apostila de exercÃcios
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As γ-globulinas são sintetizadas por uma classe especial <strong>de</strong> linfócitos e as outrasproteínas plasmáticas são produzidas pelo fígado. Desta forma, a análise do resultado daeletroforese po<strong>de</strong> indicar uma possível doença hepática. De fato, a eletroforese <strong>de</strong> proteínasdo soro constitui-se numa análise clínica importante.Para maiores esclarecimentos, inclusive fotos <strong>de</strong> fita on<strong>de</strong> foi corrida umaeletroforese e sua respectiva <strong>de</strong>nsitometria, consultar o “Biochemistry: a case-orientedapproach” (The C.V. Mosby Company) 5 a ed. autores: Montagomery, Conway e Spector(pag. 67).DOSAGEM DE PROTEÍNA POR COLORIMETRIAA fotometria é frequentemente usada para se <strong>de</strong>terminar a concentração <strong>de</strong> umcomposto que absorve luz monocromática que está presente em solução. A lei <strong>de</strong> Lambert eBeer permite afirmar que:A = abcou seja, ao atravessar uma solução transparente, a fração <strong>de</strong> luz absorvida A é proporcional auma constante a (absortivida<strong>de</strong> molar), à distância b atravessada pela luz na solução e àconcentração molar c. Modificando-se convenientemente a constante, a absorbância A po<strong>de</strong>ser relacionada com a concentração em g/l.A equação <strong>de</strong>rivada da lei <strong>de</strong> Lambert e Beer indica que a projeção <strong>de</strong> A versus c,mantida constante a distância b atravessada pela luz na solução, é uma reta que passa pelaorigem.Dispondo-se <strong>de</strong> tal projeção é possível, a partir <strong>de</strong> valores <strong>de</strong> A, <strong>de</strong>terminargraficamente as concentrações correspon<strong>de</strong>ntes. Neste procedimento o gráfico A versus c échamado curva padrão.O Método do Biureto faz uso da proprieda<strong>de</strong> <strong>de</strong> íons <strong>de</strong> Cu 2+ em meio alcalino <strong>de</strong>formar ligações com o nitrogênio das ligações peptídicas. Desta reação (reação <strong>de</strong> biureto)resulta uma coloração púrpura intensa. Este fato po<strong>de</strong> ser explorado para se <strong>de</strong>terminarcolorimetricamente a quantida<strong>de</strong> <strong>de</strong> proteínas em solução.O Método do Biureto é mais apropriado para proteínas cujas soluções são incolores,ou seja para proteínas não conjugadas (simples). A cor <strong>de</strong>senvolvida numa reação <strong>de</strong> íons <strong>de</strong>Cu 2+ em meio alcalino com estas proteínas <strong>de</strong>ve-se unicamente às ligações peptídicas e a suaintensida<strong>de</strong> é proporcional a quantida<strong>de</strong> <strong>de</strong> tais ligações. Deve-se lembrar que a quantida<strong>de</strong><strong>de</strong> ligações peptídicas é proporcional à massa da proteína em solução.Reforçando o que foi dito acima, po<strong>de</strong>-se afirmar que esta reação, específica paranitrogênios peptídicos, ocorre em igual extensão para uma dada massa proteica qualquer queseja a natureza da proteína em solução.PROCEDIMENTO(1) EletroforeseRetirar uma fita <strong>de</strong> acetato <strong>de</strong> celulose do banho <strong>de</strong> tampão (barbital-Tris pH 8,6).(Atenção: Não manusear a fita, usar pinça). Secá-la entre duas folhas <strong>de</strong> papel <strong>de</strong> filtro.Marcar com lápis o polo positivo e a partir dos pontos médios dos lados maiores <strong>de</strong>marcar aorigem com um traço muito leve. (Unir os pontos médios dos lados maiores).Retornar a fita para o banho. Mergulhar, retirar e secá-la novamente.