apostila de exercícios

QBQ-211 - 1996 - LABORATÓRIO IIELETROFORESE EM PAPEL E DOSAGEM COLORIMÉTRICA DEPROTEÍNASIdentificação de proteínas através da eletroforese em acetato de celulose eeletroforese de proteínas do soro humano na mesma matriz em tampão barbital-Tris pH =8,6.Determinação da concentração de uma proteína em solução aquosa através dacolorimetria.OBJETIVOSExecução de uma eletroforese em fita de acetato de celulose.Identificação eletroforética de proteínas e identificação das classes de proteínas dosoro humano.Previsão da direção de migração proteica em base aos pIs e ao pH da solução.Montagem de um protocolo para construção de uma curva padrão para determinaçãoda concentração de proteínas pelo Método do Biureto.FUNDAMENTOS(I) ELETROFORESEA eletroforese abrange todas as operações nas quais as moléculas carregadas migramnum campo elétrico através de soluções.Dependendo da ausência ou presença de uma matriz rígida que sirva como suporte àsolução submetida a um campo elétrico, podem existir dois tipos de eletroforese:Eletroforese em solução - O seu uso é limitado. Consiste em se efetuar a operaçãoem tampão aquoso na ausência matriz-suporte. Esse sistema é vulnerável às pertubaçõesmecânicas (choques, correntes de convecção) o que leva à mistura das bandas em migração eà consequente perda da resolução. As modificações introduzidas para a estabilizaçãomecânica do sistema não se constituem em refinamentos que possam permitir larga aceitaçãodeste método.Eletroforese de zona - Os métodos eletroforéticos aqui englobados são maisutilizados. Consiste basicamente em efetuar a operação com a solução mantida em umamatriz rígida que a suporta (exemplos de matriz: papel, acetato de celulose, gel depoliacrilamida, gel de agarose (poligalactose) e outras). Aqui o termo zona quer indicar que aamostra submetida à eletroforese migra delimitando uma pequena região ou zona no suporte(papel, fita de acetato de celulose ou gel). As perturbações mecânicas, neste caso não afetamo sistema.Os dois tipos de eletroforese são governados pela expressão:constante • (voltagem aplicada) • (carga líquida)Mobilidade =(fricção molecular)