilmente obtido a partir de uma amostracoletada com uma lanceta, da ponta do dedo. O ensaio totalpode ser completado em menos de 4 minutos, facilitando umarápida avaliação do estado da intoxicação.O componente principal do sistema Test-mate ChE é oanalisador fotométrico. O analisador fotométrico é umaplicativo dedicado compacto, com fotômetro de absorção decomprimento de onda fixo, fonte de alimentação de uma05

Desligar o analisador no interruptor do lado direito na frente doequipamento. Um sinal sonoro curto (BIP) irá soar e a revisãodo "software" interno do sistema será exibida poraproximadamente 3 segundos. Durante este período detempo, o microprocessador faz o diagnóstico interno paraassegurar que o equipamento está em condições de operarapropriadamente.Depois do período de autodiagnóstico interno, umamensagem do sistema é exibida. Esta mensagem mostra omodo de teste atual, a temperatura atual em graus Celsius e avoltagem da bateria ou da fonte externa de eletricidade. AChEindica que o analisador está pronto para o teste deColinesterase eritrocitária enquanto que o PChE indica que oequipamento está ajustado para testar colinesteraseplasmática. A temperatura do equipamento é exibida emincrementos de um décimo de graus Celsius. Se atemperatura estiver fora do intervalo de operaçãorecomendada (menos do que 15 ou maior do que 35 grausCelsius), a seção de temperatura da tela de mensagenspiscará. A voltagem da bateria é exibida em incrementos deum décimo de Volts. Se a voltagem cair para menos do que6.0 V, a seção de voltagem da tela de mensagens pisca. Oequipamento ainda provê resultados acurados quando aseção de voltagem da tela de mensagens estiver piscando.Uma vez que a voltagem se tornar muito baixa para umaoperação confiável, o equipamento exibira uma mensagemde erro da bateria.O analisador Test-mate é controlado usando três botões. Obotão MODE é usado para selecionar entre as funções deensaio de AChE e PChE. Pressionar o botão MODE desde atela de mensagens faz com que o modo de ensaio mude. Oanalisador permanecerá neste modo - mesmo que ointerruptor seja desligado - até que o botão MODE sejapressionado de novo. O botão DONE é usado para retornar atela de mensagens, uma vez que os resultados doprocedimento de ensaio tenham sido registrados. O botão10

dedo e limpar com uma gaze. Esperar alguns segundos paradeixar a segunda gota de sangue se formar na ponta do dedo,para a coleta. Nunca aperte o dedo para obter o sangue! Se asegunda gota de sangue não se formar prontamente, énecessário lancetar de novo a ponta do dedo do paciente.Selecionar um tubo capilar e inverter cuidadosamente orecipiente de capilares. Antes que o primeiro capilar em umnovo kit de ensaio seja obtido, a selagem branca embaixo datampa de rosca prateada deve ser removida e descartada.Segurar o capilar horizontalmente entre os dedos polegar eindicador. Inserir a ponta final do capilar na gota de sangue dodedo do paciente. Lentamente o sangue preenche o capilar.Uma vez que o capilar esteja completamente preenchido,retirar o capilar. Cuidadosamente enxugue qualquer sanguefora do capilar puxando o capilar sobre uma gaze desde omeio até o final. Colocar a gaze no dedo do paciente e peçapara ele segurar até que o dedo lancetado pare de sangrar.Inserir o capilar no frasco de tubo de ensaio e rosqueiefirmemente. Segurar o tubo de ensaio pelas extremidadesentre o polegar e o indicador e agitar vigorosamente por 15segundos para dispersar o sangue.13

O capilar deve estar orientado corretamente antes que o tubode ensaio seja inserido de volta no analisador. Segurar o tubode ensaio pela tampa, na horizontal e deixar o capilar seacomodar no fundo do frasco. Virar delicadamente o tubo deensaio para a vertical de uma maneira que o capilar fixo nolado do frasco esteja agora voltado para o operador. Inserir otubo no analisador de modo que o capilar esteja em direção aopequeno ponto preto na frente do painel do analisador.Pressionar o botão TEST e uma mensagem de leitura seapresenta por 15 segundos, seguida de uma mensagem pararemover o tubo.Deslizar o tubo para fora do analisador enquanto segura otubo pela porção superior do vidro, desatarraxe a tampa preta.Colocar o frasco de vidro e a tampa a parte, em um lugar ondeo frasco não pode ser derrubado acidentalmente. Pressionaro botão TEST e o analisador apresenta a mensagem paraadicionar o reagente.Desconectar um único micropoço da placa de reagentesegurando a placa para baixo com uma mão enquanto seguraa abinha com a ferramenta de reagente usando a outra mão.Puxar a abinha e descartar na embalagem de risco biológico.Adicionar 3 gotas de água destilada do frasco transparente aomicropoço de reagente. Usando uma pipeta de transferência,14

misture o conteúdo do micropoço até que o reagente estejacompletamente dissolvido. Observar que o reagente em pópode mudar da cor branca para amarelada com oenvelhecimento. Esta mudança de cor não tem efeito noensaio.Enquanto se mantém a placa ligeiramente inclinada em umamão, transferir todo o reagente dissolvido para a pipeta.Pipetar o reagente dissolvido no tubo de ensaio eimediatamente aperte o botão TEST. Após o botão TEST serpressionado, o analisador exibirá uma mensagem para agitaro tubo de ensaio.Rosquear firmemente a tampa preta novamente no frasco eagite vigorosamente por 5 segundos, para misturar assoluções. De novo, o capilar deve estar orientado15

corretamente antes que o tubo de ensaio seja inserido devolta no analisador. Segurar o tubo de ensaio pela tampa, nahorizontal e deixar o capilar se acomodar no fundo do frasco.Cuidadosamente virar o tubo de ensaio para a vertical deuma maneira que o capilar fixo no lado do frasco esteja agoravoltado para o operador. Inserir o tubo no analisador de modoque o capilar esteja em direção ao pequeno ponto preto nafrente do painel do analisador. Pressionar o botão TEST: umamensagem de incubação se apresenta por cerca de umminuto (máximo 80 segundos desde o tempo em que o botãoTEST foi pressionado após adicionar o reagente). Emseguida, a mensagem de leitura se apresenta por 50segundos, seguida por uma mensagem para remover o tubo.Remover o do analisador e descartar na embalagem pararesíduos de risco biológico. Pressionar o botão TEST e aprimeira mensagem de resultado se apresenta .O analisador Test-mate provê seis mensagens de resultadosno modo AChE e quatro mensagens de resultados no modoPChE. Os livros de registro da AChE e PChE tem o númerocorrespondente de campos de dados. Entre a primeiramensagem de resultado no livro de registro e entãopressionar o botão TEST. Repetir este processo até que todasas mensagens de resultados tenham sido anotadas no livrode registro. Quando a última mensagem de resultado forexibida, apertando o botão TEST retornará o analisador àprimeira mensagem de resultado. Depois que todos osresultados estiverem anotados no livro de registros,pressionar o botão DONE, para retornar ao "SYSTEMPROMPT".16

Testando grandes gruposO sistema de teste de colinesterase Test-mate ChE contémprovisões para reduzir o tempo necessário quanto foremtestados grandes grupos de pacientes. Para acelerar oprocedimento de ensaio, toda a placa de reagente deve serdissolvida de uma só vez. Assim que o reagente estiverdissolvido, ele permanecerá estável por 1 semana quandoprotegido da luz. O reagente permanece estável por 1 mês sefor mantido no refrigerador quando não estiver em uso.Para dissolver toda a placa de reagente, começar destacandotodos os 96 micropoços da placa com a ferramenta dereagente. Adicionar 3 gotas de água destilada do frascogotejador transparente de 15 mL em cada um dos 96micropoços. Usando uma pipeta de transferência, misture oconteúdo de cada micropoço até que todo o reagente estejacompletamente dissolvido. Enquanto segurar a placaligeiramente inclinada com uma mão, aspire o reagentedissolvido de um micropoço com uma pipeta de transferênciae então pipete o reagente no frasco "blank" de 15 mL. Repetireste procedimento para cada um dos 96 micropoços.Adicionar 12 gotas adicionais de água destilada do frascogotejador transparente de 15 mL para o frasco "blank" de 15mL. Desrosquear a tampa gotejadora do frasco transparentee transferir a mesma para o frasco "blank". Descartar o frascotransparente e a água destilada remanescente. Agitar ofrasco "blank" por cerca de 10 segundos para assegurar-se amistura completa.Para executar o procedimento de ensaio com este reagentepré dissolvido, simplesmente adicionar 3 gotas de reagentedo frasco gotejador "blank" de 15 mL, ao invés da etapa dapipeta de transferência. Imediatamente após adicionar as 3gotas pressionar o botão TEST. Tampar e agitar o tubo deensaio e prosseguir com o procedimento de ensaio normal.17

Calibração e Controles de QualidadeCalibração: O analisador fotométrico Test-mate ChE écalibrado na fábrica. Nenhuma calibração adicional énecessáriaControle de Qualidade: O uso de um operador não exposto émelhor, a variabilidade intra individual da colinesteraseeritrocitária e plasmática é menos do que 5% por semana emenos do que 10% por mês.8 Alternativamente, sanguevenoso refrigerado (com anticoagulante EDTA) é estável porpelo menos um mês. Devem ser analisados controles emcada dia de rotina de trabalho.18

Valores esperados e interferências com o Test-mate ChEOs valores a seguir foram determinados usando sanguenormal de homens e mulheres do banco de doadores, entre20 e 60 anos de idade, localizados no centro-oeste dosEstados UnidosN Média DP IntervaloAChE, U/mL 40 3.68 0.47 2.77 - 5.57AChE, U/g Hgb 40 27.1 2.9 21.9 - 37.3PChE, U/mL 40 2.03 0.40 1.35 - 3.23Interferências Fisiológicas: AChE está deprimida nahemoglobinúria paroxística noturna (HPN)4. Em anemiasmacrocíticas ou microcíticas severas, a razãohemoglobina/colinesterase pode interferir na correção dahemoglobina e consequentemente, na atividade da AChE.PChE está deprimida na falência hepática, má nutrição,aumentada nas hepatites virais/alcoólicas e infecções.3Interferências analíticas: Drogas que inibem a colinesterasetais como piridostigmina, vão diminuir a colinesterase.Resíduos de pesticidas adsorvidos na pele podem diminuir osvalores por artefato. Lavar a pele com detergente quecontenha amônia quaternária, tais como cloreto debenzetônio que pode diminuir os valores por artefato, chequea etiqueta do detergente antes do uso.19

Acurácia, Precisão e Linearidade do Test-mate ChEAcurácia: o Test-mate ChE foi comparado com o kit daBoehringer Mannheim Cholinesterase No. 450035 noAnalisador Hitachi 704 (BM/H).10 O método BM/H foirealizado no plasma (PChE) ou em sangue total diluído(AChE) corrigido pelo hematócrito, por isso em contraste como Test-mate ChE de U/mL em sangue total a 25oC ou U/g Hgba 25oC, os resultados da BM/H foram expressos como U/Lplasma (PChE) a 37oC ou U/L hemácias (RBCs) (AChE) a 37oCDoadores normais: (X, BM/H, punção venosa) vs. (Y, Testmate,ponta do dedo)N r Pendente Intercepto IntervaloAChE, U/L RBC vs U/g Hgb 44 0.78 0.000894 108 ±25%CVPChE, U/L plasma VS. U/L sangue 44 0.96 0.253 440 ±50%CVPesticida dosado e doadores normais (X, BM/H, punçãovenosa) vs. (Y, Test-mate, punção venosa)N r Pendente Intercepto IntervaloAChE, U/L RBC vs U/g Hgb 86 0.98 0.00158 322 ±100%CVPChE, U/L plasma VS. U/L sangue 87 0.98 0.457 -210 ±100%CVNota: r, o coeficiente de correlação, é extremamente sensívelao intervalo (aumenta com a %CV do intervalo).Precisão:Intra-ensaio, N=40, 1 - 5 U/mL: 3 - 5% CV. Entre-ensaios,N=40, 1 - 5 U/mL: 5 - 7% CV.Linearidade:AChE eritrocitária: 0 - 7 U/mL; 0 - 50 U/g Hgb.PChE plasmática: 0 - 7 U/mL20

Variabilidade entre operadores do Test-mate ChEDez operadores diferentes realizaram dez medidas emamostras normais e anormais de punção venosa (N=100). Asamostras anormais foram preparadas pela dosagemconhecida com pesticida (paraoxon).NormalAnormalAChE AChE PChE Hgb AChE AChE PChE HgbU/mL U/g U/mL g/dL U/mL U/g U/mL g/dLMédia 5.63 33.8 1.72 16.8 1.38 9.7 1.03 14.3SD 0.21 0.8 0.15 0.5 0.12 0.8 0.08 0.3%CV 3.7 2.4 8.5 2.7 9.0 7.9 7.5 2.2Esta variabilidade entre operadores do Test-mate ChE estáde acordo com os critérios de proficiência do grupo deusuários do CAP (Colégio Americano de Patologistas) de±20% da média para todos as análises enzimáticas (incluindocolinesterase) e compara favoravelmente com os dados depesquisa do CAP 1996 para o teste de colinesterase(Pesquisa Bioquímica p. 84, amostra C7-02) entre todos osequipamentos. A Organização Mundial de Saúde, assimcomo os estados da Califórnia e do Texas, fizeramrecomendações específicas para o teste de colinesteraseeritrocitária (AChE corrigida pela hemoglobina) quando testarpara intoxicação por pesticida. A precisão entre operadoresda AChE corrigida pela hemoglobina, reportada neste estudo(N = 100, CV = 2.4%) é superior a média de qualquer grupo deusuários de equipamento/sistema de reagentes decolinesterase no CAP 1996.21

Interpretação de ResultadosNo modo de AChE o analisador fotométrico exibe osseguintes resultados:ŸŸŸŸŸŸAChE (colinesterase eritrocitária) em U/mL (unidades pormililitro)AChE em %N (porcentagem normal) relativa a 3.79 U/mLHgb (hemoglobina) em g/dL (gramas por decilitro)Hgb em %N relativo a 14.4 g/dLQ (quociente) em U/g (unidades por grama)Q em %N relativo a 26.3 U/gQ é o valor da colinesterase eritrocitária corrigida pelahemoglobina. Q é computado pela divisão do resultado deAChE pelo resultado da Hgb. Se o nível de hemoglobina forabaixo de 5g/dL, o Q não é calculado.No modo de PChE o analisador fotométrico exibe osseguintes resultados:ŸŸŸŸPChE (colinesterase plasmática) em U/mLPChE em %N (porcentagem normal) relativa a 3.01 U/mLHgb em g/dLHgb em %N relativo a 14.4 g/dLDiminuição da colinesterase a

Precauções operacionais e limitaçõesO sistema de Teste de Colinesterase Test-mate ChE ésomente para uso em diagnóstico in vitro. O sistema ésomente para uso de laboratório por técnicos de laboratóriotreinados.O sistema de Teste de Colinesterase Test-mate ChE é usadoapenas para determinação quantitativa de colinesterase emsangue total para monitorar exposição à pesticidas. Apesar deo ensaio de colinesterase ser de grande valor no diagnósticoda sensibilidade a succinilcolina e no diagnóstico dedisfunção hepática, este sistema não se destina para serusado para esses propósitos.O analisador fotométrico fornecido como parte do Sistema deTeste de Colinesterase Test-mate ChE é para uso somentecom o kit de Ensaio de Colinesterase Eritrocitária AChE e como kit de ensaio de Colinesterase Plasmática PChE e NÃO sedestina para uso com nenhum outro kit reagente.O kit de Ensaio de Colinesterase Eritrocitária AChE e o kit deensaio de Colinesterase Plasmática PChE são para usosomente com o analisador fotométrico suprido como parte doSistema de Teste de Colinesterase Test-mate ChE e não sãodestinados para uso com nenhum outro método manual ouautomatizado ou equipamento.O analisador fotométrico não é a prova de água. Evitarrespingos de líquidos no equipamento.Nunca TOCAR a metade inferior dos frascos de vidro quandomanusear os tubos de ensaio, os mesmos devempermanecer limpos para que o analisador fotométrico opereadequadamente. Para impedir danos ao sistema ópticodentro do analisador fotométrico, usar somente luvas semtalco e evitar usar luvas com talco com o Sistema Test-mateChE.23

RiscosO Test-mate ChE é seguro para o operador e para o paciente,desde que os procedimentos de segurança sejam seguidoscuidadosamente, principalmente no que diz respeito ao usode luvas e do descarte dos resíduos. Lembre que amostras desangue podem transmitir doenças infecciosas tais comohepatite e AIDS, e, portanto tais amostras devem sermanuseados com o cuidado apropriado. Para impedir dadosno sistema óptico dentro do analisador fotométrico, usarsomente luvas sem talco e evitar usar luvas com talco com oSistema Test-mate ChE.O tratamento de emergência de pacientes seriamenteintoxicados deve basear-se primariamente nos sintomasfísicos do paciente, do que nos resultados de colinesterase.O (Physicians' Desk Reference for Generics) índiceterapêutico de 1995 lista apenas dois tratamentos paraintoxicação por pesticidas: atropina (páginas 248 - 249) epralidoxima (páginas 2303-2306). Na última referência (pag.2304) é declarado que "O tratamento de intoxicação pororganofosforados deve ser iniciada imediatamente semesperar pelos resultados de testes de laboratório. Célulasvermelhas sanguíneas, colinesterase plasmática e ... [outrostestes] devem ser úteis na confirmação do diagnóstico e paraseguir o curso da doença."No capítulo 4 de Avaliações de Drogas de 1995, publicadopela Associação Médica Americana, "Drogas Usadas noGerenciamento de Intoxicações" páginas 66-67, "Diagnósticode intoxicações. Exposições conhecidas associadas comsintomas compatíveis é o suficiente para se iniciar a terapiacom atropina. Se os efeitos nicotínicos persistirem,pralidoxima deve ser administrada (Murphy, 1986; Minton andMurray, 1988). A terapia não deve ser adiada por resultadospendentes de testes de laboratório; células vermelhaseritrocitárias e colinesterase plasmática ... ajudam a confirmaro diagnóstico." Mesmo se usada inapropriadamente, nem aatropina ou a pralidoxima são significativamente tóxicas seusadas das doses recomendadas.24

Manutenção e Informação de ServiçoSistema de Teste de Colinesterase Test-mate ChE nãorequer nenhuma manutenção rotineira. Diferentemente deoutros equipamentos fotométricos, o analisador fotométricodo Test-mate ChE emprega um diodo emissor de luz (LED)de estado sólido como a fonte de energia analítica. Este LEDnão se queima e não está sujeito a quebras.Se o painel frontal do analisador fotométrico tornar-seembaçado com impressões digitais, simplesmente limpe opainel com um papel toalha levemente úmido. Não usarlimpadores abrasivos ou soluções de limpeza no painel doequipamento.Se algum componente do Sistema de Teste de ColinesteraseTest-mate ChE não funcionar apropriadamente, por favorcontate a EQM Research ou seu distribuidor para assistência,antes de retornar ao sistema. Se o componente avariadoprecisar de serviço de fábrica, um número de autorização deretorno de mercadoria (RMA) será emitido. Envie o Test-mateChE com a descrição do problema para a EQM Research, apostagem e o seguro são pré pagos.Por favor marqueclaramente o número RMA fora da caixa de envio. A EQMResearch não pode assumir nenhuma responsabilidade pordanos durante o trajeto. Garantias de reparo são sem custo.Serviços que não tem garantia são cobrados baseados notempo e nos materiais. O Test-mate ChE será devolvido,postagem e seguros serão pré pagos.25

Apêndice A - Esquema do procedimento de teste1. Ligar o analisador fotométrico. Pressionar o botão MODEpara selecionar o procedimento de ensaio de AChE ou oprocedimento de ensaio PChE. Pressionar o botão TESTpara começar o ensaio.2. Inserir o novo tubo de ensaio no analisador. Pressionar obotão TEST para continuar o ensaio.3. Quando avisado pelo analisador, remover o tubo de ensaio.Pressionar o botão TEST para continuar o ensaio.4. Preencher um capilar com 10 µL de sangue o colocar notubo de ensaio. Agitar o tubo de ensaio vigorosamente por15 segundos. Alinhar o capilar e então inserir o tubo deensaio no analisador. Pressionar o botão TEST paracontinuar o ensaio.5. Quando avisado pelo analisador, remover o tubo de ensaio.Pressionar o botão TEST para continuar o ensaio.6. Dissolva o reagente com 3 gotas de água destilada.Adicionar o reagente dissolvido no tubo de ensaio usando apipeta de transferência. Imediatamente pressionar o botãoTEST para continuar o ensaio.7. Agitar o tubo de ensaio por inversão por 10 segundos.Alinhar o capilar e então inserir o tubo de ensaio noanalisador. Pressionar o botão TEST para continuar oensaio.8. Quando avisado pelo analisador, remover o tubo de ensaio.Pressionar o botão TEST para continuar o ensaio.9. Registrar as leituras do analisador usando o botão TESTpara avançar os números exibidos. Pressionar o botãoDONE quando terminar o ensaio.26

Apêndice B - Coleta de amostras e especificações dosreagentesColeta de amostras: Sangue fresco da ponta do dedo ousangue venoso (anticoagulado com EDTA) podem serusados. O lugar da punção deve ser totalmente lavado antesde coletar a amostra para minimizar uma possívelcontaminação da amostra de resíduo de pesticida adsorvidona pele. Para evitar coagulação, o capilar deve ser colocadono tubo de ensaio dentro de 10 segundos. Colinesterase podese reativar, principalmente com inibição de pesticidacarbamato durante armazenagem prolongada. Tal reativaçãopode produzir um "falso negativo".7Especificações dos reagentes: Para uso em diagnóstico invitro. Para determinação quantitativa de colinesterase emsangue total para monitorar exposição à pesticida. Para usosomente de laboratório por técnicos de laboratório treinados.1. Tampão: 2 mL por tubo de ensaio. Contem fosfato,surfactante, corante e conservante EDTA2. Água destilada: 15 mL em frasco plástico gotejador3. Reagente AChE para Colinesterase eritrocitária: liofilizado,96 testes por placa. Armazene o reagente liofilizado a 15 -30oC, protegido da luz. Reconstituir com 3 gotas de águadestilada. Estável por 72 horas a 15 - 35oC depois dareconstituição. O ensaio final inclui: 1 mM AcTc, 0.3 mMDTNB, 20 µM As1397, 50 mM de fosfato de potássio e 0.1%de Triton X-100, pH 7.6.4. Reagente PChE para Colinesterase plasmática: liofilizado,96 testes por placa. Armazene o reagente liofilizado a 15 -30oC, protegido da luz. Reconstituir com 3 gotas de águadestilada. Estável por 72 horas a 15 - 35oC depois dareconstituição. O ensaio final inclui: 2 mM BuTC, 0.3 mM27

DTNB, 50 mM de fosfato de potássio e 0.1% de Triton X-100, pH 7.6.O reagente de AChE é >95% específico devido a adição deum inibidor específico de PChE, As1397 (10-(?-dietilaminopropionil)-fenotiazina).O reagente de PChE é >95% específico devido aespecificidade do BuTC.28

Apêndice C - Especificações do Analisador FotométricoDimensões14,6 x 8,9 x 4,5 cmPeso284 gRequerimentos elétricos 9 VDC, 0.025 Amp. (Bateria ou cabo)Fonte de LuzDiodo Emissor de Luz (LED) azulDetector de luzFotodiodo únicoMonocromadorFiltro de interferênciaComprimento de onda 450 nmLargura da banda12.0 nmCaminho óptico13 mmLinearidade ótica Até 3.000AResolução ótica 0.001ªEstabilidade ótica

Apêndice D - Mensagens de Erro do AnalisadorFotométricoO analisador fotométrico Test-mate ChE contem ummicroprocessador sofisticado. Este computador executavárias checagens na parte eletrônica, ótica, condiçõesrelativas ao meio e reações de ensaio. Se um problema fordetectado, uma mensagem de erro será exibida. Para limpar amensagem de erro, o analisador deve ser desligado e depoisligado de novo.ADC ERROR: o conversor analógico-digital não estáfuncionando apropriadamente. Contate EQM Research, Inc.para assistência.BATTERY ERROR: A bateria de 9 Volts que alimenta oanalisador precisa ser trocada. Substitua a bateria velha poruma nova.COOL ERROR: O teste de temperatura foi muito frio para oanalisador compensar a temperatura da reação. Vá para umambiente mais quente.FULL ERROR: Não foi detectada luz suficiente durante o"blank". Assegurar-se que um tubo de ensaio novo esteja nolocal.RAM ERROR: O armazenamento de dados interno domicroprocessador foi danificado. Contate EQM Research,Inc. para assistência.REACTION ERROR: Nenhuma reação foi detectada duranteo ensaio. Tente o ensaio novamente o assegurar-se deadicionar reagente.ROM ERROR: O armazenamento interno de programas domicroprocessador foi danificado. Contate EQM Research,Inc. para assistência.30

SAMPLING ERROR: O valor da hemoglobina está fora dointervalo plausível. Tente o ensaio novamente verificando astécnicas de coleta de sangue.WARM ERROR: O teste de temperatura foi muito quente parao analisador compensar a temperatura da reação. Vá para umambiente mais fresco.ZERO ERROR: Foi detectada muita luz durante o "blank".Contate EQM Research, Inc. para assistência.31

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