Hemocentro do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de ...

Hemocentro do Hospital das Clínicas da Faculdade deMedicina de Botucatu – UNESP .Elenice Deffunewww.hemocentro.fmb.unesp.br

ÁREA DE ABRANGÊNCIA• Atendimento Direto: 31 municípios;• Referência para HIV: CD4/8: 48 municípios• Referência de Carga Viral, NAT e Genotipagem: 42 municípios;• 1641 leitos hospitalares 3.000.000 habitantes

Rotina de Doação de Sangue:•Imunohematologia•Hemostasia e coagulação•Sorologia•Bioquímica Eritrocitária•Hematologia•Citometria de Fluxo•NATLaboratório de Pesquisa:•Biologia Celular – Produção de Anticorpos Monoclonais Murinos• Engenharia Celular•Biologia Molecular•Controle de Qualidade de Serviços e ReagentesAnfiteatro e Sala de Conferência

ÁREAS DE PESQUISAHematologiaMielodisplasia (SMD) – Profa.Dra Ligia Niero-Melo;•Transplante de Medula Óssea- Pesquisador Responsável :Prof. Dr. Paulo Eduardo de Abreu MachadoTransfusão Sanguínea - Pesquisador Responsável: Profª DrªElenice Deffune•Papel dos Grupos Sanguíneos na Saúde e na doença;•Imunohematologia;• Clínica Transfusional;•Produção de Reagentes para transfusão sanguínea

Laboratório de Engenharia Celular• AcMm dirigido contra antígenos eritrocitários humanos• AcMm dirigido contra fator de coagulação• AcMm dirigido contra antígenos eritrocitários caninos• AcMm dirigido contra antígenos eritrocitários suínos• Ciclo Celular nas Células Tumorais• Cultura de Condrócitos Humanos• Cultura de Osteoblastos Humanos• Biocurativo• Cultura de Stem cell MurinaPesquisador Responsável: Profª DrªElenice Deffune; Dra.Rosana Rossi Ferreira

•Genoma câncer•Genoma vírus HIV e HCV•RT-PCR•SSP-PCR•SSO-PCR•VNTRs•HLA por PCRBiologia Molecular• Monitoramento de “Pega” do Transplante de Medula Óssea• Genotipagem de Plaquetas (HPA)por Biologia Molecularcom foco na transfusão sanguíneaPesquisador Responsável: Profª Drª Maria Inês Pardini

Bioética e Biossegurança• Treinamento•Cursos•Resíduos InfectantesPesquisador responsável: Profª Drª Elenice Deffune,Profa. Dra. Maria Inês de Moura Campos Pardini eMS. Rita de Cássia Alvarado

Laboratório de Engenharia Celular -Implementado e dirigido pelaProfª Drª Elenice Deffune e-mail–ed12@fmb.unesp.brdesde 1992Entrada do Laboratório de EngenhariaCelular

Detalhes doLaboratório

Microscópio InvertidoCARLZEISS-JENApara culturaBioreator-CELLIGEN PLUSBATH/CONTINUOUSCultura de CélulasNew Brunswich Scientific. N. J., USA.PHAST SYSTEM – Sistema de EletroforeseVertical PHARMACIA

Capela de Fluxo Laminar- 2 Unidades Classe II B2- 2 Unidades Classe II A

Coletor de fração PHARMACIABIOTECH

Incubadora de CO 2 /O 2FORMA SCIENTIFICEquipamento de BiossegurançaChuveiro lava olhos

Container de NitrogênioLíquido / Banco de CélulasEquipamentos: Citômetro de Fluxo BD –FACSCALIBURCom 4 canais de fluorescênciaProfile II - Coulter

LABORATÓRIO DE BIOLOGIA MOLECULARPesquisadora Profª Drª Maria InêsPardiniSequenciador de DNA -ABI PRISM 377

Sequências de DNA eQuantificação DNA

NAT

Sala de esperadaadministração“Sala dosDoutores”Sala de espera dodoador de sangue

PRODUÇÃO NACIONAL ANTICORPOSMONOCLONAIS PARA USOHEMOTERÁPICO• Constituição Brasileira• Impropriedade da utilização de anticorpospoliclonais advindos da sensibilização demulheres durante a gravidez - ÉTICA• Uso de biotério de animais de pequeno porte• Reagentes Biosseguros – Origembiotecnológica• Desenvolvimento tecnológico nacional

•O seu substitudo são os anticorpos monoclonaismurinos (AcMm).Atualmente inexiste qualquerempresa nacional que desenvolve ou produzestes anticorpos em escala comercial.•A etapa de transferência de tecnologia já foirealizadono LaboratóriodeDesenvolvimentoBiotecnológico do Hemocentro de Botucatu, comfinanciamento específico da FINEP, bem como odesenvolvimento de produção em larga escala eseu controle de qualidade (Processos números:0532/96 e 0527/96 respectivamente).

1- tipo de reagentes* data AcMm frascos val. TReagentes para anti-A 1992 da Classe IgM - aglutinantes 10mL 24 m. 4ºC ou -20ºCTS direta Anti-B 1993 10mL 24 m. 4ºC ou -20ºCAnti-AB 1993 10mL 24 m. 4ºC ou -20ºC2- hemácias padrão* * hemácias fenotipadas em manguitos 30 d 4ºCReagentes para Hemácia A1 mensal 33 sistemas 1mLtipagem sangüíneaHemácia A2reversaHemácia B3 - anti-M 1994 AcMm frascos val. TFenotipagem anti-N 1995 da Classe IgM - aglutinantes 10mL 24 m. 4ºC ou -20ºCeritrocitária anti-H 1999 10mL 24 m. 4ºC ou -20ºCanti-A1 2000 10mL 24 m. 4ºC ou -20ºC4- BFI desde 1992 acelerador de reações imuno- frascos val. TTampão à Baixa Força Iônica hematológicas 10mL 24 m. -20ºC5 -Solução de papaína para PAP desde 1994 enzima proteolítica frascos val. Tuso em imunohematologia 1mL 24 m. -20ºC6 - frascos val. TAntiglogulina humana AGH 2001 anti-IgG 10mL 24m. 4ºCanti-IgM 10mL 24m. 4ºCanti-C3d 10mL 24m. 4ºCAGH polivalente 10mL 24m. 4ºC

1- tipo de reagentes*Reagentes paraanti-Atipagem sangüínea direta Anti-BAnti-AB2- hemácias padrão*Reagentes paraHemácia A1tipagem sangüínea reversa Hemácia A2Hemácia B3 - anti-MReagentes para fenotipagem anti-Neritrocitáriaanti-Hanti-A14- BFITampão à Baixa Força Iônica5 -Solução de papaína para PAPuso em imunohematologia6 -Antiglogulina humanaAGHFAMÍLIA 9FAMÍLIA 14FAMÍLIA 9FAMÍLIA 14FAMÍLIA 9FAMÍLIA 14

PRODUÇÃO DE REAGENTES PARAUSO HEMOTERÁPICOETAPA IDesenvolvimento e Patenteamento dos produtosdesenvolvidos em larga escala.Definição do antígeno/anticorpo a ser produzido• Antígeno celular• Proteína purificadaDefinição da futura aplicaçãoIgM – protocolo curtoIgG – protocolo longoInício da Imunização

ETAPA IPRODUÇÃO DE REAGENTES PARAUSO HEMOTERÁPICOPreparo de meios de culturaFusão Celular (60 a 120 dias depois)ScreeningClonagemDeterminação de classe e sub-classe:OuchterlonyCaracterização ImunoquímicaValidação paralela com reagentes comerciaisAnálise de vida de prateleiraCitometria de Fluxo24 mesesdepois ...

TIPAGEMABODOAÇÕES*N3 milhõesAcMmBTU(R$0,106)318.000Reag.(R$0,381)1.143.000Reag.MS(R$2,88)*8.640.000TRANSF. *2,5 milhões265.000952.5007.200.000RETIP.BOLSA *2,5 milhões265.000952.5007.200.000TIP.RECEP. *TOTAL1,5 milhão159.0001.007.000571.5003.619.5004.320.00027.360.000* Fonte: GGSTO/Reunião deespecialistas - FIOCRUZ

CAPACIDADE INSTALADA1 Pesquisador;1 Técnico de laboratório;2 Alunos de PG;InfraestruturaEnvasamento manual50 frascos/mêsPROBLEMAS:Aumento da demanda;Falta de fixação pela Universidade;Dificuldades ADM na aquisição de melhores insumos;Falta de compreensão científica das Agências financiadorasDificuldades de Registros/patentes

AUMENTO DE ESCALA - PROPOSTA ILaboratório de desenvolvimento Biotecnológico;Convênio ANVISA ou HEMOBRAS ou SCT -Hemocentro de Botucatu-Projeto Piloto;Criação de vagas de pesquisador para implementação do projeto paraatender a áreas de prioridade;Produção de Anti-A, Anti-B e Anti-AB // Hem. A1, A2 e B – Btu;Controle de Qualidade externo: INCQS? HEMORIO? Hemocentro de BSB?Campinas?;Definição técnica: Grandes distâncias geográficas, defasagem técnica;Dificuldade de acesso a reagentes de qualidade (Físicas/econômicas/Gerenciais);Produzir os insumos para região pré-definida linkando a entrega dos Kitscom treinamento em imunohematologia para ATs – interesse estratégico;

Kit AT (PARCIAL) TIPAGEM ABO - DIRETAApresentação Diamed (maio/03)Qtd produzir Pil 1(em fr)Total 3000 testes/mêsTotal para 18 mesesLamb (mês) Lamb (18 meses)Anti A fr 1X10mL 12,70 300 3.810,00 68.580,00 1.088,57 19.594,29Anti B fr 1X10mL 12,70 300 3.810,00 68.580,00 1.088,57 19.594,29Anti AB fr 1X10mL 12,70 300 3.810,00 68.580,00 1.088,57 19.594,29BFI 1x500mL/10mL 900,00 300 270.000,00 4.860.000,00 3.000,00 54.000,00Papaina 1x10mL 16,00 300 4.800,00 86.400,00 1.371,43 24.685,71RH 258.908,76Equip 442.470,00TOTAL 286.230,00 5.152.140,00 7.637,14 838.847,33

Kit AT (PARCIAL) TIPAGEM ABO – DIRETA E REVERSAApresentação Diamed (maio/03)Qtd produzir Pil 1(em fr)Total 3000 testes/mêsTotal para 18 mesesLamb (mês) Lamb (mês)Anti A fr 1X10mL 12,70 300 3.810,00 68.580,00 1.088,57 19.594,29Anti B fr 1X10mL 12,70 300 3.810,00 68.580,00 1.088,57 19.594,29Anti AB fr 1X10mL 12,70 300 3.810,00 68.580,00 1.088,57 19.594,29Hem A1 fr 1X10mL 43,00 300 12.900,00 232.200,00 3.685,71 66.342,86Hem A2 -Hem B -Anti - D fr 1X10mL 22,70 300 6.810,00 122.580,00 6.810,00 122.580,00Control Rh fr 1X10mL 22,70 300 6.810,00 122.580,00 6.810,00 122.580,00BFI 1x500mL/10mL 900,00 300 270.000,00 4.860.000,00 3.000,00 54.000,00Papaina 1x10mL 16,00 300 4.800,00 86.400,00 1.371,43 24.685,71RH 258.908,76Equip 442.470,00TOTAL 312.750,00 5.629.500,00 24.942,86 1.150.350,19

Kit AT TIPAGEM ABO – DIRETA, REVERSA, Rh D, PAI, PCE TCDApresentação Diamed (maio/03)Qtd produzir Pil 1(em fr)Total 3000 testes/mêsTotal para 18 mesesLamb (mês) Lamb (18meses)Anti A fr 1X10mL 12,70 300 3.810,00 68.580,00 1.088,57 19.594,29Anti B fr 1X10mL 12,70 300 3.810,00 68.580,00 1.088,57 19.594,29Anti AB fr 1X10mL 12,70 300 3.810,00 68.580,00 1.088,57 19.594,29Hem A1 fr 1X10mL 43,00 300 12.900,00 232.200,00 3.685,71 66.342,86Hem A2 -Hem B -Anti - D fr 1X10mL 22,70 300 6.810,00 122.580,00 6.810,00 122.580,00Control Rh fr 1X10mL 22,70 300 6.810,00 122.580,00 6.810,00 122.580,00AGHP fr 1X10mL 43,70 300 13.110,00 235.980,00 3.745,71 67.422,86AGHM fr 1X10mL 43,70 300 13.110,00 235.980,00 3.745,71 67.422,86Minipainel 3x10mL 50,00 300 15.000,00 270.000,00 4.285,71 77.142,86BFI 1x500mL/10mL 900,00 300 270.000,00 4.860.000,00 3.000,00 54.000,00Papaina 1x10mL 16,00 300 4.800,00 86.400,00 1.371,43 24.685,71RH 258.908,76Equip 442.470,00TOTAL 353.970,00 6.371.460,00 36.720,00 1.362.338,76

AUMENTO DE ESCALA - PROPOSTA I ILaboratório de desenvolvimento Biotecnológico;Diretamente ligada a ANVISA ou HEMOBRAS;Criação de vagas de pesquisador para implementação do projetopara atender a áreas de prioridade;Produção em larga escala, envasamento e distribuição =FIOCRUZ OU HEMOBRAS ;CQE – HEMORIO, Campinas, INCQS ...Investimento em Btu: continuar a obtenção de novos AcMm,atender a demanda definida pela ANVISA/MS

AUMENTO DE ESCALA - PROPOSTA IIILaboratório de desenvolvimento Biotecnológico;Diretamente ligada a ANVISA ou HEMOBRAS;Criação de vagas de pesquisador para implementação do projeto paraatender a áreas de prioridade;Produção em larga escala, envasamento e distribuição = Parceria comPrivado;CQE – HEMORIO, Campinas, INCQS ...Investimento em Btu: continuar a obtenção de novos AcMm, atender ademanda definida pela ANVISA/MS

PRODUÇÃO DE REAGENTES PARAUSO HEMOTERÁPICOVIABILIZAÇÃO ECONÔMICA DA ETAPA 11. Capital Intelectual treinado e fixado:BioteristaTécnico de LaboratórioPesquisador

PRODUÇÃO DE REAGENTES PARA USO HEMOTERÁPICOVIABILIZAÇÃO ECONÔMICA DA ETAPA 12. Insumos:• Desenvolvimento de 1 Clone de AcMm dirigidocontra antígenos comuns expressos nas hemáciashumanas = R$22.500,00• Desenvolvimento de 1 Clone de AcMm dirigidocontra antígenos menos frequentes expressos nashemácias humanas = R$45.000,00• Desenvolvimento de 1 Clone de AcMm dirigidocontra antígenos expressos em leucócitos, incluindo aetapa de validação, para uso em Citometria de fluxo oulinfocitotoxicidade = R$45.000,00

PRODUÇÃO DE REAGENTES PARAUSO HEMOTERÁPICO3. Equipamentos• Investimentos de $160.000,00• Automação do banco de células deN 2• Micromanipulador;• Objetivas para microscópio invertido• Centrífuga de bancada• Incubadora CO2• Captador de imagens• Eletroporador• Freezer -80 o C• Sistema de purificação

PRODUÇÃO DE REAGENTES PARAUSO HEMOTERÁPICOVIABILIZAÇÃO ECONÔMICA DA ETAPA 1Comercial SP = 3,59LambANVISA/MS = 27,17Lamb