armando mateus pomini - Biblioteca do Instituto de Química - Unicamp

PARTE EXPERIMENTALHinton contendo o microrganismo. As placas foram incubadas em BOD a30ºC por 24 h e posteriormente analisadas no leitor de microplacas AnalytikJena em modo absorvância (650 nm). Foram tomadas 4 leituras por poço,em 3 pontos diferentes por poço. O teste como um todo foi realizado emquadruplicata.5.3.3. Experimentos de diferença de transferência de saturação (STD-RMN) células íntegras de A. tumefaciens NTL4(pZLR4)Estes experimentos foram realizados em colaboração com o doutorandoLuis Fernando Cabeça em nosso grupo de pesquisas. Para os experimentosde RMN STD utilizou-se D 2 O e (CD 3 ) 2 SO (20%) como mistura solvente e osinal residual de HDO em 4,7 ppm como referência interna.Experimentos de STD. Os experimentos de STD foram seletivamentesaturados usando trens de pulso Gaussian em –0,5 ppm para os espectros onresonancee em 30 ppm para o espectro de STD controle (off-resonance). Asubtração dos espectros foi feita após cada varredura por ciclagem de fase. Aduração do pulso seletivo era de 50 ms e a espera entre os pulsos foi de 1ms. A duração da fase de presaturação (2,55 s) foi ajustada usando n=50ciclos.Experimentos de ROE (Otting, 1993). Os experimentos de ROESY 1Dforam obtidos com pulsos seletivos de 180º e não seletivos de 90º. Umtempo de mistura de 0,5 s foi utilizado durante o spin-lock. O pulso seletivofoi gerado por um gerador de ondas, que automaticamente atenuava a forma,potência e duração do pulso para conseguir a seletividade desejada. Asubtração das aquisições on- e off-resonance forneceram os espectros deROESY 1D.148