Set-Out - Sociedade Brasileira de Oftalmologia

298Lacordia MHFA, Ribeiro GB, Almeida HC, Silva CHRA, Coelho MCJ, Lamim RFBO QUADRO 1 mostra as doses de toxina botulínica ede crotoxina aplicadas em cada coelho. O coelho 5 apresentavaatrofia ocular esquerda, por trauma perfurante,não tendo sido, portanto, aplicada a solução no músculoreto superior de tal olho.Após a aplicação das toxinas e da solução fisiológica,os coelhos foram examinados diariamente paraobservação de existência de efeitos adversos locais esistêmicos. Não houve mudança comportamental. Observou-septose palpebral moderada no olho direito doscoelhos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22,23 e 24 e ptose discreta nos coelhos 11, 12, 13, 14, 25, 26,27, 28 e 29, com duração média de cinco dias. No olhoesquerdo de todos os coelhos, não houve ptose palpebral.Houve sinais de hiperemia conjuntival em todos os coelhosno primeiro dia após a aplicação, mas tais sinaisdesapareceram, na maioria dos animais, no terceiro apósa aplicação. Não foi observada secreção conjuntival.Os animais foram sacrificados por médico veterinário,nos momentos estabelecidos (12, 18 ou 25 diasapós as aplicações), com tiopental sódico (Thiopentax®– Cristália), na dosagem de 20 mg/kg, seguido de injeçãointracardíaca de cloreto de potássio a 10%. Os coelhos1, 6, 11, 15, 20 e 25 foram sacrificados no 12º dia apósas aplicações; os coelhos 2, 3, 7, 8, 12, 16, 17, 21, 22, 26 e27, no 18º dia; os coelhos 4, 5, 9, 10, 13, 14, 18, 19, 23, 24, 28e 29 no 25º dia.Posteriormente, os olhos foram cuidadosamenteenucleados, mantendo-se os músculos retos superioresintactos. Os globos oculares foram colocados em frascosnumerados, com formol tamponado a 10%. Os músculosretos superiores foram desinseridos dos globos oculares.Cada músculo foi colocado em cassete plástico, identificadocom o mesmo número contido no frasco de origeme levado para processamento histológico. Lâminas forammontadas, preparadas e coradas com hematoxilinaeosina e marcadores de células satélites Myo D e PCNA(proliferating cell nuclear antigen).As lâminas tiveram suas identificações recobertasdurante a análise anátomo-patológica e também durantea contagem das CS, realizada por patologista experiente.Foram examinadas em microscópio da marca Nikoncem miofibras escolhidas ao acaso, com aumento de milvezes (ocular de dez vezes e objetiva de cem vezes); foifeita a contagem dos núcleos positivos para o Myo D epara o PCNA, bem como a contagem do total de CS(núcleos positivos e negativos para os marcadores).Os dados foram analisados, calculando-se asmédias aritméticas, o desvio padrão e a amplitude davariação. As variáveis independentes foram representadaspelas substâncias injetadas no músculo reto superiordo olho direito dos coelhos, bem como pelos co-fatorestempo de vida após a aplicação, volume aplicado e dosedas substâncias. As variáveis dependentes foram representadaspela porcentagem de núcleos de CS ativados.A avaliação do efeito foi realizada pela medidada ativação dos núcleos de células satélites, pelos doismarcadores, segundo o cálculo:% núcleos ativados = nº de núcleos ativados/100miofibras/total de núcleos/100 miofibrasO modelo estatístico empregou a comparaçãode médias de porcentagem de núcleos de CS ativadosentre os grupos definidos pelo tipo de substância. Paraavaliar a diferença das médias de porcentagem de núcleosde CS ativados entre os grupos de substâncias, utilizouseo teste de ANOVA, quando foram atendidos os pressupostosde normalidade e homogeneidade das variâncias.No caso do não atendimento dos pressupostos, foi utilizadoo teste não paramétrico de Kruskal-Wallis. Para avaliaçãoda normalidade, foi utilizado o teste de Kolmogorov-Smirnov. Para avaliação da homogeneidade dasvariâncias, utilizou-se o teste de Levene. Para avaliar aexistência de correlação entre o percentual de núcleosativados, as doses, os volumes e os dias de vida após aaplicação, foram utilizados o coeficiente de Pearson e ainspeção do diagrama de dispersão. A interferência dosco-fatores nas associações foi avaliada com o testeANOVA de dois critérios, quando atendidos os pressupostosdos testes paramétricos. Todos os resultados foramconsiderados significativos, em um nível de significânciade 5% (α = 0,05). Valores de p entre 0,05 e 0,10 foramconsiderados marginalmente significativos.RESULTADOSDos 57 músculos retos superiores de coelhos estudados,14 receberam aplicação de toxina botulínica (grupobotoxina), 15 receberam crotoxina (grupo crotoxina)e 28 receberam solução salina (grupo controle). A tabela1 esquematiza os percentuais de núcleos marcadospelo Myo D e pelo PCNA nos grupos estudados. Após arealização dos testes para a análise entre os grupos dospercentuais de contagem dos núcleos marcados respectivamentepelo Myo D e pelo PCNA, notou-se que adiferença entre os efeitos mensurados foi estatisticamentesignificativa (p = 0,000). Não houve diferença estatis-Rev Bras Oftalmol. 2009; 68 (5): 296-303