armando mateus pomini - Biblioteca do Instituto de Química - Unicamp

___________________________________________________RESULTADOS E DISCUSSÃOA fração em que foi identificada a N-heptanoil-HSL foi submetida a umbioensaio com o repórter Agrobacterium tumefaciens NTL4(pZLR4). Entrediversos biossensores construídos para detectar acil-HSLs, o mutante A.tumefaciens NTL4(pZLR4) é um dos que possuem maior sensibilidade paraacil-HSLs com diferentes comprimentos de cadeia acila e substituintes do tipooxo e hidroxi (Cha et al., 1998). Este bioensaio é interessante uma vez que elese utiliza de um mecanismo biológico muito próximo ao naturalmenteobservado nos fenômenos de quorum-sensing.A espécie A. tumefaciens selvagem produz a N-(3-oxo-octanoil)-HSL,que coordena a expressão de fatores de virulência deste fitopatógeno (Zhanget al., 1993; Pierson III et al., 1998). O mutante NTL4(pZLR4) é incapaz deproduzir a substância sinalizadora pela supressão do gene que codifica aenzima TraI. Além disso, esta cepa recebeu um plasmídeo pTiC58 que contémuma fusão traG::lacZ e o gene traR. Assim, o gene traR codifica a síntese daproteína receptora TraR, que é capaz de se complexar à acil-HSLs exógenas.O complexo assim formado [TraR-(acil-HSL)] regula positivamente aexpressão do gene lacZ, responsável pela síntese de uma enzima β-galactosidase capaz de degradar o reagente 5-bromo-4-cloro-3-indolil-β-Dgalactopiranosídeoadicionado ao meio (X-Gal). Assim, observa-se umacoloração azul no meio caso exista alguma acil-HSL em concentraçãosuficiente para ativar o biossensor (Figura 16 e Esquema 3) (Ravn et al., 2001;Cha et al., 1998).32