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QBQ-211BIOQUÍMICA: ESTRUTURA DE BIOMOLÉCULASe METABOLISMO1996LABORATÓRIOS: I, II, III, IV, V e VI
OBJETIVOSQBQ-211 - 1996 - LABORATÓRIO ITITULAÇÃO E CROMATOGRAFIA DE AMINOÁCIDOSIdentificação de um aminoácido através de cromatografia em papel e de titulação.01. Execução de cromatografia em papel e de titulação02. Identificação de um aminoácido através de seu Rf e de seus pKas03. Comparação da curva de titulação de um aminoácido com a de um ácido fracomonoprótico04. Verificação do pH de diversos fluidos biológicos mais comuns (de origem vegetal eanimal) e não biológicos, conforme mostrado na figura 2-15 do Rawn, Biochemistry, pg39 e na figura 4-9 do Lehninger, Principles of Biochemistry, pg 77.FUNDAMENTOSAs unidades constituintes das proteínas são os L α-aminoácidos. Como o próprionome indica, estes compostos em suas moléculas apresentam pelo menos um grupo amina(-NH 2 ) e um grupo carboxílico (-COOH). Em consequência deste fato, ao serem dissolvidosem água, os aminoácidos apresentam caráter anfotérico, ou seja comportam-se como ácido ecomo base. Os grupos amina e carboxila podem sofrer protonações e desprotonaçõesreversíveis, isto é comportam-se como eletrólitos fracos. Se os considerarmos em suasformas de ácidos conjugados: -NH + e -COOH, veremos que cada um deles apresentará um3valor de pKa. Assim, um aminoácido apresenta pelo menos dois valores de pKa edependendo da natureza ionizável ou não do grupo R ligado ao carbono alfa, pode ocorrer ounão um terceiro valor de pKa.Em pH 7,0 e no estado sólido, o amino grupo apresenta-se protonado (forma ácida) eo grupo carboxila desprotonado (forma básica).Neste experimento utilizaremos um processo de separação de aminoácidos baseadona polaridade dos grupos R de cadeia lateral e que determina a preferência do aminoácidopor uma fase líquida polar ou apolar, isto é sua partição entre duas fases. A água que hidrataa celulose, principal constituinte do papel, constitui a fase polar, neste caso a faseestacionária, enquanto que o solvente orgânico que migra pelo papel por capilaridadeconstitui a fase apolar, neste caso a fase móvel. Assim, quanto mais apolar for o grupo R,maior a mobilidde do aminoácido com a fase móvel e o seu Rf maior . O Rf é dado pela
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