vi seminário sobre pragas, doenças e plantas daninhas do ... - IAC

1.INTRODUÇÃO
O feijão comum (Phaseolus vulgaris L.) é amplamente cultivado em todo o mundo, sendo que
o Brasil ocupa a posição de maior produtor e consumidor desta leguminosa, entretanto sua
produtividade média é baixa, equivalente a 600 kg/ha. Uma das maneiras de se obter um aumento na
produtividade é fazer uso de cultivares melhorados pelo aumento de ganhos de seleção. Para tanto,
é fundamental realizar a exploração dos recursos genéticos como fonte de variabilidade. As utilizações
de marcadores moleculares fornecem a melhor estimativa de diversidade genética. Os microssatélites
(“SSRs”) destacam-se pelo grau de polimorfismo, herança co-dominante, e seu desenvolvimento e
utilização são fundamentais para estudos de caracterização e exploração genética do feijoeiro. Há
até o momento poucos microssatélites disponíveis na literatura para feijão comum (Yu et al., 1999;
Buso et al., 2005; Gaitán-Solís et al., 2002) o que torna o uso desta ferramenta limitado para fins de
análises de diversidade, mapeamento de genes, ou mesmo seleção assistida por marcadores.
Este trabalho tem por objetivo o desenvolvimento de microssatélites em feijão comum, a
partir de uma biblioteca genômica enriquecida desenvolvida para a variedade CAL-143 durante o
projeto de pós-doutorado (FAPESP proc. 02/00752-8). A obtenção de microssatélites adicionais em
feijão representa um avanço diretamente aplicável em um projeto adicional de mapeamento de
marcadores microssatélites ligados a genes associados à resistência à antracnose e mancha angular
(FAPESP proc. 05/53819-0) podendo tornar o mapa mais saturado e, representam a continuação
dos esforços nesta área, junto ao programa de melhoramento do feijoeiro do IAC, iniciados em 2002.
2. MATERIAL E MÉTODOS
A variedade CAL-143 foi escolhida para construção de uma biblioteca genômica enriquecida
com microssatélites, por ser um dos parentais da população de mapeamento (atualmente em F9)
IAC-UNA X CAL143 desenvolvida no Centro de Pesquisas e Desenvolvimento em Recursos Genéticos
Vegetais (CPDRGV-IAC). Esta biblioteca enriquecida foi desenvolvida em um projeto anterior FAPESP
proc. 02/00752-8. O material possui sementes rajadas de vermelho (fundo bege) tipo Calima e origem
Andina. É suscetível à Antracnose e resistente à mancha angular (algumas raças). A partir desta
biblioteca enriquecida marcadores do tipo microssatélites estão sendo desenvolvidos. Para tanto,
primeiramente realizou-se a amplificação dos insertos clonados, e os produtos de amplificação foram
analisados em gel de agarose 1% (TAE 1X), corados com brometo de etídeo. O gel foi analisado
quanto à presença de fragmentos clonados. Apenas os clones que apresentaram um único fragmento
tiveram seu DNA extraído, de acordo com protocolos disponíveis no projeto AEG (http://
aeg.lbi.ic.unicamp.br). Após a extração realizaram-se reações de seqüênciamento no termociclador
modelo PTC-100. A purificação do produto da reação de seqüenciamento para retirada dos resíduos
não incorporados também seguiu os protocolos AEG. O seqüenciador automático ABI Prism 377
disponível no CPDRGV do Instituto Agronômico (IAC, Fazenda Santa Elisa), foi utilizado para realizar
o seqüenciamento. O programa Microsat, cedido pelo Dr. Ange-Marie Risterucci, do CIRAD
(Montepellier/França), será utilizado inicialmente para analisar as seqüências e encontrar os
adaptadores e os possíveis sítios de enzima RsaÉ. Uma vez editadas, as seqüências serão alinhadas
para remoção de redundâncias através do programa Stargene (DNASTAR, Inc).
Documentos, IAC, Campinas, 79, 2007
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