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Cirilo, PDRMATERIAL E MÉTODOS36(dihydrouridine synthase 4-like), BCAP29 (B cell receptor-associated protein 29) e SLC26A4(solute carrier family 26, member 4). Procedimentos de hibridação em duas cores (dualcolor) com a sonda controle (α satélite p7t1α7) e a sonda teste foram realizados para cadacaso. Uma média de 100 núcleos interfásicos intactos e não sobrepostos, contracoradoscom 4,6-diamino-2-phenylindole (DAPI), foram analisados para determinar o número desinais da sonda e a frequência de perdas envolvendo a região 7q22.3-q31.1. As alteraçõesno número de cópias detectadas foram consideradas significativas quando o valorobservado para cada caso era superior a média mais dois desvios-padrão das amostras dotecido normal usado como controle, calculados para cada sonda. Deleções hemizigotasforam consideradas significativas quando detectadas em mais de 30% das células.3.6 Microarrays de Expressão - Marcação, hibridação e análiseO perfil de expressão gênica em larga escala foi obtido em 51 amostras de LUutilizando-se a plataforma de microarray Whole Human Genome 4x44K (AgilentTechnologies), composta por 43.376 sequências biológicas e 32 sondas Spike-in (controlespositivos) (http://www.genomics.agilent.com). Os procedimentos de marcação dasamostras, hibridação e detecção seguiram o protocolo Two-color microarray-based geneexpression analysis (Agilent Technologies). As amostras de LU foram hibridadas contraRNA referência universal composto por 15 linhagens celulares (Gomes et al., 2005;Boccardo, et al. 2010), assim como, as amostras de miométrios normais adjacentessegundo a fase do ciclo (pool de amostras). Para o protocolo de marcação com “duascores,” foi utilizado o kit o Quick Amp Labeling (Agilent Technologies). A reação é iniciadacom uma pré-síntese de cDNA, no qual foram utilizados 800ng de RNA (volume máximo de8,3µL), 2µL da diluição do Spike A para Cy3 (teste) ou Spike B para Cy5 (referência) e 1,2µLde T7 Promoter Primer. Essa reação foi incubada a 65°C por 10min e colocada no gelo por5min. A síntese de cDNA consistiu na adição de 4µL de 5X First Strand Buffer, 2µL de DTT