Pima™ CD4 Guia do cartucho

Limitações
1. Os resultados de um Pima CD4 test devem
ser avaliados com base em todos os dados
clínicos e de laboratório disponíveis.
Nos casos em que os resultados de
laboratório não concordarem com a
avaliação clínica, deverão ser realizados
testes adicionais apropriados.
2. O Pima CD4 test foi avaliado com sangue
total capilar e sangue total venoso usando
EDTA como anticoagulante. O soro, o
plasma e o sangue total obtidos com o
uso de outros anticoagulantes não foram
avaliados e não devem ser usados
3. As contagens absolutas de células T helper
podem variar de acordo com o laboratório e
com o equipamento usado.
Características de
desempenho
As características de desempenho do
Pima CD4 test foram estabelecidas por testes
realizados pela Clondiag GmbH
(agora, Alere Technologies GmbH) em Jena,
Alemanha, e por clínicas externas na África e
na Alemanha.
Precisão
A precisão do Pima CD4 test para a contagem
absoluta de células T helper foi avaliada por
comparação com o sistema BD FACSCalibur
como método de referência. Amostras de
sangue total venoso de 149 pacientes adultos
com HIV positivo que compareceram a clínicas
em Uganda foram coletadas e analisadas em
duplicata com o Pima CD4 e com o método
de referência (medição única). A análise de
regressão de Passing-Bablok foi realizada na
primeira medição de contagem de células do
Pima CD4 em comparação com a medição
de contagem de células do BD FACSCalibur;
os resultados estão ilustrados no gráfico
abaixo. O intervalo total de todas as amostras
analisadas foi de 12 a 1472 cells/μL para o
BD FACSCalibur e de 17 a 1631 para o Pima
CD4. A inclinação (95% CI) foi 0,95 (0,91 a 0,99)
com uma interseção (95% CI) de 24 (8,5 a 37). O
coeficiente de correlação de Pearson (95% CI)
entre as duas medições foi de 0,96 (0,94 a 0,97).
Gráfico de dispersão com ajuste Passing & Bablok
A análise de diferença de Bland-Altman
(Pima CD4 – BD FACSCalibur) também foi
realizada nos dados. O desvio médio (95% CI)
das 149 amostras foi de -10 (-22 a 3) cells/μL.
Concordância clínica
A concordância clínica entre os métodos foi
avaliada em termos do valor limite de diagnóstico,
por cálculo de uma tabela de contingência de
dois por dois. Os resultados são representados
nas tabelas abaixo para os dois valores limites,
200 cells/μL e 350 cells/μL, respectivamente.
A discordância entre os métodos em cada
valore limite teve seu desvio avaliado usando um
teste de McNemar e o desvio foi comprovado
insignificante.
Concordância clínica do valor limite > 200
Valor 95 % LCI 95 % UCI
Concordância 0.953 0.906 0.981
Pima Pima
Negativo Positivo
BD Negativo 25 5
BD Positivo 2 117
Teste bilateral de McNemar ( 2 de 7 ):
valor de p 0.453
Identidade
Concordância clínica do valor limite > 350
Valor 95 % LCI 95 % UCI
Concordância 0.940 0.888 0.972
Pima Pima
Negativo Positivo
BD Negativo 57 6
BD Positivo 3 83
Teste bilateral de McNemar (3 de 9):
valor de p 0.508
Análise de precisão em amostras clínicas
O desvio padrão do método interno e a % de CV
das medições do Pima CD4 foram calculados com
base nas medições realizadas em duplicata em
todas as 149 amostras e em todos os subconjuntos
de amostras dentro dos intervalos de contagem de
células de 0 a 200, de 0 a 350 e > 350, conforme
representado na tabela a seguir. MÉDIA consiste
na média de todas as medições em duplicata
dentro de cada intervalo, DP consiste no valor
raiz médio quadrático dos desvios padrão das
medições em duplicata dentro de cada intervalo
(juntamente com 95% CI).
Intervalo
(células/μL)
Guia do cartucho 6
Guia do cartucho 7
Guia do cartucho
N
MÉDIA
DP
95 %
(células/μL) (células/μL) LCI
95 % % CV
UCI
0 – 200 29 119 20 16 27 16.6
0 – 350 59 198 23 19 28 11.6
>350 90 580 41 35 47 7.0
Sangue total capilar
Demonstrou-se que o desempenho do Pima
CD4 com amostras de sangue total capilar é
comparável com sangue total venoso. Foram
coletadas amostras de 49 indivíduos adultos
portadores de HIV que se apresentaram em
2 estabelecimentos de assistência médica
na Alemanha. Foi utilizado o sangue venoso
dos mesmos indivíduos para referência com o
BD FACSCalibur. O intervalo total de todas as
amostras analisadas foi de 160 a 1181 células/μL
no BD FACSCalibur e de 167 a 1011 no Pima CD4.
Em comparação com o BD FACSCalibur, a análise
de regressão apresentou uma inclinação
(95% CI) de 0,85 (0,76 a 0,94) com uma
interseção (95% CI) de 46,42 (-5,92 a 98,76).
O coeficiente de correlação de Pearson
(95% CI) entre as duas medições foi de 0,94
(0,89 a 0,97).
A %CV das medições do Pima CD4 para
sangue total capilar foi de 10,3.
Reprodutibilidade de lote a lote
10 alíquotas de 2 amostras de sangue total
acima e abaixo do valor limite de 350 cells/μL
foram avaliadas usando 3 lotes diferentes de
Pima CD4 test cartridge. A reprodutibilidade de
lote para lote é apresentada na tabela abaixo:
Amostra Média (células/μL) % CV média
1 267 9.54
2 505 7.05
Reatividade cruzada
O anticorpo CD4 reage com monócitos e com
linfócitos T helper/indutores. 5,6
O anticorpo CD3 reage com todos os linfócitos
T maduros. 7,8
Linearidade
A linearidade foi avaliada testando diluições
em série de 5 amostras dentro do intervalo
clinicamente relevante de células T helper em
sangue total. O Pima CD4 demonstrou ser
linear de 3 a 2168 cells/μL. Todos os dados se
encaixam da linha de regressão linear com um
R2 mínimo de 0,99. Os dados estão resumidos
na tabela a seguir:
Amostra
Intervalo
(células/μL)
Inclinação R 2
1 3 – 2168 1.00 1.000
2 4 – 1507 0.99 0.995
3 4 – 690 1.02 0.996
4 4 – 402 1.01 0.997
5 9 – 391 0.98 0.997
Referências
1. Pattanapanyasat K and Thakar MR.
CD4+T cell count as a tool to monitor HIV
progression & anti-retroviral therapy. Indian J
Med Res 2005; 121 : 539-49.
2. Rachlis AR and Zarowny DP. Guidelines
for antiretroviral therapy for HIV infection.
Canadian HIV Trials Network Antiretroviral
Working Group. CMAJ 1998; 158 : 496-505.
3. Clinical and Laboratory Standards Institute.
Procedures and Devices for the Collection
of Diagnostic Capillary Blood Specimens;
Approved Standard-6th Edition H04-A6
Vol.28 No 25.
4. Clinical and Laboratory Standards Institute.
Procedures for the Collection of Diagnostic
Blood Specimens by Venipuncture;
Approved Standard-6th Edition H03-A6
Vol.27 No 26.
5. HCDM (former HLDA VIII) Meeting May
(2006), Quebec, Canada; WS Code M241.
6. Millan J, Cerny J, Horejsi V, Alonso MA (1999).
CD4 segregates into specific detergentresistant
T-cell membrane microdomains.
Tissue Antigens. Jan; 53(1) : 33-40.2.
Tissue Antigens. Jan; 53(1) : 33-40.2.
7. Knapp, W., B. Dorken, et al. Eds.
(1989), Leucocyte Typing IV: White Cell
Differentiation Antigens Oxford University
Press. New York.
8. Mc Michael, A.J., P.C.L. Beverly, et al. eds.
(1987). Leucocyte Typing III: White Cell
Differentiation Antigens. Oxford University
Press. New York.
Índice de símbolos
C
Marca CE
IVD
Dispositivo médico de diagnóstico
In vitro
i` Consulte as instruções de uso
h
Número do catálogo
g
Número do LOTE
H
M
Prazo de validade
Fabricante
Y
Aviso
D
X n
Não reutilizar
Conteúdo suficiente para
teste(s)
2:l 30: Limite de temperatura
p
Manter seco
Aviso: Pima CD4 test cartridges contêm pequenas
quantidades de preparados de células sanguíneas
humanas. Esses preparados de células foram testadas
e não apresentam reações a: Anti-HCV, Anti-HIV1 e 2,
HBsAg, Anti-HBc (IgG, IgM), sífilis, AK irregular, HCVe
HIV-PCR. É possível que permaneça um risco de
infecção residual, mas pequeno.
© 2012 Alere. Todos os direitos reservados.
Alere TM e Pima TM são marcas comerciais do grupo de
empresas Alere.
PI-PIMA-01-01-PT-BR Data de revisão: 24-Sept-2012 8
Pima CD4 Guia do cartucho
Português-Brasil
Para obter Assistência Técnica, entre em contato com o seu distribuidor local ou ligue para o número
correspondente à sua região:
Europa: +44 161 483 9032 EMEproductsupport@alere.com
África: +27 21 5315 999
Pacífico Asiático: +61 7 3363 7166
Índia: +91 11 45089400
América Latina: +57 2 6618916, +57 2 6618797 la.techsupport@alere.com
Rússia e CEI: +972 8 9429 683
Alere Technologies GmbH Loebstedter Str. 103–105 D-07749 Jena, Alemanha www.pimatest.com
Uso pretendido
O Pima CD4 é um teste de hematologia
imunológica automatizado com base em
imagens, destinado à rápida medição
quantitativa in vitro das células CD3+/CD4+
T (células T helper) no sangue total capilar ou
venoso. O Pima CD4 determina a contagem
absoluta de células CD3+/CD4+ e é destinado
ao uso no monitoramento contínuo de
contagens absolutas de linfócitos CD4 em
pacientes com diagnóstico comprovado de
imunodeficiência. O Pima CD4 test é destinado
ao uso em diagnósticos in vitro.
Introdução
A concentração de células T helper indica o
estado imunológico do paciente e a contagem
absoluta dessas células diminui em pacientes
com imunodeficiência. A contagem de
números absolutos de células T helper é uma
parte essencial da análise inicial do estado
imunológico, do monitoramento da evolução da
imunodeficiência com o passar do tempo e da
resposta ao tratamento. 1,2
Princípio do teste
O Pima CD4 test é composto por um Pima CD4
test cartridge descartável e pelo Pima Analyser.
Esse teste permite determinar a contagem
absoluta de células T helper no sangue total.
O Pima CD4 test cartridge descartável é
equipado com meios para recolha de cerca de
25 μL de amostra e contém reagentes secos
necessários para a realização do teste. O Pima
CD4 test é realizado com o Pima CD4 test
cartridge, e nenhuma parte do Pima Analyser
entra em contato com a amostra em momento
algum do procedimento. Assim, os riscos de
contaminação do Analyser e de contaminação
cruzada das amostras são minimizados entre
as medições. Após a inserção do Pima CD4 test
cartridge no Analyser, o movimento peristáltico
transporta a amostra até o compartimento de
incubação, onde a amostra interage com os
anticorpos específicos marcados com dois
corantes fluorescentes diferentes que emitem luz
em dois comprimentos de onda distintos (corante
1 e corante 2).
Um anticorpo é um monoclonal anti-humano
CD3 conjugado ao corante 1.
O segundo anticorpo é o monoclonal antihumano
CD4 conjugado ao corante 2.
Após um período de incubação definido, a
amostra marcada é transferida para o canal de
detecção do cartucho.
O Pima Analyser está equipado com imagens
ópticas fluorescentes multicoloridas em
miniatura. Os sinais fluorescentes são
detectados por uma câmera interna e analisados
com software de algoritmos patenteado e
incorporados no computador. As células
T helper transportam ambos os antígenos
superficiais CD3 e CD4, e portanto, emitem luz
em comprimentos de onda específicos para os
dois conjugados de anticorpo-corante.
Isso permite diferenciar especificamente as
células T helper de outros tipos de célula
sanguínea que transportam apenas um dos
dois antígenos superficiais. Os resultados são
exibidos pelo Pima Analyser como cells/μL.
Os resultados também são armazenados em um
arquivo interno e atribuídos à ID de uma amostra
que é digitada pelo operador no Pima Analyser,
assim como a data/hora em que o teste foi
realizado. Os dados podem ser recuperados e
exportados pelo operador a qualquer momento
após o teste. Uma impressora Pima Printer
externa pode ser conectada ao Pima Analyser
por USB para imprimir os resultados dos testes.
Conteúdo e Estocagem do
pacote
Materiais fornecidos
Cada caixa Pima CD4 contém:
• 25 cartuchos de teste embalados
individualmente (catálogo n o 260100025) ou
100 cartuchos de teste embalados
individualmente (catálogo n o 260100100)
• 1 Pima CD4 Guia do cartucho
Estocagem
Estocar entre 2 a 30° C
Materiais necessários, mas não fornecidos
• Pima Analyser
• pipeta volumétrica ou de transferência
(somente para amostras de sangue venoso)
• lancetas esterilizadas* (para amostras de
sangue capilar)
* recomendadas: Safety-Lancet Super, Sarstedt,
Alemanha. No caso de uso de outras lancetas,
consulte as instruções específicas do fabricante
legal.
• algodões embebidos em álcool
• algodões secos
• curativo
Pima CD4 Test Cartridge
O Pima CD4 test cartridge consiste na base
sólida do cartucho de plástico de cor preta,
uma tampa de plástico de cor laranja 1 ,
um Sample Collector para aplicar a amostra
de sangue 2 , uma janela de controle para
verificar o volume suficiente de amostra
3 , um canal de detecção com uma tampa
transparente 4 , um tubo de silicone na parte
traseira para permitir o movimento do líquido
no cartucho e uma tampa traseira de cor
laranja (ambos não são exibidos na imagem).
1
2
3
4
Precauções
! NÃO use luvas com pó talco ou as mãos nuas.
! Permita que o cartucho atinja a temperatura
ambiente antes de abrir a embalagem
laminada.
! NÃO abra a embalagem laminada até que
esteja pronta para realizar o teste.
! Remova o cartucho da embalagem laminada
com cuidado, sem tocar a tampa do canal de
detecção.
! NÃO use cartuchos que estejam úmidos.
! NÃO use os cartuchos caso a embalagem
laminada estiver danificada.
! NÃO use cartuchos que apresentem datas de
validade expiradas impressas na etiqueta da
embalagem.
! NÃO remova o Sample Collector até que a
janela de controle do cartucho esteja cheia de
sangue.
! NÃO tente separar a tampa de plástico laranja
da base do cartucho.
! NÃO feche a tampa de plástico laranja até que
o cartucho esteja repleto de sangue.
! NÃO toque na tampa transparente do canal de
detecção. Tampas danificadas do canal
de detecção podem provocar uma mensagem
de erro.
! NÃO toque nem tente esticar o tubo de
silicone. Tubos danificados podem provocar
uma mensagem de erro.
! NÃO tente remover a tampa posterior laranja
do cartucho.
! NÃO abra a bolsa dessecante incluída na
embalagem laminada.
! Descarte todos os resíduos contaminados de
modo adequado, seguindo os regulamentos
federais, estaduais e municipais,
ou incenere-os.
! Para minimizar erros de identificação da
amostra, cada cartucho deve apresentar a ID
de amostra correspondente na área fornecida
do rótulo da ID do cartucho.
Siga as orientações adequadas para o controle de
infecção sobre a manipulação das amostras de sangue
e todos os itens relacionados.
Nota: o resíduo branco visível no capilar EDTA NÃO indica um defeito no
cartucho. Isso resulta do processo normal de fabricação. O resíduo será
dissolvido quando tiver contato com a amostra de sangue.
Coleta da amostra
Coleta de sangue total por lanceta 3
(veja a figura do fluxo de trabalho no verso)
1. Prepare o paciente para a coleta da amostra
com lanceta. Os melhores locais para a
punção digital são o terceiro e o quarto
dedos da mão (veja a figura n o 4). Não
use a ponta nem o centro da almofada
do dedo. Evite o lado lateral do dedo em
que há menos tecido mole, onde vasos
e nervos estejam localizados e onde o
osso estiver mais próximo da superfície.
O segundo dedo (indicador) normalmente
tem a pele mais espessa e calosa. O quinto
dedo normalmente tem menos tecido mole
sobreposto ao osso. Evite picar dedos que
estejam frios ou cianóticos, inchados, com
cicatrizes ou com erupções. Evite os dedos
com anéis.
2. Aqueça os dedos, se necessário (veja a
figura n o 5). Peça ao paciente para deixar as
mãos viradas para baixo para aumentar o
fluxo sanguíneo no dedo.
Nota: o paciente deve estar sempre
posicionado num lugar mais alto em relação
à pessoa realizando o teste.
3. Limpe a ponta do dedo escolhido de modo
correto, com um algodão embebido em
álcool, e deixe o álcool secar ao ar
(veja a figura n o 7).
4. Retire um Pima CD4 test cartridge da
embalagem laminada e abra a tampa
de plástico laranja para expor o Sample
Collector por completo. Ajuste o Sample
Collector, se necessário (veja a figura
na pag. 3). Guarde a embalagem caso o
Analyser não consiga ler o código de barras
do cartucho.
5. Use uma lanceta esterilizada para picar
a pele ao lado do centro da almofada do
dedo. Para obter uma amostra de sangue
representativa, um fluxo sanguíneo
constante é de extrema importância (veja as
ilustrações de 11 a 15). Ao usar uma lanceta
automática, é essencial pressionar a lanceta
com firmeza no dedo e manter contato ao
ejetá-la. Não aperte nem aplique muita força
repetitiva (espremedura) no local; isso pode
resultar em hemólise ou em contaminação
da amostra com fluido do tecidos. Se
necessário, massageie o dedo com cuidado
para garantir um fluxo sanguíneo constante.
6. Retire as primeiras gotas de sangue com um
algodão seco (veja as ilustrações de 16 a
18). Verifique se o fluxo sanguíneo constante
gera gotas de sangue grandes o suficiente.
Se necessário, retire outra gota, até o sangue
fluir livremente.
7. Deixe o sangue fluir livremente do dedo picado
direto para o Sample Collector. Para fazer
isso, segure o cartucho em um ângulo de 45°
para coletar a amostra (veja a ilustração n o
19). Aguarde até o capilar do Sample Collector
ficar totalmente cheio de sangue.
Em seguida, retire o cartucho do dedo e
permita que o paciente aplique pressão direta
no local picado com um algodão seco e limpo
(veja a ilustração n o 8, 20).
8. Segure o cartucho na vertical e observe a
janela de controle para verificar se há sangue
suficiente para a amostra (veja a figura n o 21).
Sangue suficiente é atingido quando o capilar
visível na janela de controle ficar cheio de
sangue.
9. Aperte o clipe do Sample Collector entre
o polegar e o indicador e retire o Sample
Collector do cartucho com um movimento
para cima contínuo (veja a figura n o 22).
Descarte como resíduo biologicamente
nocivo.
10. Feche a tampa de plástico laranja por
completo (veja as figuras 23 a 25).
11.É recomendado inserir um Pima CD4 test
cartridge no Pima Analyser imediatamente (no
máximo de 5 minutos) depois de coletar uma
amostra de sangue (veja as figuras 26 e 27).
12.Aplique o curativo no dedo do paciente
(veja a figura n o 28).
Coleta de sangue total por venopunção 4
1. Colete o sangue de modo asséptico por
venopunção em um tubo esterilizado para
coleta de sangue com EDTA
(ácido etilenodiamino tetra-acético).
2. Inverta o tubo de coleta de 8 a 10 vezes.
3. Estoque à temperatura ambiente (18 a 28° C).
A amostra deve ser analisada dentro de
36 horas após a coleta.
4. Antes de retirar a amostra para teste, inverta
o tubo de coleta de 10 a 15 vezes para
misturar a amostra.
5. Use a pipeta volumétrica ou de transferência
para aplicar a amostra de sangue no Sample
Collector do Pima CD4 test cartridge.
6. Continue conforme descrito a partir da etapa
8 da seção anterior.
Procedimento de teste
1. Adicione a amostra ao Pima CD4 test
cartridge (consulte Coleta da amostra para
obter detalhes).
2. Selecione «Run Test» no Pima Analyser.
3. Insira o Pima CD4 test cartridge no Pima
Analyser na direção indicada pela seta
no cartucho. Siga as instruções na tela
ou consulte o Guia do Usuário do Pima
Analyser para obter detalhes sobre como
dar continuidade à análise.
4. Retire o Pima CD4 test cartridge quando
solicitado pelo Pima Analyser e leia o
resultado.
Resultados
Os resultados são calculados automaticamente
pelo Pima Analyser. A contagem absoluta
de células T helper é exibida na primeira das
quatro janelas de resultados do Analyser.
O operador tem a opção de imprimir o resultado
através de uma Pima Printer externa. Para obter
informações adicionais, consulte o Guia do
Usuário do Pima Analyser.
Controle de qualidade e
aceitação dos resultados
Funções de controle de qualidade
incorporadas
O Pima CD4 test cartridge contém funções
incorporados de controle para verificar a
funcionalidade do Analyser e do reagente.
As verificações a seguir são realizadas
automaticamente assim que o cartucho é
inserido no Pima Analyser:
• Data de validade: o código de barras
linear do Pima CD4 test cartridge contém
informações sobre a data de validade que
são verificadas pelo Pima Analyser antes da
análise. Se o prazo de validade do cartucho
estiver vencido, a análise não será iniciada e
o cartucho será rejeitado. Se o Pima Analyser
não conseguir ler o código de barras,
o código numérico poderá ser inserido
manualmente pelo operador. Esse código
está impresso na embalagem do cartucho,
abaixo do código de barras linear.
• Volume da amostra: o Pima Analyser verifica
se um volume suficiente da amostra foi
colocado no Pima CD4 test cartridge. Se uma
quantidade insuficiente da amostra tiver sido
colocada no cartucho de teste, a análise não
será iniciada e uma mensagem de erro será
exibida pelo Analyser.
• Validação do reagente: a estabilidade dos
reagentes de teste é validada para cada
Pima CD4 test cartridge individualmente
com um controle de reagente incorporado
no cartucho. Se os resultados de validação
do reagente estiverem fora dos limites
estipulados durante a fabricação, uma
mensagem de erro será exibida pelo Analyser.
• Funcionamento do equipamento: as
funções de controle fluorescente do Pima
CD4 test cartridge são analisados para
que se possa determinar a funcionalidade
do Pima Analyser. Se os resultados do
controle fluorescente estiverem fora dos
limites estipulados durante a fabricação,
uma mensagem de erro será exibida pelo
Analyser.
Várias verificações adicionais são realizadas
durante a análise. Se alguma verificação não
for aprovada, o Pima Analyser exibirá uma
mensagem de erro. Consulte o Guia do Usuário
do Pima Analyser para obter detalhes sobre
mensagens de erro.
Guia do cartucho 2 Guia do cartucho 3 Guia do cartucho 4 Guia do cartucho
5

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Pima CD4
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