Karen Tereza Altieri - Faculdade de Odontologia - Unesp
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<strong>de</strong> células foram gradativamente adicionadas a um tubo <strong>de</strong> ensaio contendo 10<br />
mL <strong>de</strong> TSB até ser obtido um valor no intervalo <strong>de</strong> 0.06 – 0.10 no display do<br />
turbidímetro, correspon<strong>de</strong>ndo ao grau <strong>de</strong> turvação 0.5 da escala <strong>de</strong> McFarland.<br />
Para o preparo da suspensão <strong>de</strong> contaminação dos corpos-<strong>de</strong>prova,<br />
uma alíquota <strong>de</strong> 1,5 mL do inóculo em TSB foi transferida para um<br />
epperdorf estéril, o qual foi centrifugado a 5000 rpm por 5 min e as células<br />
sedimentadas foram lavadas duas vezes com solução PBS estéril por meio <strong>de</strong><br />
agitação e centrifugação. As células lavadas foram ressuspendidas em 20 mL <strong>de</strong><br />
TSB estéril e a <strong>de</strong>nsida<strong>de</strong> óptica da suspensão foi <strong>de</strong>terminada e padronizada<br />
em uma concentração aproximada <strong>de</strong> 10 7<br />
ufc/mL 38,68,74,105 , utilizando-se<br />
espectrofotômetro com comprimento <strong>de</strong> onda <strong>de</strong> 600 nm.<br />
4.4.4 Procedimentos <strong>de</strong> formação <strong>de</strong> biofilme nas próteses e corpos-<strong>de</strong>prova<br />
Para a formação <strong>de</strong> biofilme, as próteses totais foram imersas em<br />
béqueres contendo 200 mL <strong>de</strong> TSB estéril e contaminadas com uma alíquota <strong>de</strong><br />
100 µL do microrganismo na concentração anteriormente obtida. Os béqueres<br />
foram incubados sob agitação a 80 rpm a 37 °C por 24 h (Figura 14) 38,105 .