400 700 800 HDL-Cholesterol plus 2nd generation Colesterol HDL ...

400 700 800HDL-Cholesterol plus 2nd generationColesterol HDL plus, 2 a geraçãoInformações para encomendaCOBAS INTEGRA 175 Testes Ref. 03038637 322 Indica em que analisador(es) pode ser utilizado o suportede reagentes cobas c packHDL-Cholesterol plus 2nd generation System-ID0766267Calibrator f.a.s. Lipids 3×1mLCOBAS COBAS COBASRef. 12172623 122INTEGRA INTEGRA INTEGRACalibrator f.a.s. Lipids (para os 3×1mL Ref. 12172623 160400/400 plus 700800EUA)System-ID0765708Precinorm L 4 × 3 mL Ref. 10781827 122System-ID0790265Precipath HDL/LDL-C 4×3mL Ref. 11778552 122System-ID0790281NaCl Diluent 9% 6×22mL Ref. 20756350 322System-ID0756350COBAS INTEGRA 150 Testes Ref. 20764337 322Cleaner CassetteSystem-ID0764337Informações do sistemaCOBAS INTEGRA HDL-Cholesterol plus 2nd generation(HDL_C).Teste HDL_C, teste ID 0-201.FunçãoTeste enzimático para determinação quantitativa in vitro daconcentração de colesterol HDL em soro e plasma humanos,utilizando os sistemas COBAS INTEGRA.Sumário 1As lipoproteínas de alta densidade (HDL - High DensityLipoproteins) são responsáveis pelo transporte inverso docolesterol das células periféricas para o fígado. Aqui, ocolesterol é transformado em ácidos biliares que são excretadospara os intestinos através das vias biliares. É clinicamenteimportante monitorizar o colesterol HDL no soro, poisexiste uma correlação inversa entre as concentrações séricasde colesterol HDL e o risco de doença aterosclerótica.ConcentraçõeselevadasdecolesterolHDLsãoprotectorascontra as doenças coronárias, enquanto concentrações reduzidasdeste colesterol, especialmente em conjunto com triglicéridoselevados, aumentam o risco cardiovascular.Estão disponíveis diversos métodos para determinar o colesterolHDL, incluindo ultracentrifugação, electroforese, HPLC, emétodosbaseadosemprecipitação.Destes,osmétodosutilizadospor rotina são os baseados na precipitação. O colesterolHDL começa por ser separado através da precipitação daslipoproteínas séricas que contêm a apoproteína B através dautilização de uma combinação de um polianião e de um catiãobivalente, como o sulfato de dextrano/cloreto de magnésio oufosfotungstato/cloreto de magnésio. Estes métodos baseados naprecipitação são muito demorados e não são adequados paraanálise automática. Existe, pois, uma grande necessidade dedesenvolver um método fiável e conveniente para determinaçãodo colesterol HDL no soro sem qualquer tratamento prévio. Têmsido propostas diversas abordagens de determinação directadocolesterolHDLnosoro,incluindoousodepartículasdereacção magnética como as combinações polianião-metal e usode polietilenoglicol (PEG) com anticorpos anti-apoproteína Be anti-apoproteína CIII. 2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12A cassete COBAS INTEGRA HDL-Cholesterol plus 2ndgeneration foi concebida para a determinação específica directa docolesterol HDL na presença de LDL, VLDL e quilomícrons. Nãoénecessárianenhumaetapadepré-tratamentodaamostra.Princípiodoteste 13Ensaio colorimétrico enzimático homogéneo.Na presença de sulfato de magnésio e sulfato de dextrano,formam-se complexos solúveis em água com LDL, VLDLe quilomícrons que são resistentes às enzimas modificadaspor PEG. A concentração do colesterol HDL é determinadaenzimaticamente, pela colesterol esterase e colesterol oxidaseacopladas com PEG aos grupos amino (cerca de 40%). Sob ainfluência da colesterol esterase, os ésteres de colesterol sãoquantitativamente decompostos em colesterol livre e ácidosgordos. Na presença de oxigénio, o colesterol é oxidado pelacolesterol oxidase em Δ4-colestenona e peróxido de hidrogénio.Este ensaio directo cumpre os objectivos do NCEP de1995 de erro analítico total de 13%. 14Ésteres decolesterol HDL + H 2 OPEG-colesterol esterasecolesterol HDL+ RCOOHPEG-colesterol oxidasecolesterol HDL + O 2Δ4-colestenona + H 2 O 22H 2 O 2 + 4-aminoantipirina + HSDA + H +peroxidasepigmento violeta +4H 2 OA intensidade da cor do corante formado azul quinoneimina édirectamente proporcional à concentração de colesterol HDL. Édeterminada medindo o aumento da absorvância a 583 nm.2006-10, V 5 PT 1 /4HDL_C

400 700 800SubstratosReagentes - soluções de trabalhoComponentesConcentraçõesR1 R2 = SR TesteMOPS a 19,1 14,1 mmol/LSulfato de dextrano 0,001 0,0007 mmol/LSulfato de magnésio · 7 H 2 O ≥8,1 ≥6,0 mmol/LHSDA b 0,958 0,709 mmol/LAOD (recombinante) ≥50 ≥37 µkat/L(≥2,2 kU/L)POD (rábano) ≥167 ≥334 ≥206 µkat/L(≥12 kU/L)PIPES c 9,9 2,44 mmol/LCE (microbiano) ≥3,3 ≥0,8 µkat/L(≥0,05 kU/L)CHOD (microbiano) ≥127 ≥31 µkat/L(≥1,9 kU/L)4-aminoantipirina 2,46 0,60 mmol/LpH 7,0 7,0 7,1a) ácido 3-morfolino-propanossulfónicob) N-(2-hidroxi-3-sulfopropil)-3,5-dimetoxianilina de sódioc) piperazina-1,4-bis(ácido 2-etanosulfónico)Ambos os reagentes contêm estabilizantes e um conservante.Avisos e precauçõesPreste atenção a todos os avisos e precauções incluídos naIntrodução do Capítulo 1 deste folheto informativo.Preparação dos reagentesPronto a ser utilizado.A cor rosa do reagente de colesterol não interfere com o teste.Armazenamento e estabilidadeValidade a 2-8°C:Analisadores COBAS INTEGRA 400/400 plusNo analisador a 10-15°C 12 semanasAnalisadores COBAS INTEGRA 700/800No analisador a 8°C12 semanasConsulte o prazo de validadeno rótulo do suporte dereagentes cobas c packColheita e preparação das amostrasPara colheita e preparação das amostras, utilize apenastubos ou cuvetes de amostra apropriados.Apenas as amostras indicadas em seguida foram testadase consideradas aceitáveis.Soro.Plasma: Tratado com heparina (-Li, -Na, -NH + 4 )ouEDTA-K 3(consulte as Limitações do procedimento).Conserve o plasma a 4°C antes da análise. O plasma tratadocom EDTA tem a vantagem de as lipoproteínas terem maiorestabilidade durante a conservação a 4°C.Podemserutilizadasamostrascolhidasemjejumounão.Colhaosangue utilizando um tubo em vácuo ou uma seringa. As amostrasdevem ser analisadas, de preferência, no dia da colheita.Ostiposdeamostrasindicadosforamtestadosusandotubosde colheita de amostras seleccionados e comercialmentedisponíveis à data do teste, i.e. nem todos os tubos dos diferentesfabricantes disponíveis no mercado foram testados. Os sistemasde colheita de amostras de diferentes fabricantes podem, porsua vez, conter materiais diferentes que, em alguns casos,podem afectar os resultados dos testes. Se utilizar amostrasem tubos primários (sistemas de colheita de amostras),consulte as instruções do fabricante dos tubos.Estabilidade: 15 7 dias a 2-8°C30 dias a -70°CApós 7 a 14 dias a -20°C, o colesterol HDL diminuisignificativamente, mas esta diminuição não temrelevância clínica. 16As amostras que contêm precipitado têm de ser centrifugadasantes da realização do ensaio.Materiais fornecidosConsulte a secção “Reagentes -soluçõesdetrabalho”no relativo aos reagentes.Materiais necessários (mas não fornecidos)1. NaCla9%(soluçãosalinaisotónicaconcentrada10vezes)para pós-diluição automática das amostras. Utilize NaClDiluent 9%, Ref. 20756350, System-ID 07 5635 0, ou prepareasoluçãodeNaCla9%comsoluçõessalinasconcentradasoucomprimidosdecloretodesódioàvendanomercado.AsoluçãodeNaClao9%écolocadanaposiçãopredefinidano rack e permanece estável durante 28 dias estando nosanalisadores COBAS INTEGRA 400/400 plus/700/800.2. Apenas para os analisadores COBAS INTEGRA 700/800COBAS INTEGRA Cleaner Cassette, Ref. 20764337,System-ID0764337.Recomendam-se ciclos de lavagemsuplementares sempre que determinadas combinaçõesde testes sejam executadas em conjunto nos sistemasCOBAS INTEGRA. Para mais informações sobrecombinações de testes que requerem ciclos de lavagemsuplementares, consulte o Capítulo 1, Introdução, Parte III.Realização do ensaioPara assegurar a correcta execuçãodoensaioéimportantecumpriras instruções fornecidas neste documento para o analisadorutilizado. Consulte o manual do operador apropriado para obterinstruções mais específicas sobre o ensaio feito neste analisador.Aplicação para soro e plasmaAnalisadores COBAS INTEGRA 400/400 plus - Definição dotesteModo de medidaAbsorvânciaModo de cálculo da abs. Ponto finalModo de reacçãoR1-S-SRSentido da reacção AumentoComprimento de onda A/B 583/659 nmPrimeiro/último cálc. 33/69Unidademmol/LParâmetros de pipetagemDiluente (H 2 O)R1 150 µLAmostra 2,5 µLSR 50 µLVolume total 202,5 µLAnalisadores COBAS INTEGRA 700/800 - Definição do testeModo de medidaAbsorvânciaModo de cálculo da abs. Ponto finalModo de reacçãoR1-S-SRSentido da reacção AumentoComprimento de onda A/B 583/659 nmPrimeiro/último cálc. 44/98Unidademmol/LParâmetros de pipetagemDiluente (H 2 O)R1 150 µLAmostra 2,5 µLSR 50 µLVolume total 202,5 µLHDL_C2 / 4 2006-10, V 5 PT

Substratos400 700 800CalibraçãoCalibradorC.f.a.s. LipidsUtilize água desionizada comocalibrador zero.Modo de calibração Regressão linearRepetição da calibração Duplicado recomendadoIntervalo de calibração Cada lote e conforme necessário,segundo os procedimentos decontrolo de qualidadeRastreabilidade: Este método foi padronizado de acordocom o CDC d (precipitação por sulfato de dextrano ede acordo com Abell-Kendall). 15d) Center for Disease ControlControlo da qualidadeControlo da qualidadeIntervalo de controloSequência de controloControlo após calibraçãoPrecinorm L, Precipath HDL/LDL-C24 horas (recomendado)Definida pelo utilizadorRecomendadoOs materiais de controlo de qualidade destinam-se a ser usadosapenas como indicadores de exactidão e precisão. O LaboratoryStandardization Panel (LSP) do National Cholesterol EducationProgram nos EUA recomenda dois níveis de controlos: um nointervalo normal (0,9-1,7 mmol/L ou 35-65 mg/dL) e um próximoda concentração de decisão (

400 700 800SubstratosDados específicos sobre o desempenho 15São apresentados a seguir dados representativos do desempenhodos analisadores COBAS INTEGRA. Os resultados podemdiferir de laboratório para laboratório.Este procedimento foi certificado pela Cholesterol ReferenceMethod Laboratory Network.PrecisãoA reprodutibilidade foi determinada utilizando amostrashumanas e controlos num protocolo interno (intra-ensaio n = 21,inter-ensaio n = 21). Obtiveram-se os seguintes resultados:Nível 1 Nível 2Média 0,56 mmol/L 1,19 mmol/L(21,7 mg/dL) (46,0 mg/dL)CV intra-ensaio 0,75% 0,85%Média 0,89 mmol/L 1,42 mmol/L(34,4 mg/dL) (54,9 mg/dL)CV inter-ensaio 2,1% 1,7%Comparação dos métodosOs valores de colesterol HDL das amostras de soro e plasmahumanos obtidos no analisador COBAS INTEGRA 700 com oreagente COBAS INTEGRA HDL-Cholesterol plus 2nd generationforamcomparadoscomosvaloresdeterminadoscomomesmoreagente utilizado no analisador Roche/Hitachi 917.Os valores variaram entre 0,41 e 2,34 mmol/L (15,6-90 mg/dL).Analisador Roche/Hitachi 917Tamanho da amostra55(n)Coeficiente corr. (r) 0,997Regressão lineary = 0,97x - 0,04 mmol/LPassing/Bablok 24y = 0,97x - 0,03 mmol/LBibliografia1. Dominiczak MH, McNamara JR. The system of cardiovascularprevention; Nauck M, Wiebe DA, Warnick GR. Measurementof High-Density Lipoprotein Cholesterol. In: Rifai N,Warnick GR, Dominiczak MH, ed. Handbook of Lipoproteintesting. 2nd ed. Washington, DC: AACC Press 2000,chapter 6:103-125; chapter 11:221-244.2. ZawtaB,KlüberJ.Brochure“WissenswerteszuApolipoproteinen”. Fragen/Antworten (Roche 1991)3. AVP Fettstoffwechselstörungen, Therapieempfehlungen1, 1st ed. 1996:2-16.4. Hatch FT, Lees RS. Practical methods for plasma lipoproteinanalysis. Adv Lipid Res 1968;6:1-68.5. Narayan KA, Kummerow FA. Disk electrophoresis of humanserum lipoprotein. Nature 1965;205:246-248.6. Okazaki M, Shiraishi K, Ohno Y et al. Heterogeneity ofhuman high density lipoproteins on high performance liquidchromatography. J Biochem 1982;92:517-524.7. Burstein M, Scholnick HR, Morfix R. Rapid method for theisolation of lipoproteins from human serum by precipitationwith polyanions. J Lipid Res 1970;11:583-595.8. Musto J, Lawlor JF. HDL-cholesterol: online separationand analysis utilizing an automated chemistry analyzer[Abstract]. Clin Chem 1993;39:1125.9. Kakuyama T, Kimura S, Hashiguchi Y. Fully automateddetermination of HDL-cholesterol from human serum withHitachi 911 [Abstract]. Clin Chem 1994;40:1104.10. Harris N, Galpchian V, Rifai N. Three routine methods formeasuring high-density lipoprotein cholesterol comparedwith the Reference method. Clin Chem 1996;42:738-743.11. Cohn JS, McNamara JR, Schaefer EJ. Lipoprotein CholesterolConcentrations in the Plasma of Human Subjects as Measuredin the Fed and Fasted States. Clin Chem 1988;34:2456-2459.12. Assmann G, Schriewer H, Schmitz G et al. Quantification ofhigh-density lipoprotein cholesterol by precipitation withphosphotungstic acid/MgCl 2 . Clin Chem 1983;29:2026-2030.13. SugiuchiH,UjiY,OkabeH,IrieTetal.DirectMeasurementof High-Density Lipoprotein Cholesterol in Serum withPolyethylene Glycol-Modified Enzymes and Sulfatedα-Cyclodextrin. Clin Chem 1995;41:717-723.14. Kimberly M, Leary E, Cole T, Waymack P. Selection,Validation, Standardization, and Performance of aDesignated Comparison Method for HDL-Cholesterolfor Use in the Cholesterol Reference Method LaboratoryNetwork. Clin Chem 1999;45:1803-12.15. Documentação da Roche Diagnostics.16. Stein EA. Lipids, lipoproteins, and apolipoproteins. In:Tietz NW, ed. Fundamentals of Clinical Chemistry. 3rd ed.Philadelphia: WB Saunders; 1987:448-481.17. National Cholesterol Education Program Recommendationsfor Measurement of High-Density Lipoprotein Cholesterol:Executive Summary. Clin Chem. 1995;41:1427-1433.18. Glick MR, Ryder KW, Jackson SA. Graphical Comparisonsof Interferences in Clinical Chemistry Instrumentation.Clin Chem 1986;32:470-474.19. Kadri N, Douville P, Lachance P. Monoclonal ParaproteinMay Interfere with the Roche Direct HDL-C Plus Assay.Letters to the editor. Clin Chem 2002;48:964.20. Thomas L, ed. Labor und Diagnose, 4th ed. Marburg: DieMedizinische Verlagsgesellschaft 1992:208.21. Assmann G. At what levels of total low- or high-densitylipoprotein cholesterol should diet/drug therapy be initiated?European guidelines. Amer J Cardiol 1990;65:11F.22. Assmann G, Schriewer H, Schmitz G et al. Quantification ofhigh-density lipoprotein cholesterol by precipitation withphosphotungstic acid/MgCl 2 . Clin Chem 1983;29:2026-2030.23. Third Report of the National Cholesterol Education Program(NCEP)ExpertPanelonDetection,EvaluationandTreatmentof High Blood Cholesterol in Adults (Adult Treatment PanelIII). NIH Publication No 01-3670; May 2001.24. Bablok W et al. A General Regression Procedure for MethodTransformation. J Clin Chem Clin Biochem 1988;26:783-790.As alterações ou os acréscimos significativos estão assinalados poruma barra de alteração na margem.©2006 Roche Diagnostics.Roche Diagnostics GmbH, D-68298 MannheimHDL_C4 / 4 2006-10, V 5 PT