Karen Tereza Altieri - Faculdade de Odontologia - Unesp

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A presença de leve turvação no meio de cultura indica o crescimento de
microrganismos.
Avaliação da viabilidade celular - Ensaio de XTT
Os biofilmes dos corpos-de-prova foram submetidos ao ensaio de
XTT, que avaliou a presença de microrganismos não eliminados por meio da
atividade metabólica de células de MRSA 54 . O teste com XTT baseia-se na
habilidade das enzimas desidrogenases mitocondriais de microrganismos
metabolicamente ativos converterem o sal tetrazólio hidrossolúvel XTT (cor
amarela) em um produto solúvel em água - formazana (cor laranja), o que é
mensurado em espectrofotômetro 106 .
Todos os corpos-de-prova, tanto os do CG quanto os
desinfetados, foram lavados cuidadosamente duas vezes com 2 mL de solução
PBS estéril 54 e transferidos para outra placa com 24 orifícios contendo 2 mL de
solução de XTT, composta por PBS a 200 mM de glicose (158 µL), solução de
XTT (40 µL) e menadiona (2 µL) 106 . As placas foram incubadas a 37 °C por 3 h, e
após esse período, a solução presente em cada orifício foi homogeneizada com
uma pipeta. Uma alíquota de 1 mL desta solução foi transferida para um
eppendorf e centrifugada a 5000 rpm durante 2 min, para que a células fossem
precipitadas. A seguir, 200 µL do produto da degradação do XTT (sobrenadante)
foram transferidos para o orifício de uma placa de leitura (Elisa). O resultado
desta reação química foi medido utilizando-se o espectrofotômetro com filtro
492 nm 106 (Figura 16). O experimento foi realizado em três ocasiões distintas,
em triplicata.