Karen Tereza Altieri - Faculdade de Odontologia - Unesp
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A presença <strong>de</strong> leve turvação no meio <strong>de</strong> cultura indica o crescimento <strong>de</strong><br />
microrganismos.<br />
Avaliação da viabilida<strong>de</strong> celular - Ensaio <strong>de</strong> XTT<br />
Os biofilmes dos corpos-<strong>de</strong>-prova foram submetidos ao ensaio <strong>de</strong><br />
XTT, que avaliou a presença <strong>de</strong> microrganismos não eliminados por meio da<br />
ativida<strong>de</strong> metabólica <strong>de</strong> células <strong>de</strong> MRSA 54 . O teste com XTT baseia-se na<br />
habilida<strong>de</strong> das enzimas <strong>de</strong>sidrogenases mitocondriais <strong>de</strong> microrganismos<br />
metabolicamente ativos converterem o sal tetrazólio hidrossolúvel XTT (cor<br />
amarela) em um produto solúvel em água - formazana (cor laranja), o que é<br />
mensurado em espectrofotômetro 106 .<br />
Todos os corpos-<strong>de</strong>-prova, tanto os do CG quanto os<br />
<strong>de</strong>sinfetados, foram lavados cuidadosamente duas vezes com 2 mL <strong>de</strong> solução<br />
PBS estéril 54 e transferidos para outra placa com 24 orifícios contendo 2 mL <strong>de</strong><br />
solução <strong>de</strong> XTT, composta por PBS a 200 mM <strong>de</strong> glicose (158 µL), solução <strong>de</strong><br />
XTT (40 µL) e menadiona (2 µL) 106 . As placas foram incubadas a 37 °C por 3 h, e<br />
após esse período, a solução presente em cada orifício foi homogeneizada com<br />
uma pipeta. Uma alíquota <strong>de</strong> 1 mL <strong>de</strong>sta solução foi transferida para um<br />
eppendorf e centrifugada a 5000 rpm durante 2 min, para que a células fossem<br />
precipitadas. A seguir, 200 µL do produto da <strong>de</strong>gradação do XTT (sobrenadante)<br />
foram transferidos para o orifício <strong>de</strong> uma placa <strong>de</strong> leitura (Elisa). O resultado<br />
<strong>de</strong>sta reação química foi medido utilizando-se o espectrofotômetro com filtro<br />
492 nm 106 (Figura 16). O experimento foi realizado em três ocasiões distintas,<br />
em triplicata.