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Cirilo, PDRMATERIAL E MÉTODOS33Também foram extraídas as amostras de RNA do miométrio adjacente desses casos(n=34). O protocolo estabelecido para extração de RNA foi o RNeasy Mini Kit (Qiagen). Aqualidade e a pureza do RNA foram avaliadas utilizando-se espectrofotômetro (NanoDropND-1000 Spectrophotometer v.3.0.1, Labtrade) e o Bioanalyzer (RNA 6000 NanoLabChipkit 2100 Agilent Technologies), respectivamente.3.4 CGH array – Marcação, hibridação e análiseForam utilizadas as lâminas Agilent Human 4x44K CGH Microarrays (AgilentTechnologies). Esta é uma plataforma de oligonucleotídeos de 60pb com espaçamentomédio entre as sondas de aproximadamente 43Kb. A resolução desta plataforma é deaproximadamente 76Kb, que é o resultado da razão entre o número de pares de base dogenoma humano (~ 3.260Mb) sobre o espaçamento das sondas na plataforma (43Kb).Possuem aproximadamente 43.000 sondas que mapeiam genes bem caracterizados,particularmente aqueles envolvidos em câncer, incluindo sequências codificadoras e nãocodificadoras(http://www.chem.agilent.com). DNA Genômico Universal (Promega) foiutilizado como amostra referência, que é constituído por amostras genômicasprovenientes de vários doadores.Amostras tumorais com moléculas de DNA de alto peso molecular foramsubmetidas à marcação pelo Kit Bioprime CGH Labeling Module (Invitrogen), de acordocom especificações do fabricante. Para a realização dos experimentos foram utilizados500ng de DNA os quais foram submetidos a uma etapa de digestão enzimática randômicaem reação contendo água ultra-pura estéril; 2,6µL de tampão 10x; 0,2µL de BSA; 0,5µL decada enzima (AluI e RsaI) totalizando 26µL. As reações foram incubadas a 37°C por 2horas, 65°C por 20min e mantidas em gelo durante o procedimento. Foram adicionados nareação 20µL de Random Primer (Invitrogen), e então, as amostras foram desnaturadas a95°C por 5min e transferidas para o gelo. As amostras de referência e teste foram