apostila de exercícios

QBQ 211 - 1996 - LABORATÓRIO IVLIPOSSOMOS e LIPOPEROXIDAÇÃO EM UM MODELO DEMEMBRANAOBJETIVOS1. Ilustrar o uso de lipossomos como modelo de membrana.2. Incorporar um marcador colorido (azul de metileno, AM) em lipossomos de asolecitina eseparar AM incorporado de AM extralipossomal por diálise.3. Observar um dos efeitos deletéricos da lipoperoxidação em membranas.FUNDAMENTOSLipossomosMembranas biológicas cumprem inúmeras funções: organizam moléculas emdiferentes compartimentos, limitam microambientes adequados para funções vitais econtrolam o transporte de várias substâncias. Visando uma simplificação estrutural e químicadas membranas naturais foram propostos diversos sistemas-modelo de membrana. Lipídeosextraídos de membranas podem ser utilizados para a preparação de diversos sistemasreconstituídos que permitem reproduzir, de forma selecionada e simplificada, alguns dosfenômenos que ocorrem em membranas naturais (1). Lipossomos são constituídos pormúltiplas bicamadas concêntricas de fosfolipídeos (2) e podem ser formados por simplesagitação de lipídeos em solução aquosa. Têm sido utilizados para se medir permeaçãopassiva de vários íons e moléculas (3). Como a maior parte do lipídeo está presente na formamultilamelar, o volume sequestrado por mol de lipídeo (eficiência de incorporação) érelativamente baixo em comparação com aquele de uma população constituída por vesículas.Neste experimento, vamos primeiramente incorporar o azul de metileno (AM) emlipossomos de asolecitina. Estimaremos a porcentagem de incorporação usando apropriedade do azul de metileno de absorver luz visível (660nm). Para isso eliminaremos aturbidez das partículas lipossomais micelizando-as com um detergente. Numa segunda etapa,como a asolecitina extraída de soja é especialmente rica em lipídeos com cadeias insaturadas(4), os lipossomos de asolecitina serão utilizados para se observar um dos efeitos deletériosda lipoperoxidação, o aumento de permeação do AM.LipoperoxidaçãoVárias evidências recentes sugerem que radicais livres (e/ou espécies ativas deoxigênio) têm um importante papel em vários processos fisiológicos e patológicos (5,6).Dentre esses pode-se citar a atividade microbicida das células do sistema imune, oenvelhecimento, a carcinogênese, a artrite reumatóide, as injúrias decorrentes de processosde isquemia e reperfusão, a catarata, os efeitos terapêuticos e colaterais de drogas, etc (6).Alguns dos efeitos deletérios de radicais livres parecem envolver lipoperoxidação dasmembranas biológicas. Essas são frequentemente ricas em lipídeos insaturados e estãobanhadas por fluídos que contêm metais de transição e oxigênio. Tais condições favorecem aperoxidação de lipídeos porque os íons metálicos ajudam a quebrar a regra da conservaçãodo spin que torna lenta as reações entre o oxigênio e moléculas orgânicas. A peroxidação delipídeos é um processo radicalar constituído por uma cadeia de reações com três estágios:Iniciação, Propagação e Terminação.Iniciação LH → L • + H • (1)