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Intensidade (a.u.) 380 390 400 410 comprimento de onda (nm) Figura 102. Hiper Rayleigh de uma microesfera de vidro capturada ‐ 60 s. 4.10 Integrando as Espectroscopias As figuras apresentadas ao longo desse capítulo dão uma boa idéia do conjunto de possibilidades de espectroscopias e microscopias que abrimos com esse trabalho. Raman na região de 800 nm com laser de Ti:Safira cw, fluorescência na região de 500‐ 600 nm excitadas por absorção de dois fótons e Hiper Rayleigh & Hiper Raman na região de 400 nm. Com isso demonstramos que todas espectroscopias podem ser acopladas em uma mesma e única montagem, agregadas à pinça óptica, utilizando um microscópio comercial, conforme foi apresentado no capítulo 2. Todos os espectros foram obtidos com poucos segundos. Desse modo, com o micro‐Raman, o micro Hiper Raman, a pinça óptica e mais as luminescências que somos capazes obter através da absorção de 2 fótons temos agora uma ferramenta completa para estudar células vivas e uma grande variedade de amostras em um mesmo sistema experimental. Podemos fazer medidas de uma única célula em movimento ou não pois temos a possibilidade capturá‐la. Também somos capazes de realizar aplicações em tempo real se assim for desejável, com direito a observar alterações geradas por qualquer modificação na atividade celular, sendo a mesma causada ou não por uma substância acrescida ao meio onde a partícula biológica está através do monitoramento da intensidade da fluorescência ou da observação de picos de Raman. Os espectros de Hiper Raman foram obtidos com 60 s, tempo que só pode ser obtido quando se usa um laser de femtosegundos com 80 megahertz de repetição. As espectroscopias de Hiper Raman e 164
Hiper Rayleigh, por também serem um efeito não linear, além de terem as mesmas vantagens que a espectroscopia de multifóton e também poderem ser usadas para se fazer imagens de alta resolução, se forem aplicadas na biologia ainda tem a vantagem adicional de não causar dano algum para a célula. A espectroscopia multifotônica pode causar alguns danos a célula pois exige o uso de corantes que geralmente são bastante tóxicos. Apesar da intensidade para esses espalhamentos serem bem menos intensa, já existem relatos do uso de Hiper Rayleigh na área biomédica [59]. Temos então no final um sistema de microespectroscopia bastante eficiente para diversos tipos estudos que pode envolver desde materiais biológicos até amostra de estado sólido. 165
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Universidade Estadual de Campinas I
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Agradecimentos Gostaria de agradece
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Abstract The optical tweezers is a
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2.5.3 CCD 63 2.5.4 Filtros Super NO
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5.4.8. Equação de Stokes ou “Cr
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feixe focalizado na borda nas posi
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óptica. Uma medida precisa da pot
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Os sistemas experimentais utilizado
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Para entender como um único feixe
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Figura 7. Forças de dois raios par
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Hemoglobina Absorção% (%) Melanin
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temperatura ambiente, a pinça ópt
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emissão laser em 1064 nm ocorre en
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não ionizando o gás da lâmpada.
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aumentando a reflexão no infraverm
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objetiva e não se tem a necessidad
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laminula distância de trabalho Fig
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em 3 dimensões. Entretanto, não s
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2.1.11 O Alinhamento O procedimento
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A lamínula fecha essa “micro‐p
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Feixe inclinado inclinação Abertu
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apenas sinais com a mesma freqüên
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O principal componente de um laser
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intensidade e a fase da componente
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2.5 Sistema Experimental de Pinça
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maior no centro, o que é equivalen
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perderiam esse sincronismo nas volt
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2.5.2 Monocromador Nos experimentos
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sinal Raman. A solução encontrada
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Tornamos o nosso micro‐Raman conf
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Capítulo 3 Teoria Óptica Eletroma
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que está embebido. Descobrimos, ap
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Com o intuito de facilitar os cálc
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obtendo o produto escalar de r c
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E b [ A ( , ) Z ( ka) e A ( , ) Z (
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m m 1 m 1jn( xg ) nTM M jn( Mx) dn
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Estendendo essa analogia entre a ó
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m′ m′ ∗ −k ∗ ∗ dPn′
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π 0 m n m n′ m n m n′ 2 dP dP
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∫ * * 1 * * { } 2 2 i Fi = Re
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n+ 1 n′ + 1 ( i) ( i) [ an n bn n
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+ {( ) 1 ρ [ ]} k cosϕ n i Hsϕ =
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2 E0 2 ∞ 2π F = ε ∑ Re {(2n+
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partículas capturadas pela pinça
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3.2.1 Aproximação da Integral Loc
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Vamos procurar, portanto, soluçõe
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Ex = iωψ e , E y = 0 e E z = 0 (3
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validade dos modelos empregados no
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∂m( δmk∂k)( e j∂j) −∂m(
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ik iεω H = ∑ − AnmNnm − B
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7. Cálculo de Q pr Vamos agora cal
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⎧ τn n+ 1 iρ n+ 1 −iρ n iρ
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2π 2π 2 2 F → e = senθcos ϕ e
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( 2n + 1) ∞ ∞ 4π 2 * 2 π 2 nn
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e agora por último, 2 E0 2 ∞ 4π
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iii = 1 ; soma = 0 ; , True , iii +
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H∗ programa para o feixe gaussian
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T@n_, m_, p_D@ϕo_, λ_D := Hbn@n,
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an@n_D := Han@nD = Hmn f2@n, xaD f1
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Referências 1 Ashkin, J. Dziedzic,
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20 Tese de Doutorado de Gaston Este
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43 J. X. Cheng, A. Volkmer, X. S. X
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63 H. Felgner, O. Müller, M. Schli
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properties of stored red blood cell
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