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A lamínula fecha essa “micro‐piscina” por cima. Preparamos a câmara de Neubauer com água, fechamos com a lamínula e colocamos óleo de imersão sobre a mesma para usar a objetiva de 100X. Focalizamos a imagem até enxergar bem as ranhuras de 50 µm da câmara de Neubauer, nos certificando assim que estamos no plano de visão do microscópio. Liberamos o laser. Já deve ser possível visualizar um círculo nesse estágio se as etapas anteriores foram bem feitas. Agora, movendo a segunda lente do telescópio apenas na direção z, devemos ver esse círculo abrindo e fechando, que nos permite encontrar a distância z para o menor ponto focal do laser no plano de visão. Feito isso voltamos ao procedimento da “verticalização” movendo a lente do telescópio nas direções XY até garantir a formação dos círculos concêntricos novamente. Nesse ponto, a captura ocorrerá bem próxima do plano de visão do microscópio. Profundidade 100 µm Fundo quadriculado 50 x 50 µm Figura 30. Ilustração da câmara de Neubauer. 5. A última etapa é feita com a captura de microesferas de poliestireno. Qualquer tinta branca de parede está cheia dessas microesferas. Diluímos bem essas microesferas em água e colocamos essa solução na câmara de Neubauer, usando a objetiva de 100X e ligando o laser de Nd:YAG. Se as etapas anteriores foram bem feitas, devemos ser capazes de visualizar esferinhas sendo capturadas no fundo da lâmina. Capturamos uma delas e a subimos movendo o foco do microscópio. Finalmente realizamos o ajuste fino do telescópio movendo‐o na direção z até obter a microesfera bem focalizada. Nessa etapa o ponto de captura não precisa estar obrigatoriamente no centro da tela. 2.1.12 Resultados Obtidos com a Pinça Óptica Simples Abaixo estão algumas imagens de manipulação feitos em nosso laboratório com a pinça óptica simples. 34
a. b. c. Figura 31 a. Cristal de oxalato de cálcio de célula de cebola. b. Espermatozóide. c. Membrana esticada de célula de cebola. 2.2 A Pinça Óptica Dupla 2.2.1 Motivação e Pontos Experimentais Relevantes Normalmente, a maneira prática de transportar a partícula capturada de um local para o outro nas direções x e y é mantendo a pinça fixa e movimentando a plataforma ou platina, do microscópio. Isso porque mover a posição do feixe de pinça é muito mais complicado, podendo até desalinhar o sistema. Entretanto, para vários estudos, tais como adesão de partículas e medidas estáticas de elasticidades, é necessário usar dois ou mais pontos de captura e assegurar a capacidade de movimentá‐los um em relação ao outro de forma independente. Inclinando o feixe de laser incidente podemos mover a posição de uma pinça em relação à outra conforme mostra a Figura 32 a. O problema com esse procedimento é que a inclinação do feixe que estava centralizado, o desalinha em relação à abertura da objetiva, esbarrando nos seus limites, perdendo potência e obtendo um feixe totalmente assimétrico, assim como apresenta a Figura 32 b. Essa perda de potência vai ocorrer sempre se a objetiva está completamente preenchida em um bom alinhamento da pinça óptica. Para se resolver essa questão, é necessário defletir o feixe incidente de forma que sua rotação seja pivotada em torno do centro da abertura na entrada da objetiva, conforme mostra a Figura 33. Além disso, essa inclinação tem que ser realizada satisfazendo a captura no plano de visão e o preenchimento da objetiva. Finalmente, também é desejável controlar independentemente a potência de cada uma das pinças ópticas. 35
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iii = 1 ; soma = 0 ; , True , iii +
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H∗ programa para o feixe gaussian
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an@n_D := Han@nD = Hmn f2@n, xaD f1
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Referências 1 Ashkin, J. Dziedzic,
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43 J. X. Cheng, A. Volkmer, X. S. X
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63 H. Felgner, O. Müller, M. Schli
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properties of stored red blood cell
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