noções gerais sobre outras ciências forenses - Plano de estudos do ...

Faculdade de Medicina da Universidade do Porto
Medicina Legal / Noções Gerais sobre outras ciências forenses
pois os “primers” usados são marcados com fluorescência. Para além de que, paralelamente à
migração das amostras de DNA em estudo, migram vários padrões externos (“sizer” externo) e
padrões internos adicionados a todas as mostras a estudar (“sizers” internos). Os referidos
padrões são reconhecidos pelo software e servem para construir curvas de calibração, eliminando
as diferenças de mobilidades electroforéticas que podem existir em diferentes “lanes”. Deste
modo, é possível eliminar automaticamente as variações da mobilidade electroforética, as quais
podiam conduzir a uma tipagem errada dos alelos.
Com um sequenciador é possível a tipagem simultânea de vários sistemas, pelo que é necessária
uma quantidade inferior de DNA molde, o que constitui uma grande vantagem na resolução de
casos com interesse forense em que se dispõe de pequenos vestígios, com quantidades exíguas
de DNA.
A Perkin-Elmer possui vários modelos de sequenciadores automáticos, dos quais podemos
destacar o modelo ABI 310 e o ABI 3100 (electroforese capilar), que possuímos no nosso
laboratório que, para além das vantagens atrás expostas, possibilitam o estudo de vários
sistemas, designadamente loci STR, em que se verifique a sobreposição do tamanho dos alelos,
porque os distintos primers, para amplificação de cada sistema, são marcados com diferentes
fluorocromos, ou seja, com cores diferentes. Estes sequenciadores usam a electroforese capilar,
em vez dos geis de poliacrilamida utilizados noutros modelos, obviando a preparação e
manipulação do gel o que, muitas vezes, representava muito trabalho laboratorial, até porque nem
sempre os geis tinham a qualidade requerida para que se obtivesse bons resultados. A
electroforese capilar, entre outras vantagens, possui uma grande sensibilidade que é de grande
interesse, especialmente quando a quantidade de produto amplificado é exígua.
Por isso, de uma maneira geral, o uso dos sequenciadores apresenta muitas vantagens
relativamente aos processos manuais, designadamente o facto de obviar a necessidade da
manipulação do gel, após a electroforese, para a detecção dos produtos de PCR, ao contrário do
que ocorre quando a técnica empregue não é automática, em que é necessária a exposição
autorradiográfica do gel ou a coloração com nitrato de prata.
Outra vantagem a registar é o facto da análise dos resultados ser também automatizada, através
da utilização de software adequado, permitindo armazenar os dados em bases de dados, para
posteriores análises estatísticas.
Os sinais de fluorescência são conhecidos por serem lineares num maior grau de intensidades do
que as autorradiografias convencionais. Por isso, estes sistemas de detecção são, provavelmente,
mais úteis para a quantificação directa dos produtos de PCR. Este facto revela-se de especial
interesse quando se possui mistura de amostras provenientes de mais de um indivíduo, pois o
tamanho dos picos obtidos dá uma ideia do material celular existente de cada indivíduo, por
exemplo, nos casos de violação.