Kit DxSelect para IgM contra o Vírus da dengue Características de ...

7 a 10 dias após o início do ataque. O pesquisador usou esse produto paraanalisar soros usando o método de incubação do dia para a noite para realizaro ensaio e o ensaio ELISA IgM do pesquisador.Sensibilidade com Soros da Fase Aguda Pareados (centro 2)Kit DxSelect para IgM contra o Vírus dadengueCódigo do Produto: EL1500MDistribuição proibida nos Estados UnidosINCUBAÇÃO EM DUAS HORAS OU DO DIA PARA A NOITEUm pesquisador interno comparou o desempenho do ensaio com oprocedimento de incubação em duas horas ou incubação do dia para a noite.Cento e doze (112) soros foram avaliados e a concordância total foi de 97,3%(109/112). Dos 112 soros, o ensaio do dia para a noite foi positivo em 55 enegativo em 57, sendo que o ensaio em 2 horas foi positivo em 98,2% (54/55)das 55 amostras que foram positivas do dia para a noite. A única amostrapositiva no ensaio do dia para a noite e negativa no ensaio de duas horas foitestada em duplicata. O índice do primeiro teste foi 0,97 e o do segundo foi1,08 (média de 1,03). Dos 57 ensaios negativos com a técnica do dia para anoite, o ensaio de 2 horas foi negativo em 96,5% (55/57). Das duas amostrasnegativas no ensaio do dia para a noite e positivas no ensaio de 2 horas, umaapresentou índice de 1,1 e a outra apresentou índice de 1,4.2 horasRev. ICaracterísticas de desempenhoDo dia para a noitePositivo Negativo TotalPositivo 98,2% (54/55) 3,5% (2/57)IC 95% 90,3-100% IC 95% 0,4-12,1%56Negativo 1,8% (1/55) 96,5% (55/57)IC 95% 0,0-9,7% IC 95% 87,9-99,6%56Total 55 57 112SENSIBILIDADEO centro de análise 1 avaliou a sensibilidade dosando soros bemcaracterizados usando o método de incubação do dia para a noite. Os sorosforam processados da seguinte maneira:1) Colhido de pacientes com sintomas de dengue ou dengue hemorrágica(DH)2) Soro da fase aguda3) Colhido em 1 a 16 dias após o início dos sintomas4) Infecção pelo vírus da dengue confirmada por ELISA, IH e/ou PCR.Sensibilidade do ELISA IgM da Focus com Soro da Fase Aguda (centro 1)Condições Sensibilidade IC 95%FD 96% (48/50) 86,33-99,5%FHD 96% (25/26) 80,4-99,9%Total 96% (73/76) 88,9-99,9%O centro de análise 2 avaliou a sensibilidade através de ensaios de sorologiapareada (n=34) com amostras de 17 pacientes com suspeita de infecção pelovírus da dengue. O soro de cada paciente foi extraído no início do ataque e deEquipamento Tempo após o iníciodos sintomasSensibilidade IC 95%ELISA da Focus 0 dias 35% (6/17) 14,2-61,7%ELISA da Focus 7-10 dias 82% (14/17) 56,6-96,2%ELISA do pesquisador 0 dias 29% (5/17) 10,3-56,0%ELISA do pesquisador 7-10 dias 71% (12/17) 44,0-89,7%O centro de análise 3 avaliou a sensibilidade dosando um painel de sorospositivos da dengue elaborado pelo governo dos EUA usando um ensaiocom incubação do dia para a noite. O painel de soros continha amostras cominfecção primária recente, infecção primária e infecções secundárias.Sensibilidade do ELISA IgM da Focus em soros de infecção pregressa ousecundária (centro 3)Condições Sensibilidade IC 95%Infecção primária recente 86% (32/37) 71.2-95.5%Infecção primária 92% (47/51) 81.1-97.8%Infecção secundária 100% (15/15) 78.2-100%Total 91% (94/103) 82.7-99.4%O centro de análise 4 avaliou a sensibilidade dosando dois painéis de sorospositivos da dengue elaborado pelo governo dos EUA que incluíam umsubpainel de baixa DO e outro de soroconversão primária. O painel de baixaDO continha soros com baixa DO para o ELISA do pesquisador, e o painel desoroconversão primária continha amostras com tipos conhecidos de dengue.Os ensaios foram realizados com incubação do dia para a noite.Sensibilidade do Focus IgM ELISA em soros de soroconversão primáriacom baixa DO (centro 4)Condições Sensibilidade IC 95%DO baixa 92% (12/13) 64.0-99.8%Soroconversão (tipo 1) 100% (2/2) 15.8-100%Soroconversão (tipo 2) 100% (2/2) 15.8-100%Soroconversão (tipo 4) 100% (2/2) 15.8-100%Total 95% (18/19) 74.0-99.9%O centro de análise 5 avaliou a sensibilidade dosando um painel de soros deinfecção recente com 15 amostras de pacientes com cultura positiva paratipos específicos de dengue e resultado positivo no teste de inibição dehemaglutinação (IH). Os ensaios foram realizados com incubação do dia paraa noite.Sensibilidade do ELISA IgM da Focus em amostras com cultura ou IHpositiva (centro 5)Condições Sensibilidade IC 95%Cultura positiva p/tipo 1 75% (6/8) 34.9-96.8%Cultura positiva p/tipo 2 100% (1/1) Não se aplicaCultura positiva p/tipo 3 100% (5/5) 47.8-100%Cultura positiva p/tipo 4 100% (1/1) Não se aplicaIH Positiva 92% (22/24) 73.0-99.0%Total 90% (35/39) 75.8-97.1%O centro de análise 7 avaliou a sensibilidade dosando quatro painéis desoros elaborados pelo governo dos EUA, incluindo amostras com IgM baixa,infecção primária, infecção secundária e infecção antiga. Os ensaios foramrealizados com incubação do dia para a noite.Sensibilidade do ELISA IgM da Focus em soros de infecção primária,infecção secundária e infecção pregressa (centro 7)Condições Sensibilidade IC 95%IgM baixa 97% (29/30) 82,8-99,9%Infecção primária 100% (10/10) 69,2-100%Infecção secundária 90% (9/10) 55,5-99,8%Infecção antiga 7% (1/14) 0,2-33,9%Total (exceto infecção antiga) 96% (48/50) 86,3-99,5%

FOCUS DiagnosticsDengue Virus IgM Capture DxSelectPágina 2Total 77% (49/64) 64,3-86,2%O centro de análise 8 avaliou a sensibilidade dosando 29 soros pareados e 3soros de um mesmo paciente(61 amostras de 30 pacientes). Os pacientesapresentavam suspeita de infecção pelo vírus da dengue, e os paresmostravam soroconversão ou pelo menos duplicação dos títulos de anticorposao exame de HI. Os ensaios foram realizados com incubação do dia para anoite.Sensibilidade do ELISA IgM da Focus em amostras com cultura ou IHpositiva (centro 8)EquipamentoELISA IgM da FocusIH do pesquisadorIgM ELISAdo pesquisadorPrimeiraextração37% (11/30)19,9-56,1%13% (4/30)3,8-30,7%20% (6/30)7,7-38,6%Segunda extração100% (30/30)88,4-100%100% (30/30)88,4-100%100% (30/30)88,4-100%Terceiraextração100% (1/1)N.D.100% (1/1)N.D.100% (1/1)N.D.ESPECIFICIDADEOs centros de análise 3, 4, 5, 7 e 8 avaliaram a especificidade em soros deindivíduos assintomáticos. O painel de soros assintomáticos do Local 5também foram positivos para inibição de hemaglutinação (IH) para os vírusda dengue e/ou da encefalite japonesa. Os ensaios foram realizados comincubação do dia para a noite.Especificidade do ELISA IgM da Focus em soros normais (centro 5)Condições Especificidade IC 95%Endêmica, normal (centro 3) 95% (53/56) 85,1-98,9%Endêmica, normal (centro 4) 100% (6/6) 54,1-100%Endêmica, IH positiva (centro 5) 94% (31/33) 79,8-99,3%Endêmica, crianças (centro 8) 100% (43/43) 91,8-100%Endêmica, adultos (centro 8) 94% (64/68) 85,6-98,4%Especificidade endêmica global 96% (197/206) 91,9-98,0%Não-endêmica (Local 7) 99% (99/100) 94,6-100%Total de endêmicos enão endêmicos97% (296/306) 94,1-98,4%REATIVIDADE CRUZADAO centro de análise 2 avaliou a reatividade cruzada testando soros depacientes vacinados contra febre amarela, infecção pela influenza ou infecçãopelo vírus Epstein-Barr. Os ensaios foram realizados com incubação do diapara a noite.O centro de análise 6 avaliou a reatividade cruzada testando soros depacientes de uma área endêmica com doença febril aguda e suspeita dedengue, mas nos quais os exames de dengue foram negativos. Os ensaiosforam realizados com incubação do dia para a noite.Especificidade do Focus IgM ELISA em soroscom potencial de reação cruzada (centros 2 e 6)Condições Especificidade IC 95%Vacinação contrafebre amarela* (centro 2)100% (6/6)* 54,1-100%Infecção por influenza* (centro 2) 100% (15/15) 78,2-100%Infecção porEpstein-Barr (centro 2)88% (7/8) 47,3-99,7%Doença febril aguda (centro 6) 100% (8/8)** 63,1-100%Especificidade total 97% (36/37) 85,8-99,9%* O Local 2 de pesquisa também constatou que todos os soros de pacientesvacinados para febre amarela ou infectados por influenza foram negativos .no testeELISA de IgM para dengue do pesquisador. O Local 2 de pesquisa não testou ossoros de infecção pro EBV com o ELISA do pesquisador.O centro de análise 8 avaliou a reatividade cruzada através de testesrealizados em soros de pacientes infectados com outros flavivírus e com sorosde pacientes infectados com outros vírus. Ambos os painéis de soros foramanalisados pela aparelhagem da Focus usando incubação do dia para a noite,IH e o método ELISA IgM do pesquisador. O painel de soros de flavivírusconsistiu de 33 soros de pacientes infectados por outros flavivírus como ovírus da febre amarela, vírus do oeste do Nilo, vírus Chikungunya, vírus daencefalite japonesa, flebovirus, vírus langat, bunyavírus e vírus Wesselsbron.Reatividade cruzada com infecções por flavivírus (centro 8)EquipamentoIH do pesquisador paraDengue tipo 2ELISA IgM dopesquisador paraDengueELISA IgM da Focuspara DengueReatividadecruzadaIC 95%39% (13/33) 22,9-57,9%12% (4/32) 3,5-29,0%27% (9/33) 13,3-45,5%Reatividade cruzada com infecções virais por outros agentes que nãoflavivírus (Local 8)EquipamentoIH dopesquisadorELISA IgG daFocusEBV(capsídeoviral)0%(0/4)25%(1/4)Reatividade cruzadaCMV HSV VZV Parvovírus Total0%(0/4)0%(0/4)0%(0/5)0%(0/5)33%(1/3)0%(0/3)20%(1/5)60%(3/5)10%(2/21)19%(4/21)O Local 9 de pesquisa avaliou o procedimento de subtração básicotestando 114 amostras com consenso de positividade para dengue deum painel de soros elaborado pela OMS com 87 amostras comdiagnóstico clínico positivo e 27 amostras caracterizadas comosoronegativas para dengue. O consenso dos exames sorológicosdeterminou que 14 das amostras negativas eram positivas paramalária e as 13 amostras restantes eram de febre amarela, dengue,infecção antiga por dengue ou sem infecção. Os ensaios foramrealizados com incubação de duas horas.Sem substrato de fundoO ensaio Focus IgM foi positivo em 100% (87/87) das amostras como vírus da dengue. Nas 27 amostras sem o vírus, o ensaio Focus IgMfoi negativo em 7,7% (1/13) das amostras sem malária e negativo em0% (0/14) das amostras com malária.Resultados do Focus IgM ELISA em amostras com resultado consensual paradengue (centro 9)Sem substrato de fundoDiagnóstico clínico n Positivo Negativo %Positivo 87 87 0%(87/87)IC 95%:95,8-100%Negativo (sem7,7% (1/13)malária) 13 12 1 IC 95% 1,4-33,3%Negativo (com0% (0/14)malária) 14 14 0 IC 95% 0-21,5%Com substrato de fundoO ensaio Focus IgM foi positivo em 98,9% (86/87) das amostrasdiagnosticadas com vírus da dengue. Nas 27 amostras sem o vírus, o ensaioFocus IgM foi negativo em 46,2% (6/13) das amostras sem malária e negativoem 0% (0/14) das amostras com malária.Resultados do Focus IgM ELISA em amostras com resultado consensual paradengue (centro 9)

FOCUS DiagnosticsSubstrato de fundoDiagnóstico clínico n Positivo Negativo %Positivo 87 86 198,9% (86/87)IC 95% 93,8-99,8%Negativo (sem46,2% (6/13)malária) 13 7 6 IC 95% 23,2-70,9%Negativo (com0% (0/14)malária) 14 14 0 IC 95% 0-21,5%Dengue Virus IgM Capture DxSelectPágina 3Uma validação interna foi realizada para comparar aincubação com antígeno por uma hora com o protocolo doCDC de incubação do dia para a noite. O estudo mostrou queo desempenho do ensaio após uma hora foi equivalente aoobtido após incubação por uma noite.PC.EL1500MRev. IData de edição 03 dez 2010ESTABILIDADEO centro de análise 7 avaliou a estabilidade. Os componentes liberadostiveram envelhecimento acelerado em pelo menos o equivalente a 2 anos auma temperatura de 2 a 8 o C por incubação a 37 o C. Os componentes comenvelhecimento acelerado foram então testados de acordo com as instruções,em paralelo com os componentes não acelerados. Os ensaios foram realizadoscom incubação do dia para a noite. Os componentes são consideradosestáveis se estes cumprem com os critérios de CQ especificados nasinstruções do produto. O produto foi aprovado em cada um dos critérios deCQ.Cypress, California 90630 EUAwww.focusdx.comREPRODUTIBIILIDADE INTRAENSAIOO centro de análise 7 avaliou a variação intraensaio. Duas tiras (8 cavidadespor tira) foram retiradas de seis placas e colocadas em uma nova placa (totalde 12 tiras com 96 cavidades). A nova placa foi utilizada para executar umensaio de acordo com as instruções contidas no pacote do produto usando umcalibrador de limiar como amostra.Reprodutibilidade Intra-Ensaio do ELISA IgM da FocusCavidades DO média Coeficiente devariaçãoFitasPlaca1 e 2 1 0,197 3,0%3 e 4 2 0,176 3,2%5 e 6 3 0,177 3,2%7 e 8 4 0,165 2,5%9 e10 5 0,175 2,7%11 e 12 6 0,172 3,9%Todas as 12 tiras, duas placasde cada placa (n=96 poços)0,180 6,9%REPRODUTIBILIDADE INTERENSAIOO centro de análise 7 avaliou a .variação interensaio analisando os controlese oito amostras diferentes (quatro soros positivos e quatro negativos) em trêsdias não consecutivos. O dispositivo apresentou consistência de interpretaçãode 100% nos três dias.REPRODUTIBILIDADE INTERLOTEO centro de análise 7 investigou a variação interlotes. Os controles eamostras diferentes (três soros positivos e dois negativos) foram testados comdois kits de diferentes lotes.Reprodutibilidade interensaio do ELISA IgM da FocusNº. da amostraInterpretaçãoLote 1 Lote 2 Lote 3 % deconcordânciaCQ 1 0,000 0,003 0,177 100%CQ 2 0,558 0,524 0,565 100%CQ 5 6,131 5,725 4,287 100%CQ 8 6,968 6,429 5,033 100%CQ 9 7,985 8,119 7,678 100%COMPARAÇÃO ENTRE MÉTODOS