400 700 800 α-Amylase EPS ver.2 α-amilase, método EPS, versão 2

400 700 800α-Amylase EPS ver.2α-amilase, método EPS, versão 2Informações para encomendaCOBAS INTEGRA 300 Testes Ref. 03183742 122 Indica em que analisador(es) pode ser utilizado oα-Amylase EPS ver.2 System-ID 07 6609 7 suporte de reagentes cobas c packCalibrator f.a.s. 12 × 3 mL Ref. 10759350 190Calibrator f.a.s. (para EUA) 12 × 3 mL Ref. 10759350 360System-ID 07 3718 6Precinorm U 20 × 5 mL Ref. 10171743 122System-ID 07 7997 0Precipath U 20 × 5 mL Ref. 10171778 122System-ID 07 7998 9Precinorm U plus 10 × 3 mL Ref. 12149435 122Precinorm U plus (para os EUA) 10 × 3 mL Ref. 12149435 160System-ID 07 7999 7Precipath U plus 10 × 3 mL Ref. 12149443 122Precipath U plus (para os EUA) 10 × 3 mL Ref. 12149443 160System-ID 07 8000 6COBAS INTEGRA 150 Testes Ref. 20764337 322Cleaner Cassette System-ID 07 6433 7COBASINTEGRA400/400 plusCOBASINTEGRA700COBASINTEGRA800Informações do sistemaCOBAS INTEGRA α-Amylase EPS ver.2 (AMYL2).Teste AMYL2, ID do teste 0-609 (soro, plasma).TesteAMYU2,IDdoteste0-509(urina).FunçãoTeste in vitro para a determinação quantitativa da actividadecatalítica da α-amilasa (EC 3.2.1.1; 1,4-α-D-glucano:glucanohidrolase) em soro, plasma e urina nos sistemasCOBAS INTEGRA.Sumário 1,2,3,4,5,6,7,8,9As α-amilases (1,4-α-D-glucanohidrolases, EC 3.2.1.1) catalisama degradação hidrolítica dos hidratos de carbono poliméricoscomo a amilose, a amilopectina e o glicogénio medianteclivagemdasligações1,4-α-glucosídicas. Nos polissacáridos e nosoligossacáridos, diversas ligações glicosídicas são hidrolisadassimultaneamente. Apesar de ser a mais pequena unidadehidrolisada, a maltotriose só é convertida muito lentamente emmaltose e glicose. Existem dois tipos distintos de α-amilases: tipopancreático (tipo P) e tipo salivar (tipo S). Enquanto a α-amilasede tipo P é atribuída quase exclusivamente ao pâncreas e, logo, éespecífica do órgão, a de tipo S tem origem em diversos locais.Além de se encontrar na saliva, existe também nas lágrimas,nosuor,noleitematerno,nolíquidoamniótico,nospulmões,nos testículos e no epitélio das trompas de falópio.Devido à raridade de sintomas clínicos específicos das doençaspancreáticas, as determinações da α-amilase têm uma importânciaconsiderável nos diagnósticos pancreáticos. Estas determinaçõessão utilizadas sobretudo no diagnóstico e monitorizaçãoterapêutica da pancreatite aguda. Além de ocorrer na pancreatiteaguda e na fase inflamatória da pancreatite crónica, também sepode observar uma hiperamilasemia em casos de insuficiênciarenal (como resultado de filtração glomerular reduzida), bemcomonostumoresdospulmõesoudosovários,inflamaçãopulmonar, doenças das glândulas salivares, cetoacidosediabética, traumatismo craniano, intervenções cirúrgicas emacroamilasemia. Para confirmar a especificidade pancreática,recomenda-se que seja também determinada uma outra enzimaespecífica do pâncreas: a lipase ou a α-amilase pancreática.Foram descritos diversos métodos para determinação da α-amilase.quedeterminamareduçãodaquantidadedesubstratoporviscometria, turbidimetria, nefelometria e amiloclastia ou atravésda formação de um produto de degradação, sacarogénico oucinético, através de reacções sucessivas catalisadas por enzimas. Ométodo cinético aqui descrito baseia-se na clivagem bem conhecidade 4,6-etilideno-(G 7 )-1,4-nitrofenil-(G 1 )-α,D-maltoheptaosido(Ethylidene Protected Substrate = EPS) pela α-amilase ehidrólise subsequente de todos os produtos de degradaçãoem p-nitrofenol com a ajuda da α-glucosidase (libertaçãode cromóforo 100%). Os resultados destes métodos estãocorrelacionados com os obtidos por HPLC.Princípio do teste 10,11Ensaio colorimétrico enzimático de acordo com IFCC.Oligossacáridos definidos, como o 4,6-etilideno-(G 7 )p-nitrofenil-(G 1 )-α,D-maltohepatósido (etilideno-G 7 PNP), sãoseparados pela acção catalítica da α-amilase. Os fragmentosG 2 PNP, G 3 PNP e G 4 PNP assim formados são completamentehidrolisados em p-nitrofenol e glucose pela α-glucosidase.Esquemadareacçãosimplificado:5-etilideno-G 7 PNP a +5H 2 Oα-amilase2 etilideno-G 5 +2G 2 PNP + 2 etilideno-G 4 +2G 3 PNP+etilideno-G 3 +G 4 PNP2G 2 PNP + 2 G 3 PNP + G 4 PNP + 14 H 2 Oa) PNP =^ p-nitrofenolb) G =^ Glicoseα-glucosidase5PNP+14G bA intensidade da cor do p-nitrofenol formado é directamenteproporcional à actividade da α-amilase. É determinadamedindo o aumento da absorvância a 409 nm.2007-05, V 4 PT 1 /4AMYL2

400 700 800EnzimasReagentes - soluções de trabalhoComponentesConcentraçõesR1 R2 = SR TestHEPES 52,4 52,4 49,1 mmol/LCloreto de sódio 87 68 mmol/LCloreto de cálcio 0,08 0,06 mmol/LCloreto de magnésio 12,6 9,8 mmol/Lα-glucosidase ≥66,8 ≥52,3 µkat/L(microbiana) (≥3,1 kU/L)Etilideno-G 7 -PNP 22 3,4 mmol/LpH (37°C) 7,00 7,00 7,00Ambos os reagentes contêm detergentes e estabilizantesnão reactivos.Avisos e precauçõesPreste atenção a todos os avisos e precauções incluídos naIntrodução do Capítulo 1 deste folheto informativo.Preparação dos reagentesPronto a ser utilizado.Armazenamento e estabilidadeValidade a 2-8°CConsulte o prazo de validade norótulo do suporte de reagentescobas c packSistemas COBAS INTEGRA 400/400 plusNo analisador a 10-15°C 12 semanasAnalisadores COBAS INTEGRA 700/800No analisador a 8°C 12 semanasColheita e preparação das amostras 9,12Para colheita e preparação das amostras, utilize apenastubos ou cuvetes de amostra apropriados.Apenas as amostras indicadas em seguida foram testadase consideradas aceitáveis.Soro.Plasma: Plasma tratado com heparina (Li, Na, NH + 4 )ou EDTA (K 2 ,K 3 ).Os valores de plasma tratado com EDTA são aproximadamente5-10%inferioresaosvaloresséricos.Ostiposdeamostrasindicadosforamtestadosusandotubosde colheita de amostras seleccionados e comercialmentedisponíveis à data do teste, i.e. nem todos os tubos dos diferentesfabricantes disponíveis no mercado foram testados. Os sistemasde colheita de amostras de diferentes fabricantes podem, porsua vez, conter materiais diferentes que, em alguns casos,podem afectar os resultados dos testes. Se utilizar amostrasem tubos primários (sistemas de colheita de amostras),consulte as instruções do fabricante dos tubos.Urina: Colha a urina sem aditivos. A α-amilase é instável emurina ácida. Analisar de imediato ou ajustar o pH para o intervaloalcalino (ligeiramente superior ao pH 7) antes de guardar. 13Estabilidade no soro: 13Estabilidade na urina: 147diasa15-25°C1mêsa2-8°C2diasa15-25°C10 dias a 2-8°CAs amostras que contêm precipitado têm de ser centrifugadasantes da realização do ensaio.Materiais fornecidosConsulte a secção “Reagentes - soluções de trabalho”.Materiais necessários (mas não fornecidos)COBAS INTEGRA Cleaner Cassette, Ref. 20764337, System-ID07 6433 7. Recomendam-se ciclos de lavagem suplementaressempre que determinadas combinações de testes sejamexecutadas em conjunto nos sistemas COBAS INTEGRA.Para mais informações sobre combinações de testes querequerem ciclos de lavagem suplementares, consulte oCapítulo 1, Introdução, Parte III.Realização do ensaioPara assegurar a correcta execução do ensaio, é importante cumpriras instruções fornecidas neste documento para o analisadorutilizado. Consulte o manual do operador apropriado para obterinformações mais específicas sobre o ensaio feito no analisador.Aplicação para soro, plasma e urinaAnalisadores COBAS INTEGRA 400/400 plus - Definição dotesteModo de medidaAbsorvânciaModo de cálculo da abs. CinéticoModo de reacçãoR1-S-SRSentido da reacção AumentoComprimento de onda A/B 409/659 nmPrimeiro/último cálc. 50/69UnidadeU/LParâmetros de pipetagemSoro, plasma e urina Diluente (H 2 O)R1 100 µLTamanho 4µL 4µLSR 20 µLVolume total 128 µLAnalisadores COBAS INTEGRA 700/800 - Definição do testeModo de medidaAbsorvânciaModo de cálculo da abs. CinéticoModo de reacçãoR1-S-SRSentido da reacção AumentoComprimento de onda A/B 409/659 nmPrimeiro/último cálc. 73/98UnidadeU/LParâmetros de pipetagemSoro, plasma e urina Diluente (H 2 O)R1 100 µLTamanho 4µL 4µLSR 20 µLVolume total 128 µLCalibraçãoCalibradorCalibrator f.a.s.Utilize água desionizada comocalibrador zero.Modo de calibração Regressão linearRepetição da calibração Duplicado recomendadoIntervalo de calibração Cada lote e conforme necessário,segundo os procedimentos decontrolo de qualidadeRastreabilidade: Este método foi padronizado manualmentecontra reagente Roche (de acordo com IFCC).Controlo da qualidadeControlo da qualidade Precinorm U ou Precinorm U plusSoro, plasmaPrecipath U ou Precipath U plusControlo de qualidade paraurinaIntervalo de controloSequência de controloControlo após calibraçãoPara o controlo da qualidade emrotina, recomendam-se controlosquantitativos de urina.24 horas (recomendado)Definida pelo utilizadorRecomendadoAMYL22 / 4 2007-05, V 4 PT