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Para determinar a extensão de lipoperoxidação, alíquotas de 1ml de CI, CII e Tserão adicionadas a 2ml do reagente TBA. Como BRANCO , será usado 1ml de águaadicionados a 2ml de TBA. As quatro amostras assim obtidas serão incubadas a 100 o Cdurante 15min. Após esfriar, serão lidas as absorbâncias a 535nm. Essas leituras permitempreencher a Tabela III.TABELA IIPermeação do azul de metileno induzida pela lipoperoxidaçãoSOLUÇÕES EXTERNASÀS TRIPAS APÓS INCUBAÇÃO A 660CONTROLE I (CI)(água + LAM)CONTROLE II (CII)(água + ác. ascórbico + LAM)TESTE (T)(água + ác. ascórbico + Fe 3+ /EDTA + LAM)TABELA IIILipoperoxidação em lipossomos de asolecitina induzida pelo sistema ácidoascórbico/Fe 3+ /EDTA.AMOSTRAVOLUME DAAMOSTRA(ml)TBA*(ml)água (BRANCO) 1 29.0 ml água + tripa c/ 1.0ml de 1 2LAM (CONTROLE I) (CI)7.0 ml água + tripa c/ 1.0ml de 1 2LAM + 2.0ml de AA 10mM(CONTROLE II) (CII)5.0 ml água + tripa c/ 1.0ml de 1 2LAM + 2.0ml de AA 10mM +2.0 ml de Fe 3+ /EDTA 1mM(TESTE) (T)A 535LIPOPEROXIDAÇÃO(%)*TBA é uma solução contendo 1% do agente micelizante TRITON X-100, HCl 0.25M e0.375% de ácido tiobarbitúrico.ANÁLISE DOS RESULTADOS E DISCUSSÃO01. Calcule a porcentagem de incorporação do AM em lipossomos de asolecitina. Use aexpressão fornecida.02. O que se pode dizer da permeabilidade dos lipossomos de asolecitina ao azul de metilenocom os seus dados de diálise?03. Calcule a porcentagem de lipoperoxidação de seus lipossomos nas diferentes condiçõesexperimentais (CI, CII e T) às quais foram submetidos. Considere que o malondialdeidocorresponde a apenas 5% da lipoperoxidação total.04. Discuta o efeito da lipoperoxidação sobre a permeação do azul de metileno através dasmembranas lipossomais.
BIBLIOGRAFIA01. Gomperts, D.D. (1977) - "The Plasma Membrane: Models for Structure and Function",Academic Press (London).02. Bangham, A.D.; Standish, M.M. e Watkins, J.C. (1965) - J. Mol. Biol. 13, 238.03. Bangham, A.D.; de Gier, J. e Greville, G.D. (1967) - Chem. Phys. Lipids 1, 225.04. Kagawa, Y. e Racker, E. (1966) - J. Biol. Chem. 241, 2467.05. Meneghini, R. (1987) - A toxicidade do oxigênio, Ciência Hoje, 5, 57.06. Halliwell, B. e Gutteridge, J.M.C. (1985) - Free Radicals in Biology & Medicine,Claredon Press, Oxford.07. Augusto, O. e Carmona-Ribeiro, A.M. (1989) - Introducing Model Membranes andLipoperoxidation, Biochemical Education 17(4), 209.
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