apostila de exercícios

As γ-globulinas são sintetizadas por uma classe especial de linfócitos e as outrasproteínas plasmáticas são produzidas pelo fígado. Desta forma, a análise do resultado daeletroforese pode indicar uma possível doença hepática. De fato, a eletroforese de proteínasdo soro constitui-se numa análise clínica importante.Para maiores esclarecimentos, inclusive fotos de fita onde foi corrida umaeletroforese e sua respectiva densitometria, consultar o “Biochemistry: a case-orientedapproach” (The C.V. Mosby Company) 5 a ed. autores: Montagomery, Conway e Spector(pag. 67).DOSAGEM DE PROTEÍNA POR COLORIMETRIAA fotometria é frequentemente usada para se determinar a concentração de umcomposto que absorve luz monocromática que está presente em solução. A lei de Lambert eBeer permite afirmar que:A = abcou seja, ao atravessar uma solução transparente, a fração de luz absorvida A é proporcional auma constante a (absortividade molar), à distância b atravessada pela luz na solução e àconcentração molar c. Modificando-se convenientemente a constante, a absorbância A podeser relacionada com a concentração em g/l.A equação derivada da lei de Lambert e Beer indica que a projeção de A versus c,mantida constante a distância b atravessada pela luz na solução, é uma reta que passa pelaorigem.Dispondo-se de tal projeção é possível, a partir de valores de A, determinargraficamente as concentrações correspondentes. Neste procedimento o gráfico A versus c échamado curva padrão.O Método do Biureto faz uso da propriedade de íons de Cu 2+ em meio alcalino deformar ligações com o nitrogênio das ligações peptídicas. Desta reação (reação de biureto)resulta uma coloração púrpura intensa. Este fato pode ser explorado para se determinarcolorimetricamente a quantidade de proteínas em solução.O Método do Biureto é mais apropriado para proteínas cujas soluções são incolores,ou seja para proteínas não conjugadas (simples). A cor desenvolvida numa reação de íons deCu 2+ em meio alcalino com estas proteínas deve-se unicamente às ligações peptídicas e a suaintensidade é proporcional a quantidade de tais ligações. Deve-se lembrar que a quantidadede ligações peptídicas é proporcional à massa da proteína em solução.Reforçando o que foi dito acima, pode-se afirmar que esta reação, específica paranitrogênios peptídicos, ocorre em igual extensão para uma dada massa proteica qualquer queseja a natureza da proteína em solução.PROCEDIMENTO(1) EletroforeseRetirar uma fita de acetato de celulose do banho de tampão (barbital-Tris pH 8,6).(Atenção: Não manusear a fita, usar pinça). Secá-la entre duas folhas de papel de filtro.Marcar com lápis o polo positivo e a partir dos pontos médios dos lados maiores demarcar aorigem com um traço muito leve. (Unir os pontos médios dos lados maiores).Retornar a fita para o banho. Mergulhar, retirar e secá-la novamente.