Reagente LDH-Flex - Medcorp

REF DF53A
Dimension ® clinical chemistry system
Flex ® reagent cartridge
LDH
Cartucho de reagente Flex® Desidrogenase láctica
Fim a que se destina: O método LDH utilizado no sistema de
química clínica Dimension® é um teste para diagnóstico in vitro
destinado à determinação quantitativa da actividade de desidrogenase
láctica no soro e plasma.
Resumo: O método da desidrogenase láctica é uma modificação do
procedimento enzimático lactato para piruvato referido pela primeira
vez por Wacker1 e posteriormente modificado por Gay et al.2
Princípios do procedimento: O método LDH mede a oxidação do L-
lactato para piruvato, com a redução simultânea de nicotinamida
adenina dinucleótida (NAD). A variação da absorvância a 340 nm
causada pelo aparecimento de NAD reduzida (NADH) é directamente
proporcional à actividade de LDH, uma vez que os outros reagentes
estão presentes em quantidades não limitantes, sendo medida
utilizando uma técnica de taxa bicromática (340, 383 nm).
LDH
L-lactato + NAD + ——————>Piruvato + NADH + H +
pH 8.55
Reagentes
Poços a Forma Ingrediente Concentraçao b
1-6 Comprimido c NAD 1.23 µmol/L
7 Líquido Tampão Tris
L-lactato
15.3 µmol/L
a. Os poços são numerados consecutivamente a partir da extremidade larga do
cartucho.
b. Valor nominal por teste no fabrico.
c. O comprimido contém excipientes.
Precauções: As cuvetes usadas contêm líquidos biológicos
humanos; manipule-as com o cuidado adequado para evitar o
contacto com a pele e a ingestão. 3
Para utilização em diagnóstico in vitro
Preparação do reagente: A mistura e a diluição são efectuadas
automaticamente pelo instrumento.
Instruções de armazenamento: Armazenar entre 2 e 8° C.
Validade: Consultar a embalagem para obter a data de validade de
cada um dos cartuchos de reagentes não abertos. Os poços dos
cartuchos selados ou não hidratados no instrumento permanecem
estáveis durante 30 dias. Depois dos poços 1 a 6 terem sido
perfurados pelo instrumento, permanecerão estáveis durante 72
horas. Depois de o poço 7 ter sido perfurado pelo instrumento,
permanecerá estável durante 30 dias.
Colheita de amostras: Para as amostras analisadas por este método
podem ser utilizados os procedimentos normais para a colheita e
armazenamento de soro e de plasma. Evitar o contacto prolongado
do soro e plasma com os glóbulos vermelhos separados. 3
Substâncias interferentes conhecidas
• Não devem ser utilizados tubos de colheita contendo EDTA,
fluoreto de sódio ou oxalato de potássio 4 .
• 500 mg/dL de hemoglobina [0.31 mmol/L (monómero)]d
aumentarão o resultado de LDH em 50 U/L numa actividade de
LDH de 131 U/L.
• As substâncias seguintes não exercem qualquer efeito mensurável
sobre o método LDH, nas concentrações indicadas:
Acetaminofeno 200 µg/mL [1.3 mmol/L]
Ampicilina 20 µg/mL [57 µmol/L]
Bilirrubina 20 mg/dL [342 µmol/L]
Diazepam 20 µg/mL [70 µmol/L]
Digoxina 20 ng/mL [25.6 nmol/L]
Etanol 800 mg/dL [174 mmol/L]
Gentamicina 16 µg/mL [29.4 µmol/L]
Lipémia 600 mg/dL [6.86 mmol/L] triglicérido
Nortriptilina
1000 ng/mL [3797 nmol/L]
Fenobarbital 80 µg/mL [344 µmol/L]
Fenitoína 30 µg/mL [119 µmol/L]
Salicilato 100 mg/dL [7.24 mmol/L]
Teofilina 100 µg/mL [555 µmol/L]
• Os tubos de colheita Corvac® e SST® não afectam a actividade do
método LDH.
• Cada laboratório deverá determinar a aceitabilidade dos tubos de
colheita de sangue e dos produtos de separação do soro que
utiliza. Podem existir variações nestes produtos entre fabricantes
e, por vezes, entre lotes do mesmo fabricante.
Corvac® é uma marca comercial registada da Monoject, Divisão da Sherwood
Medical, St. Louis, MO.
SST® é uma marca comercial registada da Becton-Dickinson, Rutherford, NJ.
d. Sistema Internacional de Unidades (Unidades S. I.) entre parêntesis.
Procedimento: Para a execução do teste LDH é necessário o
cartucho de reagente Flex® LDH, N° de Catálogo DF53A. Este teste
é efectuado no sistema de química clínica Dimension®, depois de a
verificação do método ter sido efectuada (consultar o Material de
Referência na secção Verificação).
Passos do teste
A recolha da amostra e , dispensação do reagente, agitação,
processamento e impressão dos resultados são realizados
automaticamente pelo sistema Dimension®. Para obter
pormenores sobre este processamento, consultar o manual do
sistema Dimension®.
e. O recipiente da amostra (se não for um tubo primário) deverá ter volume
suficiente para acomodar o volume da amostra e um volume morto. Não é
necessário um enchimento preciso do recipiente.
Condições de teste
• Volume da amostra: 14 µL
• Volume do reagente 1: 50 µL
• Volume do reagente 2: 90 µL
• Volume do diluente: 196 µL
• Temperatura do teste: 37°C
• Comprimento de onda: 340 e 383 nm
• Tipo de leitura: taxa bicromática
Verificação
O procedimento geral de verificação encontra-se descrito no
manual do sistema Dimension®. Ao verificar o método de
desidrogenase láctica, deverá ter em consideração as seguintes
informações:
Intervalo do ensaio (a 37°C): 0 -600 U/L
Material de Referência:
Verificadores secundários, tais como o
Verificador Enzimático (N° de Catálogo
DC19).
Níveis de verificação sugeridos: 150, 300, 450 U/L
Esquema da verificação:
Três níveis em triplicado
Frequência da verificação: Cada lote novo de cartucho de reagente
De 3 em 3 meses para qualquer lote
individual
Coeficientes Atribuídos: C0 0.000
C1 9.400
Controlo da Qualidade
Pelo menos uma vez por dia, analisar soluções com dois níveis de
um material de controlo da qualidade, com concentrações
conhecidas. Para obter mais pormenores, consultar o seu manual
do sistema Dimension®. O resultado obtido deverá encontrar-se
dentro dos limites definidos pela variabilidade do sistema no dia a
dia, avaliada pelo laboratório do utilizador. Se os resultados se
situarem fora dos limites aceitáveis do laboratório, seguir o
procedimento da secção de resolução de problemas apresentado
no manual do sistema Dimension®.
Pode existir uma avaria do sistema se for observada a seguinte
precisão de 5 testes:
Actividade
D.P.
170 U/L > 7 U/L
306 U/L > 10 U/L
Resultados: O instrumento calcula e imprime automaticamente a
concentração de desidrogenase láctica em U/L utilizando o
esquema de cálculo ilustrado no manual do sistema Dimension®.

Limitação do procedimento
Resultados:
> 600 U/L
Diluições manuais: Os resultados que ultrapassem as 600 U/L devem
ser repetidos após a diluição da amostra com o
Diluente Enzimático (N° de Catálogo 790035901)
ou um equivalente para obterem uma amostra
dentro do intervalo do ensaio.
Introduzir o factor de diluição. Voltar a efectuar o
ensaio. A leitura do resultado é corrigida para a
diluição.
Auto-diluição (AD): Consultar a literatura do seu sistema
Dimension®.
O sistema de emissão de relatórios do instrumento contém
mensagens de erro para prevenir o operador de avarias específicas.
Qualquer relatório contenha tais mensagens de erro deve ser retida
para seguimento. Consultar o manual do sistema Dimension®.
Intervalo de referência (a 37°C)5, 6: 100 - 190 U/L
Esta população de referência é constituida por:
118 homens, idades compreendidas entre os 20 e os 65 anos
108 mulheres, idades compreendidas entre os 20 e os 65 anos
O intervalo de referência foi calculado de forma não paramétrica e
representa os 95% centrais da população.
Cada laboratório deverá estabelecer o seu intervalo de referência para
a desidrogenase láctica, conforme é executado o procedimento no
sistema Dimension®.
Características específicas do desempenho f
Bibliografia
1. Wacker, WEC, Ulmer, DD, Vallee, BL, Metalloenzymes and myocardial
infarction: II Malic and lactic dehydrogenase activities and zinc
concentrations in serum, New England J Med 1956; 255:449.
2. Gay, RJ, McComb, RB, Bowers, GN, Jr., Optimum reaction conditions for
human lactate dehydrogenase isoenzymes as they affect total lactate
dehydrogenase activity, Clin Chem 1968; 14:740.
3. Tietz, NW, Textbook of Clinical Chemistry, W. B. Saunders Co., Philadelphia,
PA 1986, pp 52–53 (techniques and procedures to minimize laboratory
infections) and pp 478–497 (specimen collection and storage recommendations).
4. Henry, RJ, Cannon, DC, Winkelman, JW, Clinical Chemistry, Principles and
Technics, Harper and Row, New York, NY, 1974, pp 828–829.
5. Speicher, CE, Fetrat, ME, Fiske, ML, Henry, JB, An automatic clinical
analyzer: a critical evaluation, Amer J Clin Path 1972; 57:643.
6. Westgard, JO, Hunt, MR, and Lahmeyer, BL, Estimates of Normal Range for
15 Determinations on the Du Pont Automatic Clinical Analyzer (aca ® ), Du
Pont Company, Wilmington, DE (19720).
Dimension® e Flex® são marcas comerciais registadas da Dade Behring
Inc., no Departamento de Patentes e Marcas Registadas dos EUA, na
Alemanha e muitos outros países.
* As secções revistas são marcadas com um asterisco.
Reprodutibilidade g
Média Desvio padrão (% CV)
Material (U/L) Intra-ensaio Itervalo diário
Sor ensaiado
de controlo QCS
Normal 139 5.6 (4.0) 8.6 (6.2)
Anormal 355 4.9 (1.4) 11.8 (3.3)
QCS é uma marca comercial da Gilford, Irvine, CA 92714.
Correlação
Estatística de Regressão h
Método
Coeficiente de
comparativo Declive Intersecção correlação n
Metodo LDH
no aca ® 0.946 23 0.987 96
f. Todos os testes das características do desempenho foram efectuados após a
realização das verificações normalmente recomendadas do controlo da
qualidade do equipamento (consultar o manual do sistema Dimension®).
g. As amostras a cada nível foram analisadas em triplicado durante 20 dias. Os
desvios padrão intra-ensaio e do intervalo diário foram calculados através do
método da análise da variância.
h. A equação modelo para a estatística de regressão é a seguinte: resultados do
sistema Dimension® = [declive x (resultados do método comparativo)] +
intersecção.
Especificidade analítica
Consultar a secção sobre substâncias interferentes para obter
pormenores.
Chave dos Símbolos
Fabricado por
EC REP
IVD
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EC
REP
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Regus House, Atterbury
Milton Keynes MK10 9RG
United Kingdom
EXP
YYYY-MM-DD
2°C
LOT
8°C
Código do Lote
A data em “Utilizar antes de” encontra-se no
formato ano-mês-dia (AAAA-MM-DD)
Limitação da Temperatura
Marca CE
REF Número de Catálogo
Consulte as Instruções de Utilização
2001-12-13 PT
2003-06 I PN 717053.001-PT