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sinal coletado pela mesma objetiva responsável por focalizar o laser de excitação.
Chama‐se esse processo de “descanning”.
abertura
Figura 93. Ilustração de funcionamento de um microscópio confocal.
Quanto menor a abertura, maior a resolução em z e menor a relação sinal ruído,
pois a mesma bloqueia parte da luz advinda da amostra, principalmente se esta for
espalhada durante percurso até a abertura, como mostra a Figura 94. Para aumentar a
relação sinal/ruído é necessário aumentar a intensidade do laser aumentando a chance
de ocorrerem danos térmicos e “photobleaching”. Já na microscopia confocal mutifóton
só há emissão de luz no foco do laser, tornando a abertura desnecessária. Além disso,
no caso multifóton, apenas o volume do foco está sendo excitado, o que evita o
“photobleaching” de outras porções da amostra dentro do cone de incidência do laser.
Figura 94. Microscópio Confocal e Multifóton.
A denominação confocal é utilizada para sistemas em que tanto a iluminação
quanto a coleta da luz transmitida, ou emitida, pela amostra passam pela mesma óptica.
Nesse caso, a resolução espacial aumenta, pois a figura de difração de Airy fica elevada
ao quadrado, conforme mostra a Figura 95. Nos processos de dois fótons a própria
excitação já depende da intensidade da luz ao quadrado, não dependendo do sistema
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