Reagente Tiroxina Livre - FT4-Flex - Medcorp

REF RF410Dimension ® clinical chemistry systemHeterogeneous Immunoassay ModuleFlex ® reagent cartridgeFT4Cartucho de reagente Tiroxina Livre Flex ®Fim a que se destina: O método FT4 para o sistema de químicaclínica Dimension®, com o módulo de imunoensaio heterogéneo, éum teste para diagnóstico in vitro destinado à medição quantitativada tiroxina livre (FT4) no soro e no plasma heparinizado.Resumo: O método FT4 é um imunoensaio colorimétrico que medea tiroxina livre. A tiroxina é sintetizada na glândula tiróide e logo queentra em circulação, quase toda a tiroxina (99.97%) se encontraligada a proteínas. Apenas 0.03% da “tiroxina livre” ou não ligadaconsegue ligar-se aos receptores celulares originando uma respostafisiológica.1,2As concentrações de FT4 reflectem com maior precisão asdisfunções da tiróide em doentes com hipo ou hipertiroidismo doque os níveis séricos da tiroxina total.Princípios do procedimento: O método da FT4 para o sistemaDimension® com o módulo de imunoensaio heterogéneo consistenum imunoensaio enzimático de duas etapas, baseado num formatocompetitivo sequencial.A amostra é incubada com partículas de dióxido de crómiorevestidas com anticorpos monoclonais anti-T4. A T4 livre naamostra liga-se ao anticorpo nas partículas de dióxido de crómio.Após a separação magnética e a lavagem para remover as proteínasligadas à T4 da amostra, é adicionado o reagente conjugado (T3-ALP) para reagir com os locais de ligação dos anticorpos livres naspartículas. O conjugado não ligado é removido por lavagem. Afosfatase alcalina (ALP) ligada desencadeia uma cascata deamplificação.* A ALP desfosforila o fosfato dinucleótido de adeninaflavina sintético (FADP) produzindo o FAD. O FAD liga-se à apo d-amino-ácido oxidase e converte-a em holo d-amino-ácido oxidase. Aholo d-amino ácido oxidase cataliza a produção de peróxido dehidrogénio (H 2 0 2 ), a partir da d-prolina e de oxigénio, o qual, napresença da peroxidase de rábano (HRP), converte o ácido 3,5-dicloro-2-hidroxibenzenosulfónico (DCHBS) e a 4-aminoantipirina(4-AAP) num produto colorido que absorve a 510 nm. 3A alteração de cor medida é inversamente proporcional àconcentração de FT4 presente na amostra do doente.* Tecnologia licenciada pela London Biotechnology, Ltd., Londres, Inglaterra.T4 livre + T4 ligada às proteínas T4-Ac-CrO 2 -Ac+ +Ac-CrO 2 -Ac T4 ligada às proteínasSeparação magnética para remover as proteínas séricas e a T4 ligadaT3-ALPT3-ALP+ +T4-Ac-CrO 2 -AcT4-Ac-CrO 2 -Ac-T3-ALPT3-ALPLavagem+ T4-Ac-CrO 2 -Ac-T3-ALPT4-Ac-CrO 2 -Ac-T3-ALP(transferido para a cuvette)T4-Ac-CrO2-Ac-T3- ALPFADP FAD + Piapo d-amino-ácido oxidaseFADholo d-amino-ácido oxidaseD-prolina + O2 H 2 O 2H 2 O 2 + DCHBS + 4-AAPHRPholo d-amino-ácido oxidaseCor(absorve a 510 nm)ReagentesPoços a Forma Ingrediente Concentração b Fonte1,2 Comprimidos c FADP 0.055 mg/mlD-prolina 69 mg/ml3,4 Comprimidos c Apo d-aminoácido oxidase 0.20 mg/ml Rim PorcinoPeroxidase deRábano 0.17 mg/ml RábanoDCHBS 3.5 mg/ml4-AAP1.1 mg/ml5 Líquido Tampão6 Comprimidos c Anticorpomonoclonal - CrO 2 0.6 mg/ml d Murino7 Líquido Tampão8 Líquido T3-ALP 16 ng/ml d Bovinoa. Os poços estão numerados consecutivamente a partir da extremidade largado cartucho.b. Valor nominal no cartucho hidratado.c. Os comprimidos contêm excipientes.d. A titulação do anticorpo e a actividade do conjugado podem variar de lotepara lote.Precauções: As cuvettes usadas contêm fluidos corporaishumanos; manipule-as com o cuidado adequado para evitar ocontacto com a pele ou a ingestão.Para utilizar no diagnóstico in vitroPreparação do reagente: A mistura e a diluição são efectuadasautomaticamente pelo instrumento.Instruções para o armazenamento: Armazenar entre 2 e 8 °C.Prazo de validade: Consulte a embalagem relativamente ao prazo devalidade de cada cartucho de reagente por abrir. Os poços decartuchos selados ou não hidratados permanecem estáveis durante30 dias. Depois de os poços 1 a 4 terem sido perfurados peloinstrumento, permanecerão estáveis durante 3 dias. Depois de ospoços 5 a 8 terem sido perfurados pelo instrumento, permanecerãoestáveis durante 6 dias.Colheita das amostras: A colheita de soro ou de plasma pode serefectuada segundo os procedimentos normais. Se não foremtestadas num período de 24 horas, as amostras processadas podemser refrigeradas entre 2 e 8 °C durante 14 dias. 1 Para armazenardurante um período de tempo superior, as amostras de soro podemser congeladas a -20 °C durante três meses. 4 Evitar descongelar evoltar a congelar.As amostras devem estar livres de partículas. Para evitar oaparecimento de fibrina nas amostras de soro, o coágulo deveráestar completamente formado antes da centrifugação. Se o tempo decoagulação estiver aumentado devido a tratamento trombolítico ouanticoagulante, a utilização de amostras de plasma permitirá umprocessamento mais rápido da amostra e diminuirá o risco deaparecimento de partículas.Cada laboratório deverá determinar a aceitabilidade dos tubos decolheita de sangue e dos produtos de separação do soro que utiliza.Estes produtos poderão apresentar variações de fabricante parafabricante e, por vezes, de lote para lote.Substâncias interferentes conhecidas• As substâncias seguintes podem originar resultados de FT4elevados, através da libertação de T4 da ligação ás proteínasséricas.Carbamazepina 12 mg/dl [508 µmol/l]Furosemida 2 mg/dl [61 µmol/l]Ibuprofeno 10 mg/dl [484 µmol/l]Fenitoina 10 mg/dl [396 µmol/l]Ácido salicílico 50 µg/ml [3.62 mmol/l]Ácido valpróico 50 mg/dl [3467 µmol/l]• Os anticoagulantes com heparina não interferem com o métododa FT4.• O sangue colhido na presença de oxalato podem causar aagregação das partículas de crómio, não devendo por isso serutilizado.• As amostras de plasma congelado com uma quantidade deanticoagulante insuficiente podem causar a agregação daspartículas de crómio, não devendo por isso ser utilizadas.

• A ocorrência de interferência proveniente de icterícia (20 mg/dl[342 µmol/l] de bilirrubina), e hemólise (1000 mg/dl[0.6206 mmol/l] de hemoglobina (monómero)) e de lipémia(500 mg/dl [5.6 mmol/l] de triglicéridos) foi inferior a 10%.• As seguintes substâncias não exercem efeitos significativos(menos de 10 %) sobre o método da FT4 quando adicionadas aum pool de 2.5 ng/dl de soro nas concentrações indicadas:Acetaminofeno20 mg/dl [1323 µmol/l]Amicacina15 mg/dl [256 µmol/l]Ampicilina5 mg/dl [143 µmol/l]Ácido ascórbico3 mg/dl [170.3 µmol/l]Cafeína10 mg/dl [515 µmol/l]Cloranfenicol25 mg/dl [774 µmol/l]Clordiazepoxido2 mg/dl [67 µmol/l]Clorpromazina5 mg/dl [157 µmol/l]Cimetidina10 mg/dl [396 µmol/l]Creatinina30 mg/dl [2652 µmol/l]Dextrano 752500 mg/dl [333 µmol/l]Diazepam2 mg/dl [70 µmol/l]Digoxina5 ng/ml [6.4 nmol/l]Eritromicina20 mg/dl [273 µmol/l]Etanol350 mg/dl [76 mmol/l]Etosuximida30 mg/dl [2125 µmol/l]Gentamicina12 mg/dl [251 µmol/l]Heparina sódica 8 U/ml [8000 IU/l]Lidocaína6 mg/dl [256 µmol/l]Cloreto de líto3.5 mg/dl [5.07 mmol/l]Metimazol4 µg/ml [35 µmol/l]Nicotina2 mg/dl [123 µmol/l]Penicilina G 25 U/ml [25,000 U/l]Pentobarbital10 mg/dl [442 µmol/l]Fenobarbital10 mg/dl [431 µmol/l]Fenilbutazona30 µg/ml [97 µmol/l]Primidona10 mg/dl [458 µmol/l]Propoxifeno0.4 mg/dl [12 µmol/l]Proteína, IgG humana 6 g/dl [60 g/l]Teofilina25 mg/dl [1388 µmol/l]Ureia 500 mg/dl [83.3 mmol/l]Ácido úrico20 mg/dl [1.2 mmol/l]e. Système International d’Unités [Unidades S.I.] entre parêntesis rectos.ProcedimentoMateriais necessáriosCartuxo de reagente FT4 Flex®, N°. de Cat. RF410Cuvettes de Reacção, N°. de Cat. RXV1ASolução de Lavagem, N°. de Cat. RD701Solução de limpeza da pipeta de reagente, N°. de Cat. RD702Passos do testeA recolha da amostra, administração do reagente, mistura,separação, processamento e impressão dos resultados sãorealizados automaticamente pelo sistema Dimension® com omódulo de imunoensaio heterogéneo. Para mais pormenores sobre oprocessamento, consulte o manual do sistema Dimension®.CondiçõesCuvette de Reacção• Volume de amostra 50 µl• Anticorpo-CrO 2 35 µl• T3-ALP 50 µl• Temperatura 37.0 °C• Períodos de incubação 4 minutos (primeiro passo);3 minutos (segundo passo)Cuvette Reacção Branco• Volume Transferido 50 µl 0 µl• Volume de Reagente FADP 40 µl 40 µl• Volume de Reagente APO 28 µl 28 µl• Volume de Diluente 257 µl 292 µl• Temperatura 37.0 ± 0.1 °C• Período de reacção 3.7 minutos• Comprimento de onda 510 e 700 nm• Tipo de medição Taxa Bicromática• Unidadesng/dl [pmol/l]CalibraçãoO procedimento de calibração geral encontra-se descrito no manualdo sistema Dimension®. Quando calibrar o método FT4, deverão sertomadas em consideração as seguintes informações:• Esquema de calibração:• Frequência da calibração:Cinco-níveis em triplicadoCada novo lote de cartuchos de reagente.Cada 30 dias para qualquer lote.• Coeficientes atribuídos: C 0 4530.0 C 3 0.067C 1 -4873.0 C 4 0.5C 2 -0.486Controlo de qualidadePelo menos uma vez em cada dia de utilização, analise dois níveis deum material de controlo de qualidade com concentrações de FT4conhecidas. Se os resultados caírem fora dos limites aceitáveis dolaboratório, siga o procedimento apresentado no manual do sistemaDimension®.Poderá existir uma avaria no sistema caso se verifique a seguinteprecisão de cinco testes:Concentração de FT4D.P.0.70 ng/dl [9.01 pmol/l] >0.10 ng/dl [1.29 pmol/l]3.00 ng/dl [38.61 pmol/l] >0.25 ng/dl [3.22 pmol/l]*Resultados: O instrumento calcula e imprime automaticamente aconcentração do resultado da FT4 em ng/dl [pmol/l].Os resultados deste teste devem sempre ser interpretados emconjunto com o histórico médico do doente, estado clínico e outrosdados de interesse.Limitações do procedimentoResultados: > 6.50 ng/dl [83.66 pmol/l] deve ser referido comosuperior a 6.50 ng/dl [83.66 pmol/l]. As amostrasNÃO devem ser diluídas.< 0.2 ng/dl [2.57 pmol/l] deve ser referido comoinferior a 0.2 ng/dl [2.57 pmol/l].As amostras do doente poderão conter anticorpos heterofílicos, osquais poderão reagir no imunoensaio de forma e provocaremresultados falsamente positivos ou negativos. Este ensaio foiconcebido de forma a minimizar a interferência dos anticorposheterofílicos. 5O sistema de registo dos dados contém mensagens de errodestinadas a avisar o operador relativamente a avarias específicas.Todas as tiras de registo que apresentem estas mensagens de errodeverão ser guardadas para seguimento. Consulte o manual dosistema Dimension®.Intervalo de Referência: 0.59 a 1.17 ng/dl [7.6–15.1 pmol/l]O intervalo de referência da FT4 foi determinado a partir depopulações de indivíduos aparentemente saudáveis. Foram testadasum total de 222 amostras de soro. O intervalo de referência para aFT4 foi calculado de forma não paramétrica e representa os 95%centrais desta população.As amostras obtidas de mulheres grávidas, as quais apresentamníveis de TBG tipicamente elevados, forneceram resultados de FT4consistentes com o intervalo de referência, reflectindo de formacorrecta o estado da tiróide do doente.As amostras de doentes descritos como “eutiroideus doentes”forneceram resultados de FT4 normais.Cada laboratório deverá estabelecer os seus intervalos de referênciapara a FT4, conforme é executado o procedimento no sistemaDimension®Características específicas do desempenho fReprodutibilidade ghMédiaDesvio Padrão (% CV)Material ng/dl [pmol/l] Intra-ensaio TotalPool de Soro 0.72 [9.27] 0.02 [0.26] (3.2) 0.05 [0.64] (6.5)Controlo do Imunoensaio Dade®Nível 1 0.48 [6.18] 0.06 [0.8] (13.1) 0.10 [1.29] (20.6)Nível 2 2.06 [26.51] 0.06 [0.77] (2.7) 0.10 [1.29](4.8)Nível 3 6.59 [84.81] 0.09 [1.16] (1.3) 0.21 [2.70] (3.1)f. Todos os testes específicos das características de desempenho foramexecutados depois de terem sido efectuadas as verificações de controlo dequalidade do equipamento recomendadas (consulte o manual do sistemaDimension®).g. Os testes da reprodutibilidade foram efectuados de acordo com a NormaExperimental NCCLS para a Avaliação pelo Utilizador do Desempenho comPrecisão de Aparelhos de Química Clínica (NCCLS Tentative Guideline forUser Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices)(EP5-T2, 1992).h. As amostras em cada nível foram analisadas em duplicado, uma vez por dia,durante 20 dias. Os desvios intra-ensaio e os desvios padrão totais foramcalculados através do método da análise da variância.• Intervalo do ensaio0.20 - 6.50 ng/dl [2.57 - 83.7 pmol/l]• Material de referência Calibrador THYR N°. de Cat. RC410• Níveis de calibração sugeridos 0.00, 0.70, 1.50, 3.00, 6.50 ng/dl[0.0, 9.0, 19.3, 38.6, 83.7 pmol/l]

CorrelaçãoEstatística de RegressãoMétodo Intersecção Coeficientecomparativo Declive ng/dl[pmol/l] de correlação nT4 Livre IMx ® 0.96 0.02 [0.3] 0.988 156 iT4 Livre AxSYM ® 0.97 -0.06 [0.77] 0.986 220 jIMx ® e AxSYM ® são marcas registadas dos Abbott Laboratories, Abbott Park, IL60064.i. Os valores de FT4 no estudo da correlação variaram entre 0.41 e 6.90 ng/dl[5.3 a 89.0 pmol/l].j. Os valores de FT4 no estudo da correlação variaram entre 0.41 e 5.85 ng/dl[5.3 a 75.3 pmol/l].Especificidade analíticaA albumina não afectou o ensaio da FT4. Foram analisadas cento esete amostras de doentes relativamente à albumina e à FT4 (intervaloda albumina de 1.9 a 5.3 g/dl e intervalo de FT4 de 0.55 a 1.69 ng/dl[7.08–21.75 pmol/l]). Quando os resultados da FT4 foramcomparados com as concentrações de albumina, não foi observadaqualquer correlação significativa (r = 0.003).Nas concentrações indicadas, existe reacção cruzada das substânciasseguintes com o método da FT4:Substância Concentração % Reactividade cruzadaL-Triiodotironina 600 ng/dl 0.00 %R- Triiodotironina 100 ng/dl 0.10 %Monoiodotyrosina 100 ng/dl 0.08 %Di-iodotirosina 100 ng/dl 0.10 %d-tiroxina 10 µg/dl 63 %Sensibilidade analíticaA sensibilidade do método FT4 é de 0.20 ng/dl [2.57 pmol/l], valorque representa a menor concentração de FT4 que pode serdistinguida do zero. Esta sensibilidade é definida como aconcentração dois desvios padrão acima do Calibrador Tiróide denível 1 (0.00 ng/dl [pmol/l]) (n=20).*Bibliografia1. Tietz NW, Textbook of Clinical Chemistry, W.B.Saunders Co., Philadelphia,PA 1994; specimen collection 58-69, storage 1715.2. Elkins RP, Free Hormones in blood: The concept and the measurement, J. ofImmunoassay, 1984;7:163-180.3. Obzansky DM, et al., Sensitive, colorimetric enzyme amplification cascade fordetermination of alkaline phosphatase and application of the method toimmunoassay of thyrotropin, Clin Chem 1991; 37:513-518.4. Clinical Laboratory Handbook for Patient preparation & specimen handling.Fascicle V, Endocrinology/Metabolism, College of American Pathologists,1989.5. Vaidya HC, Beatty BG, Eliminating interference from heterophilic antibodies ina two-site immunoassay for creatine kinase MB by using F(ab ' ) 2 conjugateand polyclonal mouse IgG, Clin Chem 1992; 38:1737-1742.Dimension® e Flex® são marcas registadas da Dade Behring Inc., noGabinete de Patentes e Marcas Registadas dos E.U., na Alemanha e emmuitos outros países.* As secções revistas são anotadas com um asterisco.Chave dos SímbolosFabricado porEC REPRepresentante Autorizado0800-170417SAC - Serviço de Atendimento ao Clientesac/brazil@dadebehring.comImportado e distribuído porDADE BEHRING LTDA.Rua Geraldo Flausino Gomes, 61 - 1º AndarBrooklin - São Paulo - SP - CEP 04575-060Fone (11) 3371-3200 - Fax (11) 3371-3201CNPJ: 00.897.408/0001-08Resp. Téc.: Nanci A. TrindadeCRF - SP: 7.297Dade Behring Inc.Newark, DE 19714, U.S.A.ECREPDade Behring LimitedRegus House, AtterburyMilton Keynes MK10 9RGUnited KingdomEXPYYYY-MM-DD2°CIVDLOT8°CDispositivo Médico para Diagnóstico In VitroCódigo do LoteA data em “Utilizar antes de” encontra-se noformato ano-mês-dia (AAAA-MM-DD)Limitação da TemperaturaMarca CEREF Número de CatálogoConsulte as Instruções de Utilização2001-12-13 PT2003-11 F PN 755410.001-PT