Karen Tereza Altieri - Faculdade de Odontologia - Unesp

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do experimento. A solução de menadiona foi preparada pela mistura de 0,007g
de pó de menadiona em 1 mL de acetona a 0,4 mM. A solução resultante foi
vertida em tubo eppendorf e submetida a um procedimento de diluição seriada
até 10 -2 . Esta solução foi preparada imediatamente antes de cada experimento e
foi utilizada a diluição seriada de 10 -2 .
Preparo do inóculo de MRSA
O microrganismo selecionado para a realização deste
experimento (Staphylococcus aureus resintente à meticilina – MRSA) foi obtido
junto à American Type Culture Colection (ATCC 33591) e ficou congelado a
- 70 °C em TSB e estocado até o momento de sua utilização. Previamente à
contaminação das próteses totais e dos corpos-de-prova, o microrganismo foi
semeado em placas de Petri sobre o meio de cultura Manitol Salt Agar e
incubado a 37 °C por 48 h. A seguir, uma alçada do microrganismo foi
transferida para um tubo de ensaio contendo 10 mL meio de cultura TSB e
incubada a 37 °C durante a noite 38,68,105 .
Para o preparo da suspensão de contaminação das próteses
totais, uma alíquota de 1,5 mL do inóculo em TSB foi transferida para um
epperdorf estéril, o qual foi centrifugado a 5000 rpm por 5 min. O meio de cultura
sobrenadante foi descartado e as células (sedimentado) ressuspendidas em 5mL
de solução salina estéril. Em seguida, o eppendorf foi agitado novamente por
30s, os mesmos passos de centrigugação foram repetidos duas vezes e as
células foram, então, ressuspendidas em 1,0 mL solução salina estéril. Um
turbidímetro foi utilizado para a obtenção de inóculo na concentração
aproximada de 10 7 ufc/mL 38,68,74,105 . Para isso, alíquotas de 10 µL da suspensão