Compostos fenólicos e atividade antioxidante de extratos da casca ...

www.ital.sp.gov.br/bj
Compostos fenólicos e atividade antioxidante de extratos da casca de noz-pecã [Carya illinoinensis (Wangenh.) C. Koch]
PRADO, A. C. P. et al.
da marca Tecnal ® ), seca em estufa com circulação de ar
(modelo 400/D 200 °C da marca Nova Ética ® ), e moída em
moinho analítico de laboratório (modelo A-11 da marca
IKA Works ® ). O pó foi peneirado a 60 mesh e submetido
à extração sequencial com éter, acetona, álcool e água
destilada à temperatura ambiente. Após cada etapa de
extração, os resíduos da extração sequencial foram secos
em estufa com circulação de ar a 40 °C até a evaporação
completa do solvente e submetidos ao processo de
extração subsequente com o próximo solvente. O procedimento
realizado pode ser observado na Figura 1.
Os extratos foram filtrados a vácuo em papel filtro,
marca Whatman 541, 125 mm, e os volumes completados
até 100 mL e armazenados em frasco âmbar, com atmosfera
de nitrogênio, em freezer, para análises posteriores
(WILKINSON, 2000).
2.3 Determinação do peso seco dos extratos -
Extrato Seco (ES)
A determinação do extrato seco (ES) foi realizada
por gravimetria, tomando-se uma alíquota de 5 mL em
cadinho de porcelana, previamente tarado, seguido de
secagem em estufa a 105,0 ± 0,5 °C até peso constante
(HORWITZ, 2005). Os resultados do peso seco, além de
demonstrarem o rendimento do processo de extração,
foram utilizados no cálculo das alíquotas de extrato (200,
300 e 500 ppm que equivalem a μL.mL –1 extrato seco
2,5 g de casca seca moída desengordurada
100 mL éter
1 h agitação
Filtração
Sobrenadante
(extrato etéreo)
Sobrenadante
(extrato acetona)
Sobrenadante
(extrato alcoólico)
Sobrenadante
(extrato aquoso)
Resíduo
Resíduo
Resíduo
Resíduo
(desprezado)
100 mL acetona
1 h agitação
Filtração
100 mL álcool
1 h agitação
Filtração
100 mL água
1 h agitação
Filtração
Figura 1. Diagrama do procedimento de extração da casca de
noz-pecã com diferentes solventes. Realizado de acordo com
o proposto por Moreira (2003).
presente na solução de extrato), utilizadas na análise de
atividade antioxidante no sistema modelo ß-caroteno e
ácido linoleico. Todas as determinações foram realizadas
em triplicata.
2.4 Determinação de compostos fenólicos totais
O conteúdo de fenólicos totais foi determinado
utilizando o método colorimétrico de Folin-Ciocalteau
com algumas modificações (BEAL, 2006; BUDINI et al.,
1980). Alíquotas (100 μL) de diluições apropriadas dos
extratos foram oxidadas com 500 μL do reagente de
Follin-Ciacauteau. A reação foi neutralizada com 1,5 mL
de carbonato de sódio saturado (75 g.L –1 ) e os volumes
foram completados até 10 mL através da adição de
água deionizada. Após incubação por 2 h à temperatura
ambiente, a absorbância da solução azul resultante foi
medida a 764 nm. A quantificação foi feita com base em
curva padrão de ácido gálico e os resultados expressos
em mg GAE.g –1 (equivalente de ácido gálico) em peso
seco.
2.5 Determinação do teor de taninos condensados
Para a determinação do teor de taninos condensados
procedeu-se de acordo com Price et al. (1978) e
adaptado por Villarreal-Lozoya et al. (2007). Foram coletadas
alíquotas de 1 mL de diluições apropriadas dos
extratos e colocadas em 2 tubos de ensaio separados
(1 para a amostra e outro para o branco). Foram, então,
adicionados 5 mL do reagente Vanilina (0,5 g de reagente
e 200 mL de HCl 4%/metanol) para as amostras, e HCl
4%/metanol para o branco. Os tubos de ensaio foram
mantidos ao abrigo da luz por um período de 20 min e as
medidas das absorbâncias foram realizadas em espectrofotômetro
em 500 nm. Os resultados foram expressos em
mg CE.g –1 (mg equivalente de catequina.g –1 de amostra
desengordurada).
2.6 Determinação da capacidade antioxidante
2.6.1 Método ABTS
O método ABTS [2,2’-azino-bis-(3- etilbenzotiazolina-6-ácido
sulfônico)] foi realizado de acordo com Re
et al. (1999) com algumas modificações. Após o preparo
do radical ABTS - [2,2’-azino-bis-(3- etilbenzotiazolina-
6-ácido sulfônico)] - (7 mM - 0,03836 g do reativo ABTS
dissolvido em 10 mL de água deionizada), foi preparada
uma solução de persulfato potássico (2,45 mM - 10 mL de
ABTS e 10 mL de persulfato misturados, homogeneizados
e mantidos num frasco âmbar pelo mínimo de 16 h protegido
da luz). Para o ensaio da amostra, foi pipetada uma
alíquota de 200 μL do radical formado e diluído em 10 mL
de etanol 96° P.A. Medidas de absorbância em cubetas
de 10 mm a 734 nm foram realizadas para certificação da
Braz. J. Food Technol., v. 12, n. 4, p. 323-332, out./dez. 2009 325