Identificação de Atividade Ácida Prostática em Manchas ... - NewsLab

IntroduçãoAfosfatase ácida designa umgrupo heterogêneo não específicode fosfatases que exibempH ótimo entre 4,5 e 7,0 e catalizama hidrólise de monoéster ortofosfóricoproduzindo um álcool e umgrupo fosfato, e é amplamente distribuídanos tecidos humanos, alémde animais, vegetais e alimentosem geral (1). No homem adulto, apróstata contribui com quase cercade 50% da fosfatase ácida total,sendo o restante proveniente dosdemais tecidos (ossos, fígado, baço,rins, eritrócitos e plaquetas) (2).A fosfatase ácida prostática(FAP) (EC 3.1.3.2), por ser substânciaespecífica do homem e presenteno sêmen, tem sido utilizadacom muita freqüência em análisesforenses, pois com o crescenteaumento da violência sexual é imprescindíveladotar recursos científicossensíveis, específicos e poucodispendiosos para caracterizaçãode violência sexual, tornando-serotina sua pesquisa na secreçãovaginal e anal, já que, havendoejaculação, mesmo em indivíduosazoospérmicos (patológicos ouvasectomizados) certamente haveráFAP, o que caracterizará, semdúvida, a conjunção carnal ou o atolibidinoso (3). Entretanto, a especificidadee sensibilidade da FAP sãoquestionáveis pela possibilidade deresultados falsos-positivos devido ainterferentes presentes em outrosmateriais biológicos e, até mesmo,em alimentos e outros componentesorgânicos (4, 5).O método de Roy tem sido utilizadocom sucesso para a quantificaçãode FAP sérica e na análise qualitativaem casos de violência sexual comoalternativa do clássico teste de Bergdesenvolvido na década de 1950 (1).Entretanto, seu uso ainda carece depadronização para a quantificaçãoem análise forense, uma vez que oesperma possui mais de 1.000 vezesa concentração de FAP sérica e suaquantificação pode contribuir nacaracterização de casos de violênciasexual (4, 6, 7, 8).Desta forma, este trabalho visatestar uma técnica de dosagemda FAP, por meio do método colorimétricode Roy, em manchassimuladas com fluidos orgânicos ealimentos avaliando a possibilidadede resultados falsos-positivos oufalsos-negativos na dosagem deFAP em análises forenses.MetodologiaForam utilizadas manchas dediversos materiais biológicos (esperma,sangue total, soro, saliva,fezes, urina e secreção vaginal) ealimentos (café, leite e feijão) parasimular possíveis manchas encontradasno local de crimes relacionadoscom suposto atentado sexual.As manchas foram obtidas pelaadição de 50µL de cada material empapel de filtro qualitativo número 1.Uma amostra de 1cm 2 de papel defiltro contendo a amostra foi cortadaapós 15 minutos de secagem aoar e colocado para eluir em 1,0mLde água destilada estabilizada com10µL de ácido acético 10% (v/v)durante 15 minutos em temperaturaambiente.Amostras sólidas (p.ex.: fezes,alimentos) foram previamente diluídas(± 1g em 1mL de água) antesde serem adicionadas ao papel defiltro. As amostras de secreção vaginalforam coletadas com swab dealgodão esterilizado e distendidasdiretamente sobre o papel de filtro,mas também foram diluídas em1,0mL de solução salina fisiológica(NaCl 0,85%) e depois adicionadasao papel de filtro. A Figura 1 sumarizao processo metodológico paraa simulação das manchas.Os materiais biológicos foramprovenientes do Laboratório deAnálises Clínicas do Centro de EnsinoSuperior do Pará (CESUPA) eos alimentos foram provenientes depreparo caseiro.Para evitar a contaminação entreas amostras, foi realizada rigorosalimpeza do material envolvido naobtenção dos fragmentos de papelde filtro (pinça e tesoura) paraevitar resultados falsamente positivosdecorrentes da contaminaçãodo material, principalmente poresperma.A FAP foi dosada na soluçãoeluída através do Método de Roy(9), conforme sugerido pelo fabricantedo kit de dosagem (Labtest140NewsLab - edição 85 - 2007