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Estudo comparativo da ação da toxina botulínica tipo A e da crotoxina sobre as células satélites da musculatura ...301Este estudo confirma tais relatos, demonstrandohaver um aumento significativo na ativação das CS apósa utilização da toxina botulínica e, de forma um poucomais acentuada, após a aplicação da crotoxina. O estudohistológico das fibras musculares dos grupos botoxina ecrotoxina revelou sinais de regeneração, sem apresentarsinais significantes de atrofia muscular. Demonstroutambém que as lesões foram focais. Ao contrário do quefoi demonstrado por Christiansen et al., verificou-se quea dosagem das toxinas não foi tão importante no acréscimodas CS. O volume de solução salina ou de toxinaaplicado também não influenciou no aumento das CS.Os animais sacrificados mais tardiamente apresentarammaior aumento na ativação das CS e pouco desarranjoda arquitetura das fibras musculares.Porter et al. demonstraram que as alteraçõeshistológicas causadas pela toxina botulínica são reversíveis(14) . Supõe-se que o aumento na ativação das CS es-teja diretamente relacionado à regeneração das fibras.Neste estudo, observou-se, no exame histológicodo grupo crotoxina, maior agressão na estrutura das fibrase sinais de regeneração mais evidentes, o que poderiaestar correlacionado com o aumento de CS ativadas.Quando foram aplicadas 10 U de toxinas, o grupocrotoxina ainda apresentou alterações histológicasmarcantes após 26 dias (núcleos reativos e fibras emnecrose); já no grupo botoxina a arquitetura das fibrasmusculares foi reestruturada. Acredita-se que o processode regeneração das fibras musculares após a aplicaçãoda crotoxina seja mais lento que após a aplicação da toxinabotulínica, o que poderia explicar a ação mais duradourada crotoxina. Entretanto, Ribeiro (2001) verificouque a crotoxina e a toxina botulínica produziram paralisiatransitória do músculo reto superior de coelhos, demaneira semelhante, em determinadas concentrações (11) .Considerando-se os estágios regenerativos do pro-Dias de vida N Média Desvio Valor Valorp,adrão mínimo máximoBotoxina 13 3 32,70 3,71 30,06 36,95Matador 19 5 45,87 13,54 33,43 64,65M)QD 26 6 56,58 7,91 42,59 fi5,87(p =0,018)*Botoxina 13 3 28,59 5,41 23,fi5 34,38Marcador 19 5 50,41 13,44 36,70 68,01PCNA 26 6 64,33 7,98 50,33 72,05(p =0,016)**Crotoxina 13 3 29,95 7,15 23,37 37,56Man:ador 19 6 50,31 2,84 45,45 53,85M)QD 26 6 65,23 3,96 61,62 71,02(p = 0,00:»*Crotoxina 13 3 38,88 3,63 35,75 42,86Marcador 19 6 55,14 2,27 52,22 58,77PCNA 26 6 67,70 4,40 61,78 73,38(p = 0,002)**Controle 13 6 22,27 10,31 14,39 42,55Man:ador 19 11 29,83 8,33 19,71 45,49M)QD 26 11 43,52 3,92 38,37 51,78(p = 0,(0»)*Controle 13 6 26,W 11,11 12,18 42,48Marcador 19 11 35,26 7,75 24,13 48,30PCNA 26 11 45,44 5,86 32,17 54,27=0,001)*** ANOVA; ** Teste de Kruskal-WallisTabela 3Percentuais de núcleos corados pelo Myo D e pelo PCNA nos grupos,de acordo com os dias de vida após a aplicação:Rev Bras Oftalmol. 2009; 68 (5): 296-303
302Lacordia MHFA, Ribeiro GB, Almeida HC, Silva CHRA, Coelho MCJ, Lamim RFBcesso de reparação muscular - ativação (iniciada porvolta de duas horas após o trauma) e proliferação (iniciadapor volta de dois a três dias após o trauma), seguidasda diferenciação e da maturação - foram utilizados osmarcadores de CS Myo D (julgado um excelentemarcador para CS ativadas) e PCNA (considerado umexcelente marcador para CS em proliferação) (1) . Notouseum discreto aumento no percentual de núcleos marcadoscom o PCNA, o que demonstrou a existência demaior porcentagem de CS em proliferação. No entanto,não foi detectada diferença estatisticamente significativaentre o porcentual de núcleos.Estudos futuros serão necessários para maioresesclarecimentos sobre a ação a longo prazo da toxinabotulínica e da crotoxina nas CS da musculatura ocularextrínseca.CONCLUSÃOA aplicação de toxina botulínica e de crotoxinaprovocou aumento no número de células satélitesativadas e em proliferação nos músculos retos superioresde coelhos. Não houve correlação estatisticamentesignificativa entre a dose aplicada e o aumento na ativaçãodas células satélites nos grupos botoxina e crotoxina;da mesma forma, em todos os grupos, não houve correlaçãoentre o volume de substância aplicada e o aumentona ativação celular. O tempo de vida após a aplicaçãocontribuiu para a elevação do número de células, independentementeda substância utilizada.Embora tenha ocorrido um maior aumento na ativaçãode células satélites após a aplicação de crotoxina,estatisticamente, a diferença na ativação celular entre osgrupos botoxina e crotoxina não foi significativa. O grupocrotoxina apresentou ao estudo histológico maior desarranjona arquitetura das fibras musculares e mais evidênciasde sinais de regeneração, o que pode estar relacionadoao aumento da ativação das células satélites.Os resultados deste estudo sugerem que o processode regeneração das fibras musculares após ainoculação da crotoxina seja mais lento que após ainoculação da toxina botulínica, o que pode estar relacionadoà ação mais duradoura da crotoxina.AgradecimentosAo Dr. Márcio José Martins Alves, professoradjunto do Departamento de Saúde Coletiva da Faculdadede Medicina da Universidade Federal de Juiz deFora, pelo auxílio na análise estatística. Ao Laboratóriode Anatomia Patológica da Santa Casa de Misericórdiade Juiz de Fora e, em especial, a Débora Tavares Grizendi,pelo trabalho de preparação das lâminas.ABSTRACTPurpose: To evaluate the effect of botulinum toxin A andcrotoxin on satellite cell activation in the muscle fibers ofsuperior rectus muscles of rabbits. Methods: The superiorrectus muscles in the right eyes of 29 male, albino, NewZealand rabbits were inoculated with different doses ofbotulinum toxin A or crotoxin. The contra-lateral superiorrectus muscles in each rabbit were inoculated with thesame volume of saline solution only. The animals weresacrificed either 12, 18 or 25 days after the inoculation.The eyes were enucleated and subsequently, each musclewas prepared for immunohistochemical analysis, usingsatellite cell markers. The positive nuclei, revealed by themarkers in each 100 myofibers, were counted. Results: Theapplication of the botulinum toxin A and crotoxinatriggered a more significant increase satellite cellactivation and proliferation in right superior rectusmuscles in rabbits when compared with a saline solutioninoculation in the contralateral muscles. Greater cellactivation was observed after crotoxin application,although, statistically, the difference in the effects of thisactivation between the botoxin and crotoxin groups wasnot significant. There was no statistically significantcorrelation between the dose and the volume applied andresulting cell activation in the botoxin and crotoxin groups.Post-application survival time contributed to the increasein activated satellite cells in all groups. Conclusion: Theobserved increase in disorganization in the musclestructure, together with more obvious signs of regenerationin the crotoxina group, suggests a correlation with theincrease in satellite cell activation.Keywords: Satellite cells, skeletal muscle/drugeffects; Botulinum toxin type A; Crotoxin; Strabismus;Muscle fibers/drug effects.REFERÊNCIAS1. Shi X, Garry DJ. Muscle stem cells in development, regeneration,and disease. Genes Dev. 2006; 20(13):1692-708.2. Mauro A. Satellite cell of skeletal muscle fibers. J BiophysBiochem Cytol. 1961; 9: 493-5.3. McLoon LK, Wirtschafter JD. Continuous myonuclear additionto single extraocular myofibers in uninjured adult rabbits.Muscle Nerve. 2002; 25(3);348-58.Rev Bras Oftalmol. 2009; 68 (5): 296-303
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