Reagente DGNA-Flex - Medcorp

REF DF35ADimension ® clinical chemistry systemFlex ® reagent cartridgeDGNACartucho de reagente Flex® para DigoxinaFim a que se destina: O cartucho de reagente Flex® DGNA, utilizadono sistema de química clínica Dimension®, é um teste paradiagnóstico in vitro destinado à medição da digoxina, um fármacocardiovascular, no soro e no plasma. Os resultados do teste da DGNAsão utilizados no diagnóstico e tratamento da sobredosagem dedigoxina e na monitorização dos níveis de digoxina, para garantiruma terapêutica apropriada.Resumo: O método da digoxina utiliza uma técnica de imunoensaiona qual as espécies de anticorpo-enzima livre ou ligado à digoxinasão separadas utilizando partículas magnéticas. A química da DGNA éoptimizada para a leitura da actividade da ß -galactosidase. O acetatode magnésio é incluído para activar a enzima e o tampão ácido N-2-Hidroxietilpiperazina-N’-1-etanesulfónico (HEPES), para fornecer umpH óptimo.Princípios do procedimento: A metodologia para a DGNA envolve amistura do reagente Anticorpo Conjugado com o soro ou plasma dodoente. O reagente Anticorpo Conjugado utiliza o fragmento F(ab’) 2do anticorpo para eliminar a interferência do factor reumatóide. Adigoxina presente na amostra liga-se à F(ab’) 2 -ß-galactosidase noreagente Anticorpo Conjugado. São adicionadas partículasmagnéticas revestidas com oubaína, um análogo da digoxina, para seligarem ao conjugado anticorpo-enzima livre (não ligado). A misturada reacção é, em seguida, separada magneticamente. Após aseparação, o sobrenadante contendo o complexo digoxina-anticorpoenzimaé transferido e misturado com um substrato. A parte da ß-galactosidase (ß-gal) ligada ao complexo Digoxina-F(ab’)2-ßgalactosidasecatalisa a hidrólise do clorofenol-ß-D-galactopiranósido(CPRG) em vermelho de clorofeno (CPR). A alteração na absorvânciaa 577 nm devido à formação de CPR é directamente proporcional àactividade da ß-galactosidase. Como a ß-galactosidase não estápresente no soro, a sua actividade é directamente proporcional àdigoxina presente na amostra do doente e é medida utilizando umatécnica de taxa bicromática (577, 700 nm).Digoxina + F(ab’) 2 -ß-galactosidase -----> F(ab’) 2 -ß-gal + Digoxina-F(ab’) 2 -ß-galpartícula magnéticaDigoxina-F(ab’) 2 - ß-gal + F(ab’) 2 -ß-gal -----> Digoxina-F(ab’) 2 -ß-galseparaçãoCPRG Digoxina-F(ab’) 2 -ß-gal CPR(não absorvente a 577 nm) --------------------------> (absorvente a 577 nm)ReagentesPoço a Forma Ingrediente Concentração b Fonte1,2 Líquido Anticorpo Conjugado coelhoReagente e estabilizadores c3,4 Comprimidos OuabaínaPartículas magnéticas 0.3%5,6 Comprimidos CPRG 7mM7 Líquido Diluente do substrato,Tampão100mMa. Os poços são numerados consecutivamente a partir da extremidade largado cartucho.b. Valor nominal por teste no fabrico.c. A titulação do anticorpo e a actividade do conjugado podem variar de lotepara lote.Precauções: As cuvetes usadas contêm líquidos biológicoshumanos; manipular com o devido cuidado para evitar o contactocom a pele e a ingestão. 1Para utilização em diagnóstico in vitroPreparação do reagente: A agitação e a diluição são efectuadasautomaticamente pelo instrumento.Instruções para armazenamento: Armazenar a 2 – 8° C.Validade: Consultar a embalagem e o rótulo do frasco para obter adata de validade de cada um dos cartuchos de reagentes não abertos.Os poços dos cartuchos selados ou não hidratados no instrumentopermanecem estáveis durante 30 dias. Depois de os poços 1 a 6terem sido perfurados pelo instrumento, permanecerão estáveisdurante 72 horas. Depois de o poço 7 ter sido perfurado peloinstrumento, permanecerá estável durante 10 dias.Colheita de amostras: Para as amostras analisadas por este métodopodem ser utilizados os procedimentos normais para a colheita earmazenamento de soro e de plasma. 1Substãncias interferentes conhecidas• As substâncias sequintes demonstraram uma reacção cruzadacom o método DGNA:Substância Nível Testado %de reactividade cruzada eDigoxigenina 5 ng/ml [12.80 nmol/l] d 142.6Gitoxina 25 ng/ml [32.02 nmol/l] 7.6Digitoxina 25 ng/ml [32.75 nmol/l] 11.2Acetildigitoxina 25 ng/ml [30.75 nmol/l] 10.7Di-hidrodigoxina 25 ng/ml [30.50 nmol/l] 9.4• Foram detectados factores endógenos imunoreactivossemelhantes à digoxina (DLIF) no soro e no plasma de recémnascidos,em mulheres grávidas e em doentes com insuficiênciarenal e hepática. Vários estudos estabeleceram que estes factorespodem originar leituras de digoxina falsamente elevadas, quandosão avaliados por imunoensaios disponíveis no mercado.2• A digoxina ligada a fragmentos Fac dos anticorpos anti-digoxina,tal como é encontrada no soro e no plasma de doentes que estãoa ser tratados para a toxicidade pela digoxina, pode originarvalores de digoxina errados. 3• As substâncias seguintes não exercem qualquer efeito mensurávelsobre o método DGNA, nas concentrações indicadas:Acetaminofeno 20 mg/dl [1323 µmol/l]Ácido acetilsalicílico 50 mg/dl [1.67 µmol/l]Aldosterona 1 µg/ml [8.32 µmol/l]Amicacina 15 mg/dl [256 µmol/l]Amobarbital 10 mg/dl [442 µmol/l]Ampicilina 4 mg/dl [114 µmol/l]Ácido ascórbico 3 mg/dl [170 µmol/l]Beta-caroteno 0.6 mg/dl [11.2 µmol/l]Bilirrubina 20 mg/dl [342 µmol/l]Cafeína 10 mg/dl [515 µmol/l]Carbamazepina 12 mg/dl [508 µmol/l]Cloranfenicol 25 mg/dl [774 µmol/l]Clordiazepóxido 2 mg/dl [67 µmol/l]Clorpromazina 5 mg/dl [157 µmol/l]Cimetidina 10 mg/dl [396 µmol/l]Codeína 10 mg/dl [334 nmol/l]Cortisol 3 µg/ml [8.28 µmol/l]Cortisona 3 µg/ml [8.28 µmol/l]Creatinina 30 mg/dl [2652 µmol/l]Dextrano 752500 mg/ml [33 µmol/l]Diazepam 2 mg/dl [70 µmol/l]Eritromicina 20 mg/dl [273 µmol/l]17-Estradiol 3 µg/ml [11 µmol/l]17-ß-Estradiol 3 µg/ml [11 µmol/l]Estriol 3 µg/ml [10.4 µmol/l]Estrona 3 µg/ml [11.1 µmol/l]Etanol 350 mg/dl [76 mmol/l]Etosuximida 30 mg/dl [2125 µmol/l]Furosemida 2 mg/dl [60 µmol/l]Gentamicina 12 mg/dl [221 µmol/l]Hemoglobina 500 mg/dl [0.31 mmol/l] monómerIbuprofeno 40 mg/dl [1939 µmol/l]Lidocaína 6 mg/dl [256 µmol/l]Lipémia 1000 mg/dl [11.4 mmol/l] triglicerideLitio 3.5 mg/dl [5.07 mmol/l]Nicotína 2 mg/dl [123 µmol/l]Nortriptilina 1000 ng/ml [3797 nmol/l]Penicilina80 mg/ml [2247 µmol/l]Pentobarbital 10 mg/dl [442 µmol/l]Fenobarbital 15 mg/dl [646 µmol/l]Fenitoína 10 mg/dl [396 µmol/l]Prednisona 3 µg/ml [10.8 µmol/l]Primidona 10 mg/dl [458 µmol/l]Progesterona 3 µg/ml [9.45 µmol/l]Propoxifena 0.4 mg/dl [12 µmol/l]Proteína 4 g/dl [40 g/l]Proteína 12 g/dl [120 g/l]Factor reumatóide 707 U/l [707 IU/l]Ácido salicílico 50 mg/dl [3.62 mmol/l]Secobarbital 5 mg/dl [210 µmol/l]Fluoreto de Sódio 1 mg/dl [0.01 g/l]Testosterona 2 µg/ml [6.93 µmol/l]Teofolina 25 mg/dl [1388 µmol/l]Ureia 500 mg/dl [83.3 mmol/l]Ácido úrico 20 mg/dl [1.2 mmol/l]Ácido valpróico 50 mg/dl [3472 µmol/l]• Cada laboratório deverá determinar a aceitabilidade dos tubos decolheita de sangue e dos produtos de separação do soro queutiliza. Podem existir variações nestes produtos entre fabricantese, por vezes, entre lotes do mesmo fabricante.d. Unidades S.I. entre parêntesis.e. % Reactividade cruzada = concentração de digoxina aparente dividida pelaconcentração do factor responsável pela reactividade cruzada multiplicadapor 100.Procedimento: Os materiais necessários para realizar o teste daDGNA no sistema de química clínica Dimension® com o módulo deseparação ou com o módulo do imunoensaios heterogéneos incluem:

Materials necessáriosCartucho de reagente Flex® para DGNACuvetes de Reacção(necessárias apenas para HM)Dade Behring Inc.Newark, DE 19714, U.S.A.EU REPNo de CatálogoDF35ARXV1Passos do testeA colheita da amostra, f dispensação do reagente, agitação, separação,processamento e impressão dos resultados são realizadosautomaticamente pelo sistema Dimension®. Para obter pormenoressobre este processamento, consultar o manual do sistemaDimension®.f. O recipiente da amostra (se não for um tubo primário) deverá possuir umvolume suficiente para acomodar o volume da amostra e um volume morto:Não é necessário um enchimento preciso do recipiente.Condições de testeCondições de teste para o módulo de separação ou para o módulo deimunoensaios heterogéneos:Cuvete 1/Cuvete de reacção• Volume da amostra: 30 µl• Volume do Reagente Anticorpo Conjugado: 100 µl• Volume da Partícula de Oubaína: 75 µl• Volume do diluente: 115 µl• Temperatura do teste: 37°CCuvete 2/Cuvete• Volume Transferido: 60 µl• Volume de substrato: 175 µl• Volume do diluente: 165 µl• Temperatura do teste: 37°C• Comprimento de onda: 577 and 700 nm• Tipo de leitura: taxa bicromáticaCalibraçãoQuando se calibrar o método da DGNA, deverão ser tomadas emconsideração as seguintes informações:Intervalo do ensaio:0.06–5.00 ng/ml [0.08–6.41 nmol/l]Material de referência:Calibradores de digoxina secundários à basede soro, tais como o Calibrador Fármaco(No. de Catálogo DC22A).Níveis de calibração sugeridos: 0.00, 0.60, 1.20, 2.50, 5.00 ng/ml[0.00, 0.77, 1.54, 3.20, 6.41 nmol/l]Esquema de calibração:Cinco níveis em duplicadoFrequência da calibração: Cada lote novo de cartucho de reagenteEm cada mês para qualquer lote individualCoeficientes atribuidos: C 0 1.0C 1 108.0C 2 –2.0C 3 1.77C 4 0.5Controlo da qualidadePelo menos uma vez em cada dia de utilização, analisar dois níveis deum material de controlo da qualidade com concentrações de digoxinaconhecidas. Se os resultados caírem fora dos limites aceitáveis dolaboratório, seguir o procedimento apresentado no manual do sistemaDimension®.Pode existir uma avaria do sistema se for observada a seguinteprecisão de 5 testes:Concentração Desvio Padrão0.60 ng/ml [0.77 nmol/l] > 0.06 ng/ml [0.08 nmol/l]2.40 ng/ml [3.07 nmol/l] > 0.09 ng/ml [0.12 nmol/l]Resultados: O instrumento calcula e imprime automaticamente aconcentração de digoxina em ng/ml [nmol/l] utilizando o esquema decálculo ilustrado no manual do sistema Dimension®.Limitações do procedimento: Os resultados que ultrapassem os5.00 ng/ml [6.41 nmol/l] devem ser repetidos após a diluição daamostra com um soro sem digoxina para se obter uma concentraçãoda amostra dentro do intervalo do ensaio. A leitura resultante será,então, multiplicada pelo factor de diluição para fornecer aconcentração da amostra não diluída.O sistema de emissão de relatórios do instrumento contémmensagens de erro para prevenir o operador de avarias específicas.Qualquer relatório que contenha tais mensagens de erro deve serretido para seguimento. Consultar o manual do sistema Dimension®.Intervalo terapêutico: Os resultados de DGNA inferiores a 0.06 ng/ml[0.08 nmol/l] devem ser referidos como “inferior a 0.06 ng/ml[0.08 nmol/l]”, em vez do valor numérico. As concentraçõesterapêuticas de digoxina variam significativamente, dependendo doindivíduo. Um intervalo de 0.90 a 2.00 ng/ml [1.15–2.56 nmol/l] incluias concentrações séricas eficazes para muitos doentes; no entanto,alguns indivíduos apresentam uma melhor resposta ao tratamentocom concentrações fora deste intervalo. As concentrações superioresa 2.00 ng/ml [2.56 nmol/l] são frequentemente associadas a sintomasde toxicidade. 4,5Dade Behring LimitedWalton Manor, WaltonMilton Keynes MK7 7AJUnited KingdomCaracterísticas específicas de desempenho gReprodutibilidade hMédia Desvio Padrão (% CV)Material ng/ml [nmol/l] Intra-ensaio TotalDade® TDM PLUS XLNível I 0.56 [0.72] 0.02 [0.03] (4.1) 0.03 [0.04] (5.2)Nível 2 1.58 [2.02] 0.02 [0.03] (1.1) 0.03 [0.04] (2.0)Nível 3 3.08 [3.94] 0.03 [0.04] (1.0) 0.05 [0.06] (1.8)Dade® é uma marca registada da Dade Behring International Inc., Deerfield, IL60015CorrelaçãoEstatística de RegressãoiComparativo CorrelaçãoMétodo Declive Intersecção Coeficiente nMétodo DGNem aca ® 1.03 0.16 0.976 197 jAbbott TDx ® 1.10 0.02 0.985 206 kStratus ® 1.03 0.12 0.978 148 lTDx ® é uma marca registada da Abbott Diagnostics, Abbott Park, IL 60064.g. Todos os testes de características de desempenho foram efectuados após arealização das verificações normalmente recomendadas do controlo daqualidade do equipamento (consultar o manual do sistema Dimension®).h. As amostras em cada nível foram analisadas em duplicado, duas vezes pordia, durante 20 dias. Os desvios intra-ensaio e os desvios padrão totaisforam calculados através do método da análise da variância.i. A equação modelo para a estatística de regressão é a seguinte: resultados dosistema Dimension® = [declive x (resultados do método comparativo)] +intersecção.j. Intervalo das amostras (ng/ml): 0.21 - 3.61k. Intervalo das amostras (ng/ml): 0.26 - 4.47l. Intervalo das amostras (ng/ml): 0.31 - 3.93Especificidade analíticaConsultar a secção Sobre Substâncias Interferentes para obterpormenores.Sensibilidade analíticaA sensibilidade do método DGNA é de 0.06 ng/ml, valor querepresenta a menor concentração que pode ser distinguida do zero.Esta sensibilidade é definida como a concentração dois desvios padrãoacima do nível 0.00 ng/ml.Bibliography1. Tietz, NW, Textbook of Clinical Chemistry, W. B. Saunders Co., Philadelphia,PA 1994, pp 54–55 (techniques and procedures to minimize laboratoryinfections) and pp 58–59 (specimen collection and storagerecommendations).2. Stone, JA, and Soldin, SJ, Update On Digoxin, Clin Chem, 1989, Vol 35, pp1326-1331.3. Reiney, Effects of Digoxin Immune Fab, American Journal of Clin Path, 1990,Vol 92, pp 779-786.4. Evans, WE, Schentag, JJ, Jusko, WJ, Applied Pharmacokinetics, AppliedTherapeutics Inc., San Francisco, CA, 1980, p 330.5. Huffman, DH, Crow, JW, Pentikainen, P, Azarnoff, DL, Association betweenclinical cardiac status, laboratory parameters and digoxin use, Amer HeartJournal 1976; 91:28–34.Dimension®, Flex®, aca® e Stratus® são marcas registadas da DadeBehring Inc., no Gabinete de Patentes e Marcas Registadas dos E.U., naAlemanha e em muitos outros países.* As secções revistas são anotadas com um asterisco.EU REPEXPYYYY-MM-DD2°CIVDLOT8°CREFChave dos SímbolosFabricado porRepresentante AutorizadoDispositivo Médico para Diagnóstico In VitroCódigo do LoteA data em “Utilizar antes de” encontra-se noformato ano-mês-dia (AAAA-MM-DD)Limitação da TemperaturaMarca CENúmero de CatálogoConsulte as Instruções de Utilização2000-09-12 PTImportado e distribuído porDADE BEHRING LTDA.Rua Geraldo Flausino Gomes, 61 - 1º AndarBrooklin - São Paulo - SP - CEP 04575-060Fone (11) 3371-3200 - Fax (11) 3371-3201CNPJ: 00.897.408/0001-08Resp. Téc.: Nanci A. TrindadeCRF - SP: 7.2972001-08 G PN717036.001-PT0800-170417SAC - Serviço de Atendimento ao Clientesac/brazil@dadebehring.com