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www.ital.sp.gov.br/bj Compostos fenólicos e atividade antioxidante de extratos da casca de noz-pecã [Carya illinoinensis (Wangenh.) C. Koch] PRADO, A. C. P. et al. densidade óptica em torno de 0,700 ± 0,05. Uma alíquota de 980 μL do radical diluído foi pipetada e transferida para uma cubeta de 10 mm (1 mL), procedendo-se à medida da absorbância (A 754 = A 0 ), adicionando-se imediatamente 20 μL da amostra e homogeneizando-se e agitando-se por alguns segundos. Trolox foi utilizado como padrão (15 μM = 0,13209 g.500 mL –1 ). O cálculo da porcentagem de inibição do radical foi realizado pela seguinte fórmula: % de inibição do radical = (1 – A f /Ao) x 100, onde, “Ao” é a absorbância inicial e “A f ” é a absorbância final. Os cálculos foram realizados para cada concentração de amostras analisadas de forma que, ao se obter os resultados, pôde-se realizar uma curva dose-resposta. Os resultados foram expressos em μmol TEAC.g –1 (capacidade antioxidante equivalente em Trolox). 2.6.2 Método DPPH O método DPPH (2,2-difenil-1-picrilhidrazil) foi realizado de acordo com Brand-Williams et al. (1995) seguido de modificações conforme Kim et al. (2002) e VillarreaL-Lozoya et al. (2007). Após o preparo do radical (0,1 mM - 0,03943 g do reativo DPPH dissolvido em 10 mL de metanol a 80%), foi pipetada uma alíquota de 2,9 mL e colocada para reagir em tubos de ensaio, aos quais foi adicionado 0,1 mL do extrato da casca de noz-pecã. As amostras foram mantidas ao abrigo da luz e, as medidas de absorbância foram realizadas em espectrofotômetro a 515 nm após 30 min e após 24 h. Trolox foi utilizado como padrão (150 mg.L –1 ). O cálculo foi realizado conforme descrito acima para o ABTS. Os resultados foram expressos em mg TEAC.g –1 (capacidade antioxidante equivalente em Trolox). 2.6.3 β-caroteno/ácido linoleico A atividade antioxidante medida in vitro através do sistema modelo β-caroteno e ácido linoleico foi realizada seguindo-se a metodologia descrita por Marco (1968) e modificada por Miller (1971). O β-caroteno foi dissolvido em clorofórmio (20 mg.mL –1 ). Uma alíquota de 20 μL desta solução foi colocada em um frasco erlenmeyer com 40 μL de ácido linoleico, 1 mL de clorofórmio e 500 mg de Tween 40. O clorofórmio foi completamente evaporado com vapor de nitrogênio. Em seguida, adicionaram-se 150 mL de água destilada deionizada saturada com oxigênio (30 min) à emulsão de β-caroteno, agitandose a mistura. Foram adicionados 200, 300 e 500 ppm dos extratos da casca e, paralelamente, concentrações iguais de um antioxidante comercial, composto de uma mistura de tocoferóis naturais (MT), que foi utilizado como antioxidante padrão. Além disso, o efeito sinergista foi avaliado através da mistura dos extratos da casca e de tocoferóis nas concentrações de 100, 150 e 250 ppm de cada (E + MT 1:1). As leituras das absorbâncias a 470 nm foram realizadas em intervalos de 15 min por um período de 2 h, mantendo-se as cubetas em banho-maria a 50 °C. A atividade antioxidante foi calculada em termos de percentual de inibição, relativo ao controle, utilizando a seguinte equação: AA = [(As – Ac)/(Ao - Ac)] x 100, onde As e Ac são, respectivamente, as absorbâncias da amostra e do controle ao final da análise e Ao é a absorbância da amostra (470 nm) no início do ensaio. 2.7 Análise instrumental da cor da casca da noz-pecã Para a análise instrumental da cor foi utilizado colorímetro Minolta Chromo Meter CR 400 (Minolta, Osaka, Japão), acoplado a um processador DP-100, com iluminante D65 e ângulo de 10º. Foi utilizado o sistema de avaliação CIE Lab (Comission Internationale de Eclairage), escala de cor L*, a*, e b*, onde L* corresponde à luminosidade (0 = preto e 100 = branco); a* corresponde à variação de cor de verde a vermelho [–80 até zero = verde (–a) , de zero a +100 = vermelho (+a)]; b* corresponde à variação de cor de azul a amarelo [–100 até zero = azul (–b), de zero a +70 = amarelo (+b)]. Também foram determinados o C* (chroma), que indica a saturação da cor (proporção em que a cor está misturada com o branco, preto ou cinza) e, H, que corresponde à tonalidade ou matiz, expressa em ângulos (0° = vermelho, 90° = amarelo, 180° = verde e 270 ° = azul, equivalentes ao +a, +b, –a e –b, respectivamente). 2.8 Análise estatística A análise estatística dos dados foi realizada através do programa SAS “for Windows”. Os dados foram submetidos à análise de variância de comparação de médias ANOVA e testes de Tukey (p < 0,05). As análises foram realizadas em triplicata, com exceção da atividade antioxidante através do sistema β-caroteno/ácido linoleico, que foi realizada em duplicata. 3 Resultados e discussão Na Tabela 1 podem ser observados os teores de extrato seco (ES), compostos fenólicos totais (FT), taninos condensados (TC) e capacidade antioxidante (CA) dos extratos obtidos da casca de noz-pecã. De acordo com os resultados obtidos, foram observados para o extrato seco em álcool (23,2%) e em acetona (9,6%) maiores rendimentos, seguidos pelos rendimentos em água e em éter muito inferiores (2,6% e 1,4%, respectivamente). Estes resultados estão de acordo com o teor de compostos fenólicos obtidos para estas frações, de 118 ± 42; 46 ± 5,7; 4 ± 2,4 e 0,9 ± 0,4 mg GAE.g –1 , respectivamente. O lote 3 apresentou um rendimento de extração (éter: 3,2; acetona: 10,6; álcool: 32 e água: 3,8 %) e, teor de compostos fenólicos maior para todos os solventes Braz. J. Food Technol., v. 12, n. 4, p. 323-332, out./dez. 2009 326
www.ital.sp.gov.br/bj Compostos fenólicos e atividade antioxidante de extratos da casca de noz-pecã [Carya illinoinensis (Wangenh.) C. Koch] PRADO, A. C. P. et al. Tabela 1. Extrato Seco, conteúdo de fenólicos totais, taninos condensados e atividade antioxidante, determinada pelos sistemas ABTS e DPPH, da casca de noz-pecã. Extrato Lote 1 Lote 2 Lote 3 Média ES A (g.100 g –1 de casca de noz-pecã seca Éter 0,5 ± 0,01 b 0,4 ± 0,05 b 3,2 ± 0,01 a 1,4 ± 1,6 Acetona 7,9 ± 0,5 b 10,4 ± 0,3 a 10,6 ± 1,3 a 9,6 ± 1,5 Álcool 20,6 ± 1,6 b 17,1 ± 3,1 b 32,0 ± 4,5 a 23,2 ± 7,8 Água 2,0 ± 0,2 b 2,0 ± 0,4 b 3,8 ± 0,04 a 2,6 ± 1,0 FT B (mg GAE.g –1 ) Éter 0,6 ± 0,03 b 0,7 ± 0,1 b 1,3 ± 0,03 a 0,9 ± 0,4 Acetona 39,4 ± 0,1 a 49,2 ± 0,1 a 49,4 ± 0,03 a 46 ± 5,7 Álcool 110,6 ± 0,1 b 80,3 ± 0,2 b 164,2 ± 0,2 a 118 ± 42 Água 2,4 ± 0,03 b 2,9 ± 0,2 b 6,7 ± 0,06 a 4,0 ± 2,4 TC C (mg CE.g –1 ) Éter nd** nd** nd** - Acetona 151,8 ± 0,04 b 201,3 ± 0,03 a 202,3 ± 0,1 a 185 ± 28 Álcool 660,8 ± 0,1 ab 495,2 ± 0,2 b 1053,4 ± 0,2 a 736 ± 286 Água nd** nd** nd** - D CA ABTS (μmol TEAC.g –1 ) Éter 1,6 ± 1,4 a 2,0 ± 0,5 a 1,3 ± 4,7 a 1,6 ± 0,4 Acetona 1452,1 ± 0,1 b 1828,9 ± 0,01 a 1739,2 ± 0,06 a 1673 ± 196 Álcool 1560,3 ± 0,2 b 1631,1 ± 0,1 b 4610,4 ± 0,1 a 2600 ± 174 Água 44,6 ± 0,2 b 52,8 ± 0,3 b 368,3 ± 0,1 a 155 ± 184 E CA DPPH 30 min (mg TEAC.g –1 ) Éter na*** na*** na*** - Acetona 155,4 ± 0,08 b 218,5 ± 0,03 a 245,3 ± 0,1 a 206 ± 46 Álcool 410,0 ± 0,1 b 331,1 ± 0,3 b 620,6 ± 0,1 a 453 ± 149 Água na*** na*** na*** - F CA DPPH 24 h (mg TEAC.g –1 ) Éter na*** na*** na*** - Acetona 294,3 ± 0,06 b 258,8 ± 0,01 b 390,6 ± 0,1 a 314 ± 68 Álcool 617,4 ± 0,08 a 528,5 ± 0,2 a 706,4 ± 0,1 a 617 ± 89 Água na*** na*** na*** - a Extrato Seco - rendimento (ensaio gravimétrico); B Fenólicos Totais - mg GAE.g –1 (equivalentes em ácido gálico) de peso seco (ensaio de Folin- Ciocalteau); c Taninos Condensados - mg CE.g –1 (equivalentes de catequina) de peso seco (ensaio de Vanilina); D Capacidade Antioxidante - μmol TEAC.g –1 (atividade antioxidante equivalente em Trolox) de peso seco (ABTS); E Capacidade Antioxidante - mg TEAC.g –1 (atividade antioxidante equivalente em Trolox) de peso seco (DPPH – 30 min); F Capacidade Antioxidante - mg TEAC.g –1 (atividade antioxidante equivalente em Trolox) de peso seco (DPPH – 24 h); média ± desvio padrão (n = 3); *valores com letras iguais na mesma linha não apresentam diferença significativa (Tukey, p < 0,05); **nd: níveis não detectados; e ***na: não avaliado. testados (éter: 1,3 ± 0,03; acetona: 49,4 ± 0,03; álcool: 164,2 ± 0,2; e água: 6,7 ± 0,06 mg GAE.g –1 ), sendo a diferença significativa (p < 0,05) para os extratos alcoólico, aquoso e etéreo. Para o extrato em acetona, os rendimentos de extração dos lotes 2 e 3 (10,4 e 10,6%), foram significativamente maiores em relação ao lote 1 (7,9%), mas o teor de fenólicos totais não diferiu significativamente entre os lotes. Villarreal-Lozoya et al. (2007) reportaram em extratos de casca de noz-pecã de uma mistura de acetona e água (70:30, v/v) um teor de compostos fenólicos totais de 448 mg CAE.g –1 (equivalentes de ácido clorogênico). De acordo com Kyoung Chun e Kim (2004), é possível fazer a conversão de CAE para GAE, assumindo um fator de conversão de 0,6. Desta forma, este resultado seria o equivalente a 80,64 mg GAE.g –1 . Os valores médios obtidos no presente trabalho para as frações em éter, acetona e água foram muito inferiores aos reportados por Villarreal-Lozoya et al. (2007), (0,9 ± 1,6, 46 ± 5,7 e 4,0 ± 2,4 mg GAE.g –1 , respectivamente), e o resultado médio obtido para a fração alcoólica (118 ± 42 mg GAE.g –1 ), foi superior. A casca de noz-pecã apresentou teores de compostos fenólicos totais no extrato alcoólico semelhantes a matérias-primas consideradas ricas em compostos fenólicos totais, como o chá verde e o cravo da índia, que tiveram reportados teores de 117,3 e 113,2 mg GAE.g –1 , respectivamente (SAMMAN, 2001; WU et al., 2004). O teor de taninos condensados foi maior na fração alcoólica (média de 736 ± 286 mg CE.g –1 ), quando comparada com a fração em acetona, onde foram observadas baixas concentrações (média de 185 ± 28 mg CE.g –1 ). Para a fração alcoólica foi observada uma diferença significativa (p < 0,05) entre os teores obtidos para o lote 3 (1053,4 ± 0,2 mg CE.g –1 ) e o lote 2 (495,2 ± 0,2 mg CE.g –1 ), sendo que, para o lote 1 (660,8 ± 0,1 mg CE.g –1 ), as diferenças em relação aos lotes 2 e 3 não foram significativas (p < 0,05). Para a fração acetona, foi observada uma diferença significativa (p < 0,05) entre os lotes 2 e 3 (201,3 ± 0,03 e 202,3 ± 0,1 mg CE.g –1 , respectivamente) e Braz. J. Food Technol., v. 12, n. 4, p. 323-332, out./dez. 2009 327
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